陳秋蘭，廖華衛(wèi)，蘇曉純，王光寧

木瓜為薔薇科植物貼梗海棠Chaenomeles speciosa(Sweet) Nakai的干燥近成熟果實，習稱“皺皮木瓜”，味酸、溫，入肝、脾經(jīng)，有舒筋活絡(luò)、和胃化濕的功效，用于濕痹拘攣、腰膝關(guān)節(jié)酸重疼痛、暑濕吐瀉、轉(zhuǎn)筋攣痛、腳氣水腫等。化學成分主要有黃酮類、萜類、有機酸類、多糖、鞣質(zhì)、果膠等[1]，研究表明皂苷類成分是木瓜保肝、抗炎的有效部位之一[2~3]，炮制對木瓜中皂苷類成分的影響尚未見報道，因此本文對木瓜不同炮制品中總皂苷的含量進行比較，分析炮制因素對總皂苷成分溶出的影響，從而為揭示木瓜炮制機理做出有益的探索。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

紫外分光光度計2450（日本島津公司）、十萬分之一電子天平BP211D、HH-6恒溫水浴鍋、DS-8510型超聲波清洗器、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。

1.2 試藥

1.2.1 試劑 甲醇、乙酸乙酯、石油醚、高氯酸、正丁醇、冰醋酸、香草醛、無水乙醇均為分析純，黃酒（四川巨龍食品有限公司）為食品級。

1.2.2 藥材與對照品 木瓜藥材（購于廣州柏盛堂中藥有限公司，由廣東藥學院中藥學院中藥資源系馬鴻雁博士鑒定為薔薇科植物貼梗海棠Chaenomeles speciosa（Sweet）Nakai干燥近成熟果實）；齊墩果酸對照品（供含量測定用，批號：110713-200910，中國藥品生物制品檢定所）。

2 方法與結(jié)果

2.1 炮制品的制備

通過查閱相關(guān)文獻[4]及各省市炮制規(guī)范整理出常用的五種木瓜飲片。

①生品

取木瓜片，置60 ℃烘箱中干燥1 h，取出，待涼后置干燥器中保存。

②炒黃品

取干燥木瓜片20 g，置炒制容器中，文火加熱，炒至表面微黃，取出放涼，篩去碎屑，待涼后置干燥器中保存。

③炒焦品

取干燥木瓜片20 g，置炒制容器中，文火加熱，炒至表面微焦，取出放涼，篩去碎屑，待涼后置干燥器中保存。

④鹽炙品

取干燥木瓜片20 g，照2010版《中國藥典》附錄炮制通則[5]，加鹽水拌勻（食鹽用量2%），悶透，置炒制容器內(nèi)，文火加熱，炒至規(guī)定的程度時，取出，放入60 ℃烘箱烘干，取出，待涼后置干燥器中保存。

⑤酒炙品

取干燥木瓜片20 g，照2010版《中國藥典》附錄炮制通則[5]，加黃酒（10～20%）拌勻，悶透，置炒制容器內(nèi)，文火加熱，炒至規(guī)定的程度時，取出，放入60 ℃烘箱烘干，取出，待涼后置干燥器中保存。

2.2 供試品溶液的制備

2.2.1 對照品溶液 取105 ℃干燥至恒重的齊墩果酸標準品，精密稱定，置10 mL的容量瓶中用無水乙醇溶解、定容，搖勻，濃度為0.226 mg﹒mL-1，備用。

2.2.2 樣品溶液 取生品及炮制品粉末各10 g，按1∶10石油醚回流脫脂2次，每次1 h。取1 g脫脂后的干燥粉末，精密稱重，置具塞錐形瓶中，加入20 mL75%的乙醇，超聲提取兩次，每次1 h，過濾，75%乙醇洗滌濾紙和濾渣，合并濾液及洗滌液并減壓濃縮至8 mL左右，加入水飽和的正丁醇萃取至正丁醇相無色（5×10 mL），合并正丁醇層，用少量水洗滌2次，合并水層并用少量水飽和的正丁醇洗滌1次。將所有的正丁醇萃取液和洗滌液合并，減壓濃縮至干，用甲醇溶解并定容至50 mL，即得。

2.3 方法學考察

2.3.1 測定波長的確定 分別吸取0.2 mL齊墩果酸標準溶液和樣品溶液置具塞試管中，揮干溶劑，精密加入新配制的5%香草醛-冰乙酸0.2 mL，再加入高氯酸溶液0.8 mL，振搖，在70 ℃水浴中加熱15 min，取出，流水浴中冷卻10 min，加乙酸乙酯4.00 mL，搖勻。以相應(yīng)試劑做空白對照，在400～600 nm波長范圍內(nèi)掃描(見圖1，圖2)。

圖1 齊墩果酸對照品圖

圖2 樣品溶液圖

由圖分析可知齊墩果酸標準溶液和樣品溶液均在545 nm處有最大吸收，因此測定波長選為545 nm。

2.3.2 標準曲線 分別精密吸取齊墩果酸標準溶液0.05、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50 mL，置具塞試管中，揮干溶劑，按照2.3.1加入顯色劑，在545 nm處測定吸光度。以吸光度（A）為縱坐標，齊墩果酸的濃度（C）為橫坐標，求得回歸方程為y=0.0513x－0.0015，R2=0.9996，表明在2～22 μg﹒mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3.3 穩(wěn)定性試驗 精密吸取樣品溶液0.2mL，置具塞試管內(nèi)，揮干溶劑，按照2.3.1加入顯色劑，在545nm處每隔5min測定一次吸光度。結(jié)果表明，1h內(nèi)的吸光度RSD為1.27%，表明樣品溶液在1h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3.4 精密度試驗 精密吸取樣品溶液0.2 mL，置具塞試管內(nèi)，揮干溶劑，按照“2.3.1”加入顯色劑，在545 nm連續(xù)測定六次，記錄吸光度。結(jié)果表明：RSD為0.117%，表明儀器精密度較好。

2.3.5 重復性試驗 取6份1 g經(jīng)石油醚脫脂后的干燥木瓜粉，精密稱重，置具塞錐形瓶中，按照樣品溶液制備方法提取精制。按照“2.3.1”加入顯色劑在545 nm處測定吸光度，結(jié)果總皂苷平均含量為0.817%，RSD為1.98%，表明該方法重復性良好。

2.3.6 加樣回收率試驗 取已知含量樣品粉末1 g，平行6份，精密稱定，置具塞錐形瓶中，按照樣品溶液制備方法提取精制。精密吸取六份樣品溶液各0.1 mL，置具塞試管內(nèi)，分別準確加入0.0226 mg﹒mL-1的齊墩果酸標準溶液1.5 mL（含齊墩果酸33.9 μg），揮干溶劑，按照“2.3.1”加入顯色劑，在545 nm處測定吸光度，計算回收率，結(jié)果見下表。

表1 加樣回收率實驗

2.4 樣品含量測定

取各炮制品粉末1 g，平行3份，按照樣品溶液制備方法提取精制，再分別精密量取各樣品溶液0.2 mL，加入具塞試管中，揮干溶劑，按照“2.3.1”加入顯色劑，在545 nm處測定吸光度，計算各樣品中總皂苷的含量，結(jié)果見下表。

表2 木瓜各炮制品中總皂苷含量

3 討論

3.1 顯色條件考察

香草醛-高氯酸是常用的三萜皂苷顯色劑，顯色靈敏度高，本實驗對其顯色反應(yīng)的加熱溫度、加熱時間、加入的顯色劑比例等考察確定5%香草醛-冰醋酸溶液0.2 mL、高氯酸0.8 mL、反應(yīng)溫度70 ℃、反應(yīng)時間15 min作為木瓜總皂苷比色法測定的顯色條件。

3.2 含量比較

從實驗結(jié)果來看，酒炙品、炒黃品和炒焦品中總皂苷的含量均高于生品，且以酒炙品為最高，依次為炒焦品、炒黃品；而鹽炙品中總皂苷的含量明顯低于生品。在本實驗中影響皂苷類成分溶出的炮制影響因素主要有溫度、時間和輔料，根據(jù)結(jié)果進行分析，溫度和時間會有利于皂苷類成分的溶出，輔料酒是良好的溶媒，也有利于皂苷類成分的溶出，因此酒炙品中總皂苷含量最高。關(guān)于鹽炙品中皂苷含量為何較低，輔料食鹽在溶出過程是否有影響還有待于進一步研究。

[1] 吳虹,魏偉,吳成義.木瓜的化學成分及藥理活性的研究[J].安徽中醫(yī)學院學報,2004,23(2):62.

[2] 戴敏,魏偉,汪倪萍.木瓜苷對大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎的治療作用[J].中國藥理學通報,2003,19(3):340.

[3] 吳虹,戴敏,魏偉,等.木瓜中不同提取物的藥效學研究[J].中國中醫(yī)藥科技,2004,11(2):98.

[4] 胡居杰,汪電雷.木瓜炮制歷史沿革[J].安徽中醫(yī)學院學報,2000,19(6):42.

[5] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:402.