王光寧 楊銀鳳 陳秋蘭

木瓜為薔薇科植物貼梗海棠Chaenomeles speciosa(Sweet)Nakai干燥近成熟果實，習(xí)稱“皺皮木瓜”，味酸、溫，入肝、脾經(jīng)，有舒筋活絡(luò)、和胃化濕之功效，可用于濕痹拘攣、腰膝關(guān)節(jié)酸重疼痛、暑濕吐瀉、腳氣水腫等?；瘜W(xué)成分有黃酮類、萜類、有機酸類、多糖、鞣質(zhì)、果膠等［1］。有機酸主要包括蘋果酸、檸檬酸、抗壞血酸等成分［2］，是木瓜鎮(zhèn)痛的功效成分之一［3］。不同炮制方法對有機酸的影響尚未有研究報道，因此本文以蘋果酸為對照品考察不同炮制方法對木瓜中水溶性有機酸含量的影響，為進一步探索木瓜炮制機理奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 十萬分之一電子天平BP211D(德國賽多利斯公司)、HH-6恒溫水浴鍋、數(shù)顯pH計、25 ml堿式滴定管。

1.2 試藥 乙醇、鄰苯二甲酸氫鉀、酚酞、DL-蘋果酸、NaOH固體均為分析純、明膠(化學(xué)純)；木瓜藥材(購于廣州柏盛堂中藥有限公司，由廣東藥學(xué)院中藥學(xué)院中藥資源系馬鴻雁博士鑒定為薔薇科植物貼梗海棠Chaenomeles speciosa(Sweet)Nakai干燥近成熟果實)。

2 方法與結(jié)果

2.1 炮制品的制備 通過查閱相關(guān)文獻［4］及各省市炮制規(guī)范整理出五種常用的木瓜飲片。①生品取木瓜片，置60℃烘箱中干燥1 h，取出，待涼后置干燥器中保存。②炒黃品取干燥木瓜片20 g，置炒制容器中，文火加熱，炒至表面微黃，取出放涼，篩去碎屑，待涼后置干燥器中保存。③炒焦品取干燥木瓜片20 g，置炒制容器中，文火加熱，炒至表面微焦，取出放涼，篩去碎屑，待涼后置干燥器中保存。④鹽炙品取干燥木瓜片20 g，照2010版《中國藥典》附錄炮制通則［5］，加鹽水拌勻(食鹽：2%)，悶透，置炒制容器內(nèi)，文火加熱，炒至規(guī)定程度，取出，放入60℃烘箱烘干，取出，待涼后置干燥器中保存。⑤酒炙品 取干燥木瓜片20 g，照2010版《中國藥典》附錄炮制通則［5］，加黃酒(10% ～20%)拌勻，悶透，置炒制容器內(nèi)，文火加熱，炒至規(guī)定程度，取出，放入60℃烘箱烘干，取出，待涼后置干燥器中保存。

2.2 試液配制 ①酚酞指示劑 精密稱定0.2505 g酚酞，加25 ml 95%乙醇溶解，搖勻，即得。②標(biāo)準氫氧化鈉滴定液精密稱取氫氧化鈉固體4.005 g，加新沸冷水使成1000 ml，搖勻。精密稱取基準鄰苯二甲酸氫鉀0.60142 g，加新沸冷水50 ml，加酚酞指示液2滴，用新配制的氫氧化鈉滴定至溶液顯粉紅色，重復(fù)滴定3次，取消耗的氫氧化鈉標(biāo)準溶液得氫氧化鈉濃度為0.0961 mol/L。

2.3 測定方法 取同一批木瓜藥材粗粉1.0 g，精密稱定，加水20 ml，回流提取3次，每次1 h，濾過，合并濾液。加入適量10%明膠溶液，邊加邊攪拌至溶液不再產(chǎn)生明顯沉淀為止，靜置，加乙醇使含醇量達75%以上，攪拌使明膠充分沉淀，密封置冰箱4℃冷藏過夜，抽濾，回收乙醇，置100 ml容量瓶中，加水定容，搖勻，即得。精密量取供試品溶液20 ml于具塞三角瓶中，再加1%酚酞指示劑2滴，搖勻，用氫氧化鈉標(biāo)準溶液滴定至微紅且30秒內(nèi)不褪色即為終點。每1 ml氫氧化鈉滴定液(0.1 mol/L)相當(dāng)于6.704 mg的蘋果酸(C4H6O5)。根據(jù)氫氧化鈉滴定液的消耗量，按下式計算樣品中水溶性有機酸含量：

水溶性有機酸含量(%)=6.704VM/W

式中，V：滴定時所消耗氫氧化鈉滴定液的體積 (ml)；M：滴定時所使用氫氧化鈉滴定液的濃度(mol/L)；W：滴定時所取供試品溶液折合的樣品重量(g)。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 滴定曲線 ①樣品 精密量取供試品溶液20 ml于100 ml燒杯中，浸入已校準電極，用氫氧化鈉標(biāo)準溶液進行滴定，記錄消耗體積V及對應(yīng)的pH值，以V(ml)為橫坐標(biāo)，pH值為縱坐標(biāo)作圖，繪制V～pH滴定曲線圖(如圖1)。②對照品精密稱取0.01374 g蘋果酸對照品，加水20 ml使完全溶解，浸入已校準電極，用氫氧化鈉標(biāo)準溶液進行滴定，記錄消耗體積V及對應(yīng)的pH值，以V(ml)為橫坐標(biāo)，pH值為縱坐標(biāo)作圖，繪制V～pH滴定曲線圖(如圖1)。

圖1 滴定曲線

由圖1可見木瓜藥材水溶性有機酸的滴定曲線呈現(xiàn)明顯的滴定突躍，且突躍范圍在pH6～10，與蘋果酸對照品的滴定曲線極其相似。

2.4.2 精密度實驗 取同一份供試品溶液，連續(xù)測定6次，計算水溶性有機酸含量。結(jié)果RSD為0.66%，表明儀器精密度良好。

2.4.3 重復(fù)性實驗 取生品藥材1.0 g，精密稱定，平行6份，按樣品溶液方法提取精制，測定木瓜水溶性有機酸含量。結(jié)果平均含量6.72%，RSD2.07%，表明該方法重現(xiàn)性良好。

2.4.4 穩(wěn)定性實驗 取同一份樣品溶液，間隔不同時間測定消耗體積，計算水溶性有機酸含量。結(jié)果，樣品溶液在225 min內(nèi)RSD為1.89%，表明穩(wěn)定性良好。

2.4.5 回收率實驗 稱取木瓜生品0.5 g，按樣品溶液方法提取精制。精密量取供試品液9份，每份20 ml，平行3份，分別精確加入蘋果酸對照品，按2.3項下方法測定消耗體積，計算水溶性有機酸含量，求得加樣回收率，結(jié)果如表1。

表1 回收率試驗

2.5 樣品含量測定 分別稱取木瓜生品、炒黃品、炒焦品、酒炙品和鹽炙品各1.0 g，平行3份，按照供試品溶液項下方法提取精制，加水定容至100 ml。按2.3項下方法測定消耗體積，計算水溶性有機酸含量，結(jié)果見表2。

表2 木瓜各炮制品中水溶性有機酸測定結(jié)果

3 討論

實驗結(jié)果表明，炮制后木瓜中水溶性有機酸含量均下降，其中炒黃品水溶性有機酸含量降低幅度最小，炒焦品、酒炙品和鹽炙品中水溶性有機酸的含量相差不大，說明炮制時間和溫度對水溶性有機酸的含量有一定影響。木瓜中水溶性有機酸的主要成分是蘋果酸和檸檬酸，兩者均屬于羥基酸，受熱不穩(wěn)定，易發(fā)生脫羧反應(yīng)和脫水反應(yīng)，因此加熱炮制會使水溶性有機酸受到破壞，含量降低。

本文采用改良明膠法除去鞣質(zhì)和醇沉除去黃酮類成分，再進行滴定可防止干擾使結(jié)果更加準確?？疾炝怂幉呐c明膠質(zhì)量比分別為1∶1、1∶1.5、1∶2.5，結(jié)果1∶1 純化的溶液出現(xiàn)渾濁，1∶1.5和1∶2.5純化的溶液均澄清。因此綜合考慮選擇加入明膠量與藥材質(zhì)量比為1∶1.5。

［1］ 宋亞玲，封智兵，程永現(xiàn)，等．木瓜化學(xué)成分的研究．西北植物學(xué)報，2007，27(4)：831-833．

［2］ 龔復(fù)俊，陳 玲，盧笑叢，等．皺皮木瓜果實中有機酸成分的GCMS 分析．植物資源與環(huán)境學(xué)報，2005，14(4)：55-56，58.

［3］ 李娜，金敬紅，姜洪芳，等．宣木瓜總有機酸的純化及鎮(zhèn)痛抗炎作用．中國實驗方劑學(xué)雜志，2011，17(1)：113-116.

［4］ 胡居杰，汪電雷．木瓜炮制歷史沿革．安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2000，19(6)：42.

［5］ 國家藥典委員會．中華人民共和國藥典(一部)．北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010：402-403.