孟俊龍，楊 杰，常明昌**，馮翠萍，程紅艷

(1.山西農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，太谷 030801；2.山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所，太原030031；3.山西農(nóng)業(yè)大學(xué)資源與環(huán)境學(xué)院，山西 太谷，030801)

羊肚菌 [Morchella esculenta(L.)Pers.]是一種著名食(藥)用真菌，其子實(shí)體富含蛋白質(zhì)、多糖、核酸、多種微量元素以及維生素，有增強(qiáng)免疫功能、抗疲勞、抗衰老、抗腫瘤、抗誘變、降血脂等多種功效，深受人們喜愛且在國際市場十分走俏[1-4]。然而由于野生羊肚菌的生長對氣候、土壤等環(huán)境條件的要求高，所以，全國羊肚菌產(chǎn)量低，遠(yuǎn)不能滿足人們的需要[5]。多年來，羊肚菌的人工馴化栽培一直是菌物界的研究熱點(diǎn)之一，雖然國內(nèi)外均有成功栽培羊肚菌的報(bào)道，但迄今為止尚形成成熟的商品化栽培[6]，并且大田栽培出菇不穩(wěn)定和室內(nèi)栽培不出菇依然是羊肚菌人工栽培的瓶頸[7]。山西省野生羊肚菌資源豐富，我們分離了采自山西境內(nèi)的一株羊肚菌，經(jīng)專家鑒定為小羊肚菌(Morchella deliciosa Fr.)，并對其進(jìn)行組織分離和初步的栽培條件研究，以期為羊肚菌的人工栽培和開發(fā)利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

由采自山西省左云縣境內(nèi)山區(qū)野生羊肚菌分離獲得，該樣品經(jīng)鑒定為小羊肚菌 （Morchella deliciosa Fr.）。

1.2 培養(yǎng)基

1.2.1 子實(shí)體分離培養(yǎng)基

分離培養(yǎng)基 (g·L-1)：馬鈴薯200、葡萄糖20、瓊脂20、腐殖土 （來自野生羊肚菌周圍）25、蛋白胨2。

1.2.2 母種培養(yǎng)基

M1(g·L-1)：馬 鈴 薯 200、 葡 萄 糖 20、 瓊 脂 20，KH2PO43、 MgSO40.1，蛋白胨1.8。

M2(g·L-1)： 馬 鈴 薯 200、 葡 萄 糖 20、 瓊 脂 20，KH2PO43、MgSO40.5、楊樹根際土25、蛋白胨2。

M3(g·L-1)： 木屑浸出液 （木屑 250g， 加入 1 000 mL中，浸泡12 h，過濾）300、葡萄糖20、瓊脂25、KH2PO41、MgSO41、 蛋白胨 5。

1.2.3 原種培養(yǎng)基

Y1：棉籽殼85%、麩皮12%、石膏1%、磷肥1%、石灰1%，含水量65%。

Y2：棉籽殼80%、麩皮8%、楊樹葉 （采自脫落的楊樹葉子，60℃烘干至恒重，粉碎）6%、普通耕地土3%、石膏1%、磷肥1%、石灰1%，含水量65%。

Y3：大米98%，楊樹根際土2%，含水量55%，并按常規(guī)處理原料[8]。

1.3 方法

1.3.1 子實(shí)體分離和培養(yǎng)

將采集下的羊肚菌子實(shí)體放入超凈工作臺，清除干凈根部泥土，放入75%的酒精中，搖晃消毒30 s，然后用無菌水漂洗3次，再用無菌紗布或無菌吸水紙除去多余水分，用手術(shù)刀在菌柄與菌蓋連接部位切成0.5 cm×0.5 cm的小塊，接入裝有分離培養(yǎng)基的試管中。在25℃恒溫培養(yǎng)7d，并用顯微鏡觀察菌絲形態(tài)特征。菌絲生長旺盛、有明顯菌核形成的試管即為小羊肚菌分離試管種。

1.3.2 母種培養(yǎng)

將羊肚菌分離試管種分別轉(zhuǎn)接于M1、M2、M3三種供試母種培養(yǎng)基中，在25℃恒溫培養(yǎng)15 d，每12 h觀察一次，記錄菌絲長速、長勢、菌核形成時(shí)間等情況。每個(gè)處理5個(gè)重復(fù)。

1.3.3 原種栽培

采用500 mL的栽培瓶，每瓶裝干料300 g，在121℃滅菌2.5 h，然后將上面篩選出的最優(yōu)羊肚菌母種接入不同配方處理下的原種培養(yǎng)基中，在23℃～25℃條件下進(jìn)行暗培養(yǎng)。在出菇階段給予相對濕度85%和強(qiáng)光照 （10 000 lx）刺激48 h[9]，觀察菌絲長速、長勢、顏色變化，滿瓶時(shí)間，菌核形成時(shí)間以及大小、數(shù)量。

2 結(jié)果與分析

2.1 分離培養(yǎng)基對羊肚菌分離效果的影響

羊肚菌在分離培養(yǎng)的第1 d開始萌發(fā)，氣生菌絲旺盛，呈絲狀，分布均勻，第7 d時(shí)菌絲可長滿試管，且開始褐化，第9 d在試管壁上開始形成少量的黃色小菌核。與馬鈴薯培養(yǎng)基分離效果相比，萌發(fā)早，菌核形成時(shí)間短，效果好。

2.2 母種培養(yǎng)基對菌絲生長的影響

羊肚菌在3種供試培養(yǎng)基上均能生長，顯微鏡下觀察到菌絲直徑約為10 μm，菌絲橫隔和內(nèi)含物較多；菌絲生長初期，顏色淺白，氣生菌絲旺盛，隨培養(yǎng)時(shí)間的增加，菌絲生長變緩，菌絲顏色逐漸變黃，直至褐色；菌核先出現(xiàn)在試管壁上，隨后蔓延到整個(gè)試管。

表1 不同母種培養(yǎng)基對菌絲生長和菌核的影響

由表1可知，M2在菌絲生長速度上略快于M1，顯著快于M3，且菌核形成時(shí)間最短。菌核能否形成與菌核數(shù)量是關(guān)乎羊肚菌人工栽培是否成功的重要因子[10]。小羊肚菌在母種培養(yǎng)基M2上，能形成較多的，形狀較大菌核，即M2是小羊肚菌人工栽培的最佳母種培養(yǎng)基。

2.3 原種培養(yǎng)基對菌絲生長和出菇的影響

表2 原種培養(yǎng)基對菌絲和出菇的影響

如表2所示，小羊肚菌均能在供試原種培養(yǎng)基上完成菌絲生長，在Y3上菌絲生長最快，形成菌核時(shí)間最短，在Y2和Y1上菌絲生長速度顯著慢于Y3，且菌核形成時(shí)間較長；Y1形成的菌核數(shù)量極少，沒有出菇，Y2能形成很少且較小的菌核，也沒有形成小羊肚菌子實(shí)體原基，Y3能形成多而大的菌核，并且形成了少量的菇蕾。我們在后來的驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)中，用采收子實(shí)體進(jìn)行組織分離，在Y3培養(yǎng)基上，給予上述出菇條件，再次出現(xiàn)結(jié)實(shí)，但出菇率和子實(shí)體生長依然較差。

3 結(jié)論與討論

母種、原種培養(yǎng)基對菌絲生長速度、菌核形成時(shí)間、菌核數(shù)量和大小都有影響，M2、 Y3分別為最佳母種和原種培養(yǎng)基。說明小羊肚菌正常生長需要豐富的氮源和微量元素，但適宜的營養(yǎng)和合理的出菇處理是保證小羊肚菌栽培成功的前提條件。一般認(rèn)為：覆土和散射光照射處理是羊肚菌栽培的必要條件[11－12]，而本試驗(yàn)則在大米培養(yǎng)基上，給予相對濕度85%和強(qiáng)光照 （10 000 lx）刺激下，形成了子實(shí)體，雖然出菇率和子實(shí)體生長依然較差，但為小羊肚菌的人工栽培以及利用開發(fā)提供了途徑。

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