劉豐賢

（湖南師范大學(xué)醫(yī)學(xué)院，湖南 長(zhǎng)沙 410013）

丹參調(diào)肝顆粒是由丹參、虎杖、白芍、枸杞、白術(shù)、枳殼、郁金、豬苓等12味中藥組成，功能：行氣活血，調(diào)理肝脾。主治：氣滯血瘀，肝脾不調(diào)，證見(jiàn)兩脅刺痛或痛有定處，脅下痞塊，面色晦暗，赤縷紅掌，皮膚甲錯(cuò)，神疲心煩納差，腹脹便溏，舌淡紫或紫暗，脈弦澀。慢性乙型肝炎，肝硬化而見(jiàn)上述癥狀者[1]。本實(shí)驗(yàn)主要研究了丹參調(diào)肝顆粒的質(zhì)量控制方法，實(shí)驗(yàn)表明薄層色譜法可以方便快捷的對(duì)制劑的藥材進(jìn)行定性檢查。

1 儀器及藥品

1.1 主要儀器

FA1204B電子分析天平(上海精科)；RE-2000旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠)；ZF7C三用紫外分光儀(上?？等A生化儀器制造有限公司)。

1.2 主要藥品及試劑

硅膠G(青島海洋化工廠)；白芍苷對(duì)照品、丹參酮IIA對(duì)照品、丹酚酸B對(duì)照品、虎杖對(duì)照藥材(均為中國(guó)藥品生物鑒定所提供)；甲醇、甲苯、氯仿、正丁醇、乙酸乙酯、乙醚等均為分析純。

2 方法和結(jié)果

2.1 丹參酮IIA薄層鑒別[2]

2.1.1 供試品溶液的制備

取本品粉末10 g,加乙醚50 mL,振搖,放置1h,濾過(guò),濾液揮干,殘?jiān)右宜嵋阴? mL,移至中性氧化鋁柱 (100目-120目,5 g,內(nèi)徑15 mm)上,用95%乙醇10 mL洗脫,收集洗脫液,于冰箱放置20 min,濾過(guò),揮干溶劑,殘?jiān)右宜嵋阴? mL使溶解,作為供試品溶液。

2.1.2 對(duì)照品溶液的制備

取丹參酮IIA0.5 mg,加乙酸乙酯1mL使溶解,作為對(duì)照品溶液。

2.1.3 陰性對(duì)照品的制備

按處方量比例取缺丹參的其余藥材,模擬工藝方法制備成陰性樣品,照供試品溶液制備方法同法制備陰性對(duì)照溶液。

2.1.4 薄層鑒別

照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005附錄VI B)試驗(yàn)[1],吸取上述供試品溶液10 μL,陰性對(duì)照品10 μL,對(duì)照品溶液各5 μL,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,用石油醚-醋酸乙酯(8:2),展開,取出,晾干。供試品色譜中在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn)；在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同的暗紅色斑點(diǎn),陰性對(duì)照無(wú)干擾。結(jié)果見(jiàn)圖1。

2.2 丹酚酸B的薄層鑒別[3]

2.2.1 供試品溶液的制備

取本品粉末 5 g，加水10 mL充分振搖使溶解，加鹽酸至pH到2，乙酸乙酯萃取3次，每次20 mL，合并萃取液，減壓回收乙酸乙酯至干，加甲醇2 mL溶解，作為供試品液。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備

取丹酚酸B 1 mg，加甲醇1 mL，作為對(duì)照品溶液。

2.2.3 陰性對(duì)照品的制備

按處方量比例取缺丹參的其余藥材,模擬工藝方法制備成陰性樣品,照供試品溶液制備方法同法制備陰性對(duì)照溶液。

2.2.4 薄層鑒別

照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005附錄VI B)試驗(yàn)[1],吸取上述供試品溶液10 μL,陰性對(duì)照品10uL,對(duì)照品溶液各5 μL,分別點(diǎn)于同一硅膠F254薄層板上,用甲苯-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(2:3:4:2:0.5),展開,取出,晾干。紫外燈下檢視，供試品色譜中在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn)；在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色斑點(diǎn),陰性對(duì)照無(wú)干擾。結(jié)果見(jiàn)圖2。

2.3 虎杖的薄層鑒別[3]

2.3.1 供試品溶液的制備

取本品20 g，研成細(xì)粉，加甲醇50 mL，超聲處理30 min，濾過(guò)，濾液水浴蒸干，殘?jiān)铀?0 mL、鹽酸2 mL，超聲處理30 min，冷卻，用乙醚提取5次，每次15 mL，合并乙醚液，用水洗滌2次，每次20 mL，棄去水溶液，乙醚液揮干，殘?jiān)? mL甲醇使溶解，作為供試品溶液。

2.3.2 取虎杖對(duì)照藥材

1 g，加甲醇 5 mL，超聲處理 15 min，濾過(guò)，濾液水浴蒸干，殘?jiān)? mL甲醇使溶解，制成對(duì)照藥材溶液。

2.3.3 陰性對(duì)照品的制備

另取除虎杖外的其他處方量藥材，按制備工藝制成缺虎杖的陰性樣品，同法制成陰性樣品溶液。

2.3.4 薄層鑒別

照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005附錄VI B)試驗(yàn)[1],分別吸取上述溶液各約10 μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以苯-醋酸乙酯-甲醇-甲酸-水 (12:4:0.8:0.15:2)為展開劑，展開，取出，晾干，氨熏顯色。供試品色譜中在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，缺虎杖的陰性樣品無(wú)干擾。結(jié)果見(jiàn)圖3。

2.4 白芍的薄層鑒別[3]

2.4.1 供試品溶液的制備

取本品15g，研成細(xì)粉，加甲醇回流提取二次，每次加甲醇50 mL提取1 h，濾過(guò)，濾液水浴蒸干，殘?jiān)铀?0 mL使溶解，用水飽和正丁醇提取4次，每次25 mL，合并正丁醇液，先用氨試液洗滌2次，每次20 mL，再用水洗滌 2次，每次 20 mL，棄去氨水液、水液，正丁醇液水浴蒸干，殘?jiān)?0 mL水使溶解，上D101大孔樹脂柱 (約10 g，內(nèi)徑1 cm，長(zhǎng)約12 cm，樹脂先用70%乙醇沖洗，再用水沖洗，重復(fù)以上操作兩次，水濕法裝柱)，用50 mL水洗脫，收集水洗脫液后再上柱洗脫后，棄去水洗脫液，先用40%乙醇60 mL洗脫，收集洗脫液，水浴蒸干，殘?jiān)? mL甲醇使溶解，作為供試品溶液。

2.4.2 對(duì)照品溶液的制備

另取芍藥苷對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL中含1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.4.3 另取除白芍外的其他處方量藥材，按制備工藝制成缺白芍的陰性樣品，同法制成陰性樣品溶液。

2.4.4 薄層色譜

照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005附錄VI B)試驗(yàn)[1],分別吸取上述溶液各約10 μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40:5:10:0.2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，105℃烘烤至斑點(diǎn)顯色。供試品色譜中在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上不顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無(wú) 干擾。結(jié)果見(jiàn)圖4。

Fig1 TLC chromatograms of Tanshinone IIA

Fig2 TLC chromatograms of Salvianolic acid B

Fig3 TLC chromatograms of Polygonum cuspidatum

Fig4 TLC chromatograms of white peony roots

3 討論

在做丹參的薄層色譜鑒別時(shí)曾選用 (《中國(guó)藥典》2005年版一部)丹參的鑒別項(xiàng)下制備方法,用乙醚提取液制備的供試品溶液,點(diǎn)于硅膠G薄層板上,以苯-乙酸乙酯 (19:1),石油醚-乙酸乙酯(8:1和8：2及8:3),環(huán)己烷-乙酸乙酯 (6:1及7:1)等不同溶劑系統(tǒng)為展開劑,展開,結(jié)果分離效果均不理想,成分之間干擾大,斑點(diǎn)擴(kuò)散呈花紋。由于本方中含有脂肪油類成分,易被乙醚提取,在用薄層層析時(shí)影響分離,因此,改用中性氧化鋁柱處理樣品,制備成供試品溶液,用上述不同溶劑系統(tǒng)為展開劑展開,石油醚-醋酸乙酯 (8:2)為展開劑分離效果良好。同時(shí)由于本制劑為水提取制劑，故增加水溶性丹酚酸B的檢查，方法簡(jiǎn)單，結(jié)果可靠，確認(rèn)為本品中丹參的薄層色譜法鑒別。

其他兩味藥材白芍和虎杖，均按(《中國(guó)藥典》2005年版一部)相應(yīng)的鑒別項(xiàng)，效果較好。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本文所述方法簡(jiǎn)便、快捷，可作為丹參調(diào)肝顆粒的質(zhì)量控制方法之一。

[1]劉豐賢，劉江，周鵬.HPLC法測(cè)定丹參調(diào)肝顆粒中丹參酮ⅡA的含量[J].湖南師范大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2010,7(4):19-20.

[2]崔淑蓮,蔣建斌,喻祖青.乙肝扶正片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中成藥,2009,31(9):1385-1389.

[3]李子鴻,劉東文,李懷國(guó),等.新傷去瘀口服凍干顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究[J].中藥材,2008,5(31):763-765