梁憲如，席 強(qiáng)，李曉梅，崔 瑞，金 光，郭 義，郭永明

（1.中國(guó)人民武裝警察部隊(duì)后勤學(xué)院附屬醫(yī)院，天津 300162；2.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津 300193）

針刺內(nèi)關(guān)穴對(duì)急性心肌缺血大鼠缺血心肌基因表達(dá)譜的影響*

梁憲如1，席 強(qiáng)2，李曉梅2，崔 瑞2，金 光2，郭 義2，郭永明2

（1.中國(guó)人民武裝警察部隊(duì)后勤學(xué)院附屬醫(yī)院，天津 300162；2.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津 300193）

[目的]研究針刺對(duì)急性心肌缺血大鼠缺血心肌基因表達(dá)譜的影響。[方法]建立左前降支冠狀動(dòng)脈結(jié)扎大鼠心肌缺血模型，分組干預(yù)后分離提取缺血心肌總RNA，與大鼠全基因表達(dá)譜芯片雜交后進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)篩選得到的針刺治療過程中的差異表達(dá)基因，利用基因功能分類體系尋找和分析顯著富集差異表達(dá)基因的復(fù)合功能分類，從基因功能水平探索針刺對(duì)急性心肌缺血模型大鼠缺血心肌基因表達(dá)譜的影響。[結(jié)果]發(fā)現(xiàn)心肌缺血24h后表達(dá)上調(diào)的398條基因中，經(jīng)過間斷針刺內(nèi)關(guān)穴3次，24h后其中298條基因（占表達(dá)上調(diào)基因的74.87%）的表達(dá)出現(xiàn)不同程度的下調(diào)趨勢(shì)；心肌缺血24h后表達(dá)下調(diào)的338條基因中，經(jīng)過間斷針刺內(nèi)關(guān)穴3次，24h后其中188條基因（占總下調(diào)基因的55.62%）的表達(dá)出現(xiàn)不同程度的上調(diào)趨勢(shì)，表明針刺內(nèi)關(guān)穴對(duì)缺血心肌差異表達(dá)基因有良性調(diào)節(jié)趨勢(shì)。針對(duì)篩選出來的差異表達(dá)基因蛋白磷酸酶1B（Ppm1b）、琥珀酸輔酶A連接酶（Suclg1）、谷氨酸草酰乙酸轉(zhuǎn)氨酶2（Got2）、蘋果酸脫氫酶（Mdhl）、丙酮酸脫氫酶磷酸酶同工酶（PDP1）、延胡索酸水合酶（Fh）、羥肽酶b2（Cpb2）、酪氨酸單氧化酶激活蛋白酶（Ywhaz）、S100鈣結(jié)合蛋白a9（S100A9）、Na+/K+轉(zhuǎn)運(yùn)ATP酶B1亞基（Atp1b1）、肌鈣蛋白I（TnI）、肌球蛋白輕鏈激酶3（Myl3）、肌集鈣蛋白2（Casq2）、肌紅蛋白（Mb），其功能模塊主要涉及氧化磷酸化、線粒體電子傳遞、電子傳遞偶聯(lián)三磷酸腺苷（ATP）合成、能量代謝、磷酸鹽代謝過程、單價(jià)無機(jī)陽離子轉(zhuǎn)運(yùn)、輔酶代謝過程等。[結(jié)論]針刺內(nèi)關(guān)穴可能是通過影響上述基因，從而對(duì)急性心肌缺血發(fā)揮保護(hù)作用。

針刺；急性心肌缺血；基因功能表達(dá)

針刺作為一種有效的治療手段臨床治療缺血性心臟病取得了較好的療效，對(duì)針刺改善心肌缺血的作用機(jī)制也進(jìn)行了深入研究，但大多研究集中于神經(jīng)生理學(xué)、生物化學(xué)、免疫學(xué)及內(nèi)分泌學(xué)等研究領(lǐng)域[1]。針刺作為一種非特異的獨(dú)特療法，具有多通路、多靶點(diǎn)及多效應(yīng)的作用特點(diǎn)，既然一切生命現(xiàn)象的產(chǎn)生均依賴于分子的活動(dòng)及伴隨的相應(yīng)基因轉(zhuǎn)錄與調(diào)控的變化，而針刺對(duì)心肌缺血又具有確切療效，那么針刺在分子水平究竟能夠發(fā)揮什么樣的作用、通過哪些途徑發(fā)揮作用、對(duì)那些基因的表達(dá)與調(diào)控具有干預(yù)效應(yīng)呢？本實(shí)驗(yàn)通過結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支的方法造成大鼠心肌缺血模型，采用基因芯片技術(shù)對(duì)缺血心肌差異表達(dá)的基因進(jìn)行篩選，同時(shí)觀察針刺內(nèi)關(guān)穴對(duì)缺血心肌差異表達(dá)基因的干預(yù)作用，從基因水平探討針刺內(nèi)關(guān)治療心肌缺血的作用機(jī)制，為臨床針刺治療該病提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 對(duì)象 選擇Wistar大鼠，體質(zhì)量250～300g，2～ 3月齡。

主要儀器和試劑：MP-150生理記錄儀，由天津中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)研究中心提供。RNA抽提試劑Trizol、大鼠BiostarR-40s表達(dá)譜基因芯片（含4096個(gè)靶基因）、探針標(biāo)記雜交試劑盒、ScanArray 4000芯片掃描儀，均由上海博星基因芯片公司提供。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷闹苽洹⒎纸M和干預(yù) 參照《藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》[2]，結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支復(fù)制心肌缺血模型，模型復(fù)制前采用MP-150生理記錄儀描記心電圖，心電圖異常者去除，并通過心電圖確定造模成功。選擇模型復(fù)制成功的Wistar大鼠30只，按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為3組，假手術(shù)組，編號(hào)為A組（假手術(shù)組除不結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支外，其余手術(shù)步驟與模型組相同）；心肌缺血24h組，編號(hào)為B組；心肌缺血24h針刺治療組，編號(hào)為C組；每組10只。

以《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》[3]的穴位定位為依據(jù)，選取大鼠雙側(cè)內(nèi)關(guān)穴，24h針刺治療組于造模后即刻針刺內(nèi)關(guān)穴，行平補(bǔ)平瀉法3min，12h后再針刺1次，24h后處死動(dòng)物，處死前再針刺蓄積1次；假手術(shù)組、心肌缺血24h組每日同樣抓取，不做處理。

各組動(dòng)物在造模24h后斷頭處死，打開胸腔，迅速摘取心臟，剔除其他組織，在RNase-free的生理鹽水中迅速漂洗以去除血漬和污物，用冷凍保存管裝載，迅速投入液氮冷凍，備檢。同組標(biāo)本混合采用一步法以Trizol試劑分別提取淋巴細(xì)胞總RNA，采用Oligotex mRNA Midi Kit提取純化mRNA。取各組動(dòng)物心肌細(xì)胞的RNA，參照Schena的方法逆轉(zhuǎn)錄標(biāo)記cDNA探針并純化[4]。用Cy3-dUTP標(biāo)記A組心肌細(xì)胞（綠色熒光），用Cy5－dUTP標(biāo)記B組和C組心肌細(xì)胞（紅色熒光）。表達(dá)譜探針制備之后進(jìn)行芯片雜交及洗滌。

1.2.2 觀察指標(biāo)和分析方法 主要觀察指標(biāo)：提取各組總RNA的結(jié)果及基因芯片雜交的結(jié)果。

分析方法：對(duì)芯片行熒光掃描和結(jié)果分析。以40個(gè)管家基因?qū)υ紨?shù)據(jù)進(jìn)行標(biāo)化處理，分析Cy3、Cy5熒光信號(hào)強(qiáng)度，計(jì)算Cy5/Cy3值。基因差異表達(dá)的判定標(biāo)準(zhǔn)：1）該基因點(diǎn)的Cy3、Cy5信號(hào)值皆大于200，或者其中之一大于800。2）Cy5/Cy3信號(hào)比值Ratio>2.0或<0.5（兩者信號(hào)值相差2倍以上，Ratio值超出2.0或少于0.5越多表示差異越明顯）。

對(duì)差異表達(dá)基因生物信息做GeneOntology分析。

2 結(jié)果

2.1 造模前后實(shí)驗(yàn)動(dòng)物心電圖變化 見圖1、圖2。

從圖1、圖2可以看出，造模前描記的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物心電圖為正常心電圖，結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支后即刻描記的心電圖顯示ST段弓背樣抬高，呈典型的急性心肌梗死樣改變，說明造模成功。

2.2 總RNA提取結(jié)果 見圖3。各組心肌細(xì)胞總RNA經(jīng)電泳質(zhì)檢，從圖3總RNA電泳圖譜中可以看出，總RNA電泳圖譜有清晰的28 S、18 S條帶，且經(jīng)70℃水浴保溫1h后的電泳圖譜與水浴保溫前的圖譜無明顯差異，說明抽提的總RNA符合實(shí)驗(yàn)要求。

2.3 基因芯片雜交結(jié)果

2.3.1 芯片的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn) 實(shí)驗(yàn)管家基因、空白對(duì)照、陰性對(duì)照、梯度對(duì)照均陰性。A/B組、A/C組芯片均一化系數(shù)分別為1.128、0.979，對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組掃描圖的平均信號(hào)強(qiáng)度與平均背景的比值均不小于3，符合表達(dá)譜芯片實(shí)驗(yàn)成功標(biāo)準(zhǔn)。

2.3.2 各組動(dòng)物芯片雙色熒光標(biāo)記疊加圖 見圖4、圖5。

圖4、圖5表示，對(duì)于某一點(diǎn)的兩種疊加熒光信號(hào)，如果Cy3信號(hào)較強(qiáng)，該點(diǎn)多顯綠色，說明該基因的表達(dá)呈下調(diào)趨勢(shì)；如果Cy5信號(hào)較強(qiáng)，該點(diǎn)多顯紅色，說明該基因表達(dá)呈上調(diào)趨勢(shì)；如果強(qiáng)度相似，即顯黃色，說明該基因的表達(dá)未發(fā)生明顯變化。

2.3.3 各組動(dòng)物基因芯片雜交信號(hào)強(qiáng)度散點(diǎn)圖 見圖6、圖7。

圖6、圖7中，X軸、Y軸分別以Cy3熒光強(qiáng)度值（＝前景值－背景值）和Cy5熒光強(qiáng)度值為坐標(biāo)，每一個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)代表芯片上一個(gè)基因點(diǎn)的雜交信號(hào)；數(shù)據(jù)點(diǎn)若為紅色，則代表Y值與X值的比值在0.5～2.0之間，基本屬非差異表達(dá)；數(shù)據(jù)點(diǎn)若為黃色，則代表Y值與X值的比值在0.5～2.0范圍之外，該點(diǎn)為差異表達(dá)基因。

2.3.4 針刺對(duì)缺血心肌24h差異表達(dá)基因的干預(yù)作用 見圖8、圖9。

比較缺血24h樣品B與假手術(shù)A比值RatioB和缺血24h針刺樣品C與假手術(shù)A比值RatioC的比值。

B與A的上調(diào)基因共398個(gè)，其中有298個(gè)基因在RatioC相對(duì)于RatioB有明顯的下調(diào)趨勢(shì)，下調(diào)超過了0.77倍（見圖8a）。其他的基因則變化很小（見圖8b）。

心肌缺血24h后表達(dá)上調(diào)的398條基因中，經(jīng)過間斷針刺內(nèi)關(guān)穴3次，24h后其中298條基因（占表達(dá)上調(diào)基因的74.87%）的表達(dá)出現(xiàn)不同程度的下調(diào)趨勢(shì)，表明針刺內(nèi)關(guān)穴對(duì)缺血心肌表達(dá)上調(diào)的大多數(shù)基因起到良性調(diào)節(jié)作用。

B與A的下調(diào)基因共338個(gè)，其中有188個(gè)基因在RatioC相對(duì)于RatioB有明顯的上調(diào)趨勢(shì)，上調(diào)超過了1.3倍（見圖9a）。其他的基因則變化很小（見圖9b）。

心肌缺血24h后表達(dá)下調(diào)的338條基因中，經(jīng)過間斷針刺內(nèi)關(guān)穴3次，24h后其中188條基因（占總下調(diào)基因的55.62%）的表達(dá)出現(xiàn)不同程度的上調(diào)趨勢(shì)，表明針刺內(nèi)關(guān)穴對(duì)缺血心肌表達(dá)下調(diào)的多數(shù)基因起到良性調(diào)節(jié)作用。

2.3.5 針刺調(diào)節(jié)缺血心肌24h差異表達(dá)基因的生物學(xué)功能 見表1、表2。

將分析中得到的24h缺血模型針刺前后比值大于1.3倍的差異基因做Gene Ontology分析。統(tǒng)計(jì)每個(gè)GO term中所包括的差異基因個(gè)數(shù)，并用統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)的方法計(jì)算每個(gè)GO term中差異基因富集的顯著性。根據(jù)P value大小判斷差異基因中具有顯著性意義的GO term，從而判斷24h缺血模型在針刺前后差異基因的主要生物學(xué)功能，見表1。通過文獻(xiàn)證實(shí)進(jìn)一步在這些功能分類中發(fā)現(xiàn)了可能與針刺有效干預(yù)缺血心肌相關(guān)的顯著差異表達(dá)基因，見表2，并將進(jìn)一步分析這些基因表達(dá)的變化與心肌缺血的關(guān)系。

表1 顯著富集差異表達(dá)基因的相關(guān)功能分析Tab.1 Correlated functional analysis of significant enriching differential expression gene

針刺調(diào)節(jié)缺血心肌24h的差異表達(dá)基因功能涉及氧化磷酸化、線粒體電子傳遞、電子傳遞偶聯(lián)ATP合成、能量代謝、磷酸鹽代謝過程、單價(jià)無機(jī)陽離子轉(zhuǎn)運(yùn)、輔酶代謝過程等，顯著差異基因主要集中在氧化磷酸化及三羧酸循環(huán)過程中的酶，包括蛋白磷酸酶1B（Ppm1b）、琥珀酸輔酶A連接酶（Suclg1）、谷氨酸草酰乙酸轉(zhuǎn)氨酶2（Got2）、蘋果酸脫氫酶（Mdhl）、丙酮酸脫氫酶磷酸酶同工酶（PDP1）、延胡索酸水合酶（Fh）、羥肽酶b2（Cpb2）及酪氨酸單氧化酶激活蛋白酶（Ywhaz）。針刺內(nèi)關(guān)穴主要通過干預(yù)缺血心肌能量代謝發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。

表2 與針刺相關(guān)的顯著差異基因及表達(dá)倍數(shù)Tab.2 Acupuncture related significant differential gene and its expression folds

3 討論

心肌缺血是引發(fā)缺血性心臟病的關(guān)鍵病理環(huán)節(jié)，嚴(yán)重影響人類的生命健康，臨床和實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)心肌缺血伴隨著一系列分子水平的變化，心肌缺血前后心肌組織基因表達(dá)也有明顯的變化，尤其是在缺血心肌區(qū)的基因變化對(duì)心肌缺血的治療有著較深遠(yuǎn)的意義，對(duì)這些變化基因進(jìn)行研究也是闡明心肌缺血分子機(jī)制的一種可行途徑。

心肌缺血、缺氧時(shí)，由于脂肪酸氧化障礙和糖酵解過程限速酶如磷酸果糖激酶等被激活，致使糖酵解增強(qiáng)。缺血時(shí)，約有80%的能量是靠酵解過程提供的，故本過程的增強(qiáng)是缺血心肌重要的代償性應(yīng)激改變，但該過程的增強(qiáng)可引起乳酸和H+的迅速蓄積而發(fā)生中毒，從而抑制其限速酶使酵解過程抑制，結(jié)果又會(huì)使缺血心肌產(chǎn)能途徑阻斷。此外急性心肌缺血時(shí)，交感-兒茶酚胺系統(tǒng)興奮，使脂肪分解加強(qiáng)，脂肪酸氧化障礙，從而導(dǎo)致游離脂肪酸（FFA）和酯酰輔酶（Co）A在心肌中蓄積。這些長(zhǎng)鏈脂肪酸不但可與K+、Na+和Ca2+等陽離子結(jié)合形成“皂”類化合物，對(duì)生物膜的脂類結(jié)構(gòu)起著嚴(yán)重的“去污”破壞作用，并可抑制線粒體的氧化磷酸化和腺苷轉(zhuǎn)移酶的活性，從而影響ATP的產(chǎn)生和運(yùn)出，此外，還可抑制參與三羧酸循環(huán)的酶如檸檬酸合成酶的活性而破壞三羧酸循環(huán)[5]。由于對(duì)大鼠基因的命名、定位及功能等的研究較少，其中部分基為未知基因，而在已知的部分差異表達(dá)基因中，心肌缺血后主要為編碼能量代謝過程中的一些酶及輔酶的基因，如：Ppm1b、Ywhaz、Got2、Mdhl、PDP1、Fh、Cpb2、Suclg1，通過上調(diào)或下調(diào)上述基因表達(dá)從而達(dá)到保護(hù)心肌細(xì)胞的目的，這就表明針刺主要通過調(diào)節(jié)能量代謝過程中的諸多環(huán)節(jié)從而達(dá)到治療心肌缺血的作用。林亞平等[6]觀察電針“內(nèi)關(guān)”對(duì)心肌缺血再灌注損傷家兔心肌組織中ATP及其他腺苷酸的影響，發(fā)現(xiàn)電針內(nèi)關(guān)和足三里可明顯減輕ATP的降低狀態(tài)，且其分解產(chǎn)物單磷酸腺苷（AMP）增加，AMP在酶的催化下可產(chǎn)生大量腺苷，腺苷可擴(kuò)張小血管，改善心肌的血流供應(yīng)，保證了心肌缺血時(shí)的能量供給，從而減輕心肌細(xì)胞損傷。田岳鳳等[7]觀察針刺對(duì)心肌缺血再灌注損傷大鼠心肌細(xì)胞能量代謝物質(zhì)ATP、AMP和二磷酸腺苷（ADP）變化的影響，結(jié)果顯示針刺手厥陰心包經(jīng)穴可明顯改變ATP、AMP、ADP的含量，保護(hù)心肌的有氧代謝，降低氧自由基的產(chǎn)生，從而有效地保護(hù)心肌細(xì)胞。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果與本實(shí)驗(yàn)觀察結(jié)果一致，說明能量代謝環(huán)節(jié)是針刺治療心肌缺血關(guān)鍵作用靶點(diǎn)之一。

除能量代謝靶點(diǎn)外，尚發(fā)現(xiàn)了某些基因（S100A9、Atp1b1、TnI、Myl3、Casq2、Mb）參與針刺調(diào)節(jié)缺血心肌作用。S100鈣離子結(jié)合蛋白是一種鈣離子結(jié)合蛋白，可以由中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞以及某些上皮細(xì)胞合成，在炎性組織中表達(dá)上調(diào)，具有抗病原微生物功能和趨化活性，而且在炎性反應(yīng)時(shí)S100A8的活性同源二聚體可以被次氯酸鹽氧化成非活性的同源二聚體，一方面可限制白細(xì)胞的進(jìn)一步浸潤(rùn)，另一方面可保護(hù)細(xì)胞免受過度氧化損傷。S100鈣離子結(jié)合蛋白A9可形成同源二聚體或與S100A8結(jié)合形成異源二聚體而發(fā)揮抗氧化作用。心肌缺血24h S100A9表達(dá)明顯增加，針刺內(nèi)關(guān)穴后，S100A9表達(dá)下降，可能同樣發(fā)揮調(diào)控炎性反應(yīng)和抗氧化作用，從而減輕心肌損傷。

鈉離子/鉀離子-三磷酸腺苷（Na+/K+-ATP）酶是一種廣泛存在于真核生物細(xì)胞上的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，主要調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)外Na+、K+平衡，維持細(xì)胞的容積和保證細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定。其主要由α和β亞基構(gòu)成，β亞基是調(diào)控α亞基活性的主要成分。Atp1b1可調(diào)節(jié)Na+-K+-ATP酶活性。β1亞基基因表達(dá)減少，進(jìn)而使Na+-K+-ATP酶活性受抑，使Na+/K+轉(zhuǎn)運(yùn)減弱，細(xì)胞內(nèi)Na+水平增高，促使鈉離子/鈣離子（Na+/Ca2+）交換增加，引起細(xì)胞內(nèi)Ca2+水平增加。與此同時(shí)，Na+-K+-ATP酶活性受抑又繼而進(jìn)一步抑制肌漿網(wǎng)Ca2+-Mg2+-ATP酶活性，使肌漿網(wǎng)對(duì)Ca2+再攝取的能力降低，從而導(dǎo)致線粒體內(nèi)Ca2+超載而損傷心肌細(xì)胞。針刺內(nèi)關(guān)穴可能通過調(diào)節(jié)缺血心肌過度表達(dá)的Atp1b1，從而減輕心肌損傷。

肌鈣蛋白是組成橫紋肌細(xì)絲的結(jié)構(gòu)蛋白，可調(diào)節(jié)鈣介導(dǎo)的肌動(dòng)蛋白和肌球蛋白之間的相互反應(yīng)，其中TnI是肌原纖維ATP酶的抑制單位，可抑制肌球蛋白與肌動(dòng)蛋白結(jié)合，阻止肌肉收縮；肌球蛋白輕鏈激酶（Myl3），是一種鈣調(diào)素（CaM）依賴酶，催化肌球蛋白輕鏈（MLC）的磷酸化,使肌動(dòng)球蛋白得以激活肌球蛋白ATP酶，從而引起平滑肌的收縮活動(dòng)；Casq2肌鈣蛋白是一個(gè)高通量，具有中度親和力的鈣結(jié)合蛋白，因此可充當(dāng)肌肉的內(nèi)部鈣庫，釋放的鈣通過鈣釋放通道上行至肌集鈣蛋白，觸發(fā)肌肉收縮；Mb作為氧的供應(yīng)儲(chǔ)備，促進(jìn)肌肉中氧的代謝。針刺內(nèi)關(guān)穴后上述相關(guān)基因表達(dá)上調(diào)，從而恢復(fù)心肌正常能量代謝及增強(qiáng)心肌收縮能力。

針刺作用具有多通路、多靶點(diǎn)及多效應(yīng)的特點(diǎn)，目前通過差異基因的生物信息學(xué)分析提示能量代謝是針刺治療心肌缺血的關(guān)鍵作用靶點(diǎn)，同時(shí)也涉及調(diào)控炎癥、抗氧化、離子轉(zhuǎn)運(yùn)、肌肉收縮等多個(gè)環(huán)節(jié)，但是關(guān)鍵差異基因的進(jìn)一步篩選及驗(yàn)證將更有助于闡明針刺治療心肌缺血的分子機(jī)制及尋找臨床治療新方法，這部分內(nèi)容有待于進(jìn)一步開展。

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Effect of acupuncture at Neiguan acupoint on the gene expression profile of rats with acute myocardial ischemia

LIANG Xian-ru1,XI Qiang2,LI Xiao-mei2,CUI Rui2,JIN Guang2,GUO Yi2,GUO Yong-ming2
（1．Affiliated Hospital of Logistics College of Chinese People's Armed Police Troop,Tianjin 300262,China; 2.Tianjin University of TCM,Tianjin 300193,China）

[Objective]To study the effect of acupuncture on the gene expression profile in acute myocardial ischemia.[Methods]Aacute myocardial ischemic was induced by ligating the left anterior descending branch of coronary artery,and the total RNA of the ischemic myocardium was extracted after grouping and intervention.Afterwards,we hybridized the extraction with the whole gene expression profile chip in rat and detected them.In the differential expressed gene during therapeutic process after screening,we searched and analyzed the compound functional classification of the significant aggregative differential expression by the means of gene functional classification system and discussed the effect of acupuncture on the gene expression profile in acute myocardial ischemia from the level of gene function.[Results]The expression of 398 genes was up-regulated after 24 hours of myocardial ischemia.However,the expression of 298 gene (74.87%of the total up-regulated genes)showed the tendency of down-regulation after acupuncture at Neiguan acupoint three times intermittently;in the 338 down-regulated genes after 24 hours of myocardial ischemia,the expression of 188 genes(55.62%of the total downregulated genes)showed the tendency of up-regulation after acupuncture at Neiguan acupoint three times intermittently,indicating a benign regulative action of the expression of ischemia myocardium gene after acupuncture at Neiguan acupoint.In the screened differential expression genes,the functional module of Ppm1b,Suclg1,Got2,Mdhl,PDP1,Fh,Cpb2,Ywhaz,S100A9,Atp1b1,TnI,Myl3,Casq2, Mb,mainly involved the oxidative phosphorylation,the electron transfer of mitochodria,the electron transfer coupling of ATP synthesis, the energy metabolism,the process of phoshates metabolism,the univalent inorganic cation transfer,the process of coenzyme metabolism and so on.[Conclusion]Acupuncture at Neiguan acupoint may protect the myocardium by influencing the genes mentioned above.

acupuncture;acute myocardium ischemia;expression of gene function

R245.3

A

1672-1519（2012）04-0349-07

2012-04-26）

天津市高等學(xué)?？萍及l(fā)展基金項(xiàng)目（020327）。

梁憲如（1974-），女，碩士，主治醫(yī)師，主要研究方向?yàn)閭鹘y(tǒng)針刺手法作用機(jī)制及臨床應(yīng)用研究。

郭永明。