羅 珊,虞 歡,王 玲,黃瓊瑤,劉年猛,孫 慧,彭 飛

（湖南師范大學(xué)醫(yī)學(xué)院寄生蟲學(xué)教研室,湖南 長沙 410013）

藥物滅螺在防治血吸蟲病感染及流行中具有極其重要的意義。目前,化學(xué)控制仍然是滅螺的最重要方法,但化學(xué)滅螺劑價(jià)格昂貴,對人、畜、魚等多有毒害,且易造成環(huán)境污染,且有限的幾種化學(xué)滅螺劑易致螺產(chǎn)生耐藥性。植物殺螺劑是世界衛(wèi)生組織(WHO)推薦開發(fā)的殺螺劑。其具有資源豐富、可就地取材、易生物降解、對環(huán)境污染小等優(yōu)點(diǎn),而成為藥物滅螺研究的重要內(nèi)容。迄今為止大約有1000多種植物被用于滅螺實(shí)驗(yàn),已有近百種植物殺螺劑有效成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)基本闡明,分屬于皂苷、鞣質(zhì)、萘醌、烯基酚、黃酮、一萜倍半萜、生物堿及呋喃香豆素等化學(xué)類[1]。從植物中提取的某些生物堿類化合物有較強(qiáng)的殺螺作用,如：麻風(fēng)樹的種子、枝、葉中提取的生物堿[2]；棕櫚科植物檳榔種子中提取的生物堿-檳榔堿[3]。課題組的前期研究已證實(shí),我國特有的物種-罌粟科(Papaveraceae)血水草屬植物血水草(Eomecon chionantha Hance)的根及根莖中提取的生物總堿具有殺滅釘螺的作用[4],對魚毒性較低[5]。從血水草生物總堿中可分離到含量豐富的單體CHE,呈淡黃或淺白色粉末狀,目前研究發(fā)現(xiàn)其具有抗菌、抑菌作用,具有清熱解毒、抗菌消炎的作用。為探尋CHE殺滅日本血吸蟲尾蚴的效果,我們進(jìn)行了玻片法滅蚴、實(shí)驗(yàn)室防護(hù)動(dòng)物血吸蟲感染的實(shí)驗(yàn),證實(shí)CHE有較好殺滅日本血吸蟲尾蚴、防護(hù)動(dòng)物感染的作用,具體報(bào)道如下。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 血水草生物堿制備

秋季從湖南省桃江縣人形山采集血水草,取根及根莖,洗凈、晾干,碾成粗末,按常規(guī)方法[6]提取CHE,備用。

1.1.2 陽性釘螺、尾蚴

陽性釘螺由湖南省血吸蟲病防治研究所提供,實(shí)驗(yàn)當(dāng)日逸放日本血吸蟲尾蚴。

1.1.3 小白鼠

129只,昆明鼠 22～24克,單性(雌性),購自中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。

1.2 方法

1.2.1 玻片法滅蚴實(shí)驗(yàn)

采用玻片法滅蚴[7],置濃度為100 mg/L、50 mg/L、25mg/L、12.5mg/L、6.25mg/L、3.125mg/L 的 CHE藥液。取18mm×18mm蓋玻片置于載玻片上,分別吸取各濃度的藥液100μL滴加于蓋玻片上,每片在解剖鏡下計(jì)數(shù)血吸蟲尾蚴50條左右,觀察15 min、30 min、60 min、120 min尾蚴存活情況。同時(shí)設(shè)清水對照。保持室溫23～25℃。尾蚴死活判斷標(biāo)準(zhǔn)：鏡下斷尾、表皮腫脹,用解剖針觸及尾蚴,不活動(dòng)者均判為死亡,記算死亡率。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)室防護(hù)動(dòng)物血吸蟲感染實(shí)驗(yàn)

2 結(jié)果

2.1 玻片法滅蚴實(shí)驗(yàn)

尾蚴接觸低濃度CHE溶液后短時(shí)間內(nèi)活動(dòng)與對照無明顯差異,隨時(shí)間延長主要表現(xiàn)為活力下降、不活動(dòng),在死亡過程中大多無明顯斷尾。尾蚴接觸 3.125mg/L、6.25mg/LCHE溶液 30min無死亡,60min死亡率為 22%、36%,12.5mg/L、25mg/L 30min無死亡,60min死亡率為74%、88%。隨著濃度增高,尾蚴 100%死亡時(shí)間縮短,50mg/L、100mg/L,60min內(nèi)尾蚴全部死亡。12.5mg/L以上,120min時(shí)尾蚴全部死亡。結(jié)果詳見表1。

表1 CHE殺滅尾蚴實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.2 實(shí)驗(yàn)室防護(hù)動(dòng)物血吸蟲感染實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。用SPSS17.0軟件作卡方檢驗(yàn),100mg/L、50mg/L濃度的防護(hù)率與對照組差異有顯著性(P<0.05)。經(jīng)實(shí)驗(yàn)室研究證實(shí)CHE有較好的殺滅日本血吸蟲尾蚴的作用。實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)：動(dòng)物實(shí)驗(yàn)50mg/L即有顯著保護(hù)效果,明顯優(yōu)于鏡下觀察尾蚴存活情況的結(jié)果,可能為經(jīng)藥物浸殺后尾蚴雖然未死亡但已失去穿透能力,因而無法感染所致?？蛇M(jìn)一步作現(xiàn)場實(shí)驗(yàn)及制成涂膚劑進(jìn)行皮膚防護(hù)實(shí)驗(yàn)。

表2 CHE殺滅血吸蟲尾蚴的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3 討論

血水草別名水黃連,系罌粟科白屈菜族血水草屬多年生草本植物,廣泛分布在我國長江流域、華南、華東、西南地區(qū),西北秦嶺也有分布。據(jù)《新華本草綱要》記載,其味苦,性寒,有小毒,具有清熱解毒之功效。民間用于治療急性結(jié)腸炎、眼結(jié)膜炎、疔瘡癰腫及毒蛇咬傷等癥[8]。血水草生物總堿的主要成分為白屈菜紅堿、血根堿 (Sanguinarine)、原阿片堿(Protopine)、α-別隱品堿(α-allocyptopine)、氧化血根堿(Oxysanguinarine)、白屈菜紅堿 (Chelerythridimerine),屬苯駢菲啶(Benzophenanthrdine)型生物堿[9]。

本研究證實(shí)：①CHE在短時(shí)間、低濃度下能殺滅水體中的日本血吸蟲尾蚴；②CHE在50mg/L濃度時(shí)即能較好地防護(hù)動(dòng)物感染日本血吸蟲尾蚴,且其防護(hù)動(dòng)物感染尾蚴的效果明顯強(qiáng)于對尾蚴的直接殺滅效果,可能是由于經(jīng)藥物浸殺后的一部分尾蚴雖然未死亡但已失去穿透能力,因而無法進(jìn)入動(dòng)物體內(nèi)或是能夠進(jìn)入動(dòng)物體內(nèi)但其生存能力已明顯減弱的緣故。本研究中單體CHE殺滅尾蚴及防護(hù)動(dòng)物感染的效果與課題組前期的血水草生物總堿殺滅釘螺、尾蚴和防護(hù)動(dòng)物感染研究結(jié)果[10]相比,CHE的作用效果要稍弱于總堿,提示血水草總堿中可能包含多種有效成分,總堿的藥效作用是幾種有效、無效、強(qiáng)效或弱效成分的組合效果。據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道,植物滅螺劑的純度在一定程度上正比于其滅螺效果。Tripathi等研究Punica granatum和Canna indica兩種植物滅螺劑殺螺效果時(shí),發(fā)現(xiàn)其色譜純提取物的殺螺效果明顯高于乙醇粗提物的殺螺效果,在提高植物滅螺劑純度的同時(shí)也可大大減少滅螺劑的實(shí)際用量,這樣可改善因植物滅螺劑腐爛變質(zhì)對河流湖泊水質(zhì)造成的影響[11]。進(jìn)一步試驗(yàn)尋找、提純血水草中有效單體成分的意義重大。

試驗(yàn)結(jié)果顯示CHE能殺滅日本血吸蟲尾蚴、防護(hù)動(dòng)物感染血吸蟲病,是一種好的植物滅蚴劑。本研究突破性地采用血水草分離提純后的單體成分-白屈菜紅堿為試驗(yàn)藥物,開辟了血水草新的用途,同時(shí)也為今后進(jìn)一步研究其他血水草總堿中的單體成分和量化血水草植物殺螺滅蚴劑提供參考依據(jù)。

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