胡月子，張 冉

（1.湖南師范大學醫(yī)學院，湖南 長沙 410013；2.湖南中醫(yī)藥大學第二附屬醫(yī)院，湖南 長沙 410005）

卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)常見的三大惡性腫瘤之一，其發(fā)病率高達1.4%，僅次于子宮頸癌而列居第二位，但其死亡率卻占各種婦科腫瘤的首位，且隨著年齡的增長發(fā)病率增加[1]，嚴重威脅了廣大女性患者的生命和生活質(zhì)量。卵巢位于盆腔深部，臨床腫瘤發(fā)病比較隱匿，病變早期無癥狀，缺乏特異性早期發(fā)病指征，大多數(shù)患者在就診時已為晚期，治療后復(fù)發(fā)率高達70%，五年存活率僅約25%[2]，并且易于轉(zhuǎn)移而廣泛散播，其發(fā)病的確切原因迄今尚不明確。因此，研究卵巢癌的病因及預(yù)防措施，尋找早期診斷方法，并給予有效的綜合治療，是提高卵巢癌患者五年存活率、降低復(fù)發(fā)率和死亡率的關(guān)鍵。

IL-12是由一條35kDa的p35和40kDa的p40兩個亞基組成的具有生物學活性的異二聚體促炎因子，且在體內(nèi)外都能抑制多種惡性腫瘤的生殖與轉(zhuǎn)移?，F(xiàn)已證實IL-12 p40亞基基因(IL12B)上有部分啟動子、內(nèi)含子及3'非編碼區(qū)(3'UTR)存在基因多態(tài)性[3,4]。最近的體外實驗發(fā)現(xiàn)3'UTR的單核苷酸基因多態(tài)性(SNP)與IL-12分泌增加有關(guān)[5]。許多學者對IL12B多態(tài)性與惡性腫瘤患病風險的關(guān)系進行了分子流行病學研究，包括非霍奇金淋巴瘤[6]，肝癌[7]，肺癌[8]，胃癌[9]及其他惡性腫瘤[10-12]，但其與卵巢癌患病風險的關(guān)系卻研究甚少。本研究采用PCR-RFLP法對92例卵巢癌患者及38例非卵巢癌患者卵巢組織中IL12B rs3212227基因(3'UTR A>C)進行多態(tài)性研究，為卵巢癌的基因診斷及防治提供新途徑。

1 材料與方法

1.1 研究對象

病例組卵巢癌患者92例，經(jīng)術(shù)后病理檢查確診。對照組38例，經(jīng)病理檢查為正常卵巢組織。所有組織標本均購自湖南省腫瘤醫(yī)院。

1.2 基因型測定及SNP的選擇

按照Invitrogen PureLinkTM基因DNA試劑盒操作程序提取所有新鮮組織標本中的全基因組DNA。以5'-GATATCTTTGCTGTATTTGTATAGTT-3'為上游引物，5'-AATATTTAAATAGCATGAAGGC-3'為下游引物，參照Promega Go Taq Colorless Master Mix試劑盒建立50μL的PCR反應(yīng)體系進行擴增，其產(chǎn)物為118bp的基因片段。使用酚氯仿法將其純化。純化產(chǎn)物經(jīng)TaqI酶切后進行電泳分離，變異型等位基因rs3212227C得到大小分別為92bp和26bp的兩條片段，而野生型等位基因rs3212227A則為一條118bp的片段。

1.3 統(tǒng)計學分析

采用卡方檢驗驗證多態(tài)性基因型頻率結(jié)果是否符合Hardy-Weinberg平衡。用SPSS13.0軟件對結(jié)果進行卡方檢驗，比較兩組間基因型的頻率分布差異，并計算OR值和95%可信區(qū)間(95%CI)以評估IL12B基因型與卵巢癌患病風險的關(guān)系。

2 結(jié)果

IL12B rs3212227基因多態(tài)性的頻率在病例組和對照組中的分布均符合Hardy-Weinberg平衡(P值分別為0.627和0.36)。該基因多態(tài)性頻率在病例組和對照組中的分布如表1，經(jīng)過卡方檢驗，尚不能認為病例組和對照組的IL12B基因型頻率分布有不同(P=0.086)。

表1 病例組與對照組IL12B rs3212227基因型頻率分布的比較

但CC基因型和AC基因型含有變異等位基因C，故我們將三組基因型分為變異基因型組 (CC+AC)和非變異型基因組(AA)進行統(tǒng)計學分析，如表2。結(jié)果顯示，變異基因型AC/CC組與非變異基因型AA組在病例組與對照組間的分布有顯著差異，且有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。說明IL12B rs3212227基因的變異使患者對卵巢癌的易感性更高，是卵巢癌的危險因素(OR為2.47；95%CI為1.05-5.84)。

表2 IL-12B rs3212227基因型組間頻率分布及統(tǒng)計結(jié)果

3 討論

Hardy-Weinberg平衡定律[13](Hardy-Weinberg equilibrium，HWE)是群體遺傳學中一條重要的基本法則，常作為某些遺傳推斷的基礎(chǔ)，亦成為遺傳學平衡定律。符合該遺傳學平衡定律的樣本則具有代表性和可比性。

本研究對湖南省女性卵巢癌的患病風險與IL-12B rs3212227基因多態(tài)性進行了研究，結(jié)果表明，IL-12B rs3212227基因的變異能提高卵巢癌的患病風險。越來越多的研究顯示IL-12B基因多態(tài)性與惡性腫瘤的易感性有密切關(guān)系。Ben Chaaben A等人[14]研究了其與鼻咽癌之間的關(guān)系，研究結(jié)果顯示IL-12B rs3212227變異型基因C存在于鼻咽癌患者中的頻率遠高于正常人(P=0.00005)，表明變異型基因C與鼻咽癌的易感性關(guān)系密切。在婦科腫瘤與IL-12基因多態(tài)性研究方面，Kordi Tamandani DM等人[15]研究發(fā)現(xiàn)，IL-12B rs3212227 AC+CC變異基因能型增加宮頸癌的患病風險 (OR=1.71)。我國學者Xiaojun C等人[16]對404例宮頸癌病例和404例正常中國人進行IL12B rs3212227基因型多態(tài)性研究，發(fā)現(xiàn)其與宮頸癌的發(fā)病風險有重要關(guān)聯(lián)(OR為1.29)。但另一方面，Liu L等人[17]研究了IL-12B rs3212227基因多態(tài)性與肝癌的關(guān)系，他們將869例病例和891例正常中國人納入研究，研究結(jié)果顯示IL-12B的變異基因型人群和非變異基因型人群中卵巢癌的易感性差別不大。

基因的變異導致卵巢癌發(fā)生和發(fā)展的原因可能為：變異型IL-12編碼基因阻礙了IL-12的表達，使卵巢癌患者體內(nèi)IL-12水平降低。該結(jié)果與徐霞等人[18]的研究結(jié)論相同，即卵巢癌患者血清中IL-12的表達水平顯著低于正常對照組。說明腫瘤在發(fā)生與發(fā)展過程中，由于IL-12編碼基因的變異，使患者IL-12表達受到明顯的抑制，同時也反映了卵巢癌患者的細胞免疫功能低下。低水平的IL-12沒能阻斷供給卵巢癌細胞的營養(yǎng)和氧氣，不能抑制腫瘤細胞的生長與繁殖，促使卵巢癌的發(fā)展。

本研究過程中還有很多不足之處需要改進。首先，標本的數(shù)量有限，病理標本和對照標本數(shù)量不足且相差懸殊；其次，本研究缺乏對局部IL-12表達水平的檢測，因此我們無法估計IL-12基因型與表型之間的關(guān)系；最后，本研究的所有標本均來自醫(yī)院，大部分患者在手術(shù)前可能有行放療或化療，這對IL-12基因型的檢測結(jié)果可能會有影響。因此，我們還有待進行大樣本、多區(qū)域、多民族廣泛深入的研究，將有可能為卵巢癌患病風險的預(yù)測、預(yù)防和治療提供一條新的線索和路徑。

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