孟俊龍，楊 杰，常明昌**，馮翠萍，程紅艷

(1.山西農業(yè)大學食品科學與工程學院，太谷 030801；2.山西省農業(yè)科學院食用菌研究所，太原030031；3.山西農業(yè)大學資源與環(huán)境學院，山西 太谷，030801)

羊肚菌 [Morchella esculenta(L.)Pers.]是一種著名食(藥)用真菌，其子實體富含蛋白質、多糖、核酸、多種微量元素以及維生素，有增強免疫功能、抗疲勞、抗衰老、抗腫瘤、抗誘變、降血脂等多種功效，深受人們喜愛且在國際市場十分走俏[1-4]。然而由于野生羊肚菌的生長對氣候、土壤等環(huán)境條件的要求高，所以，全國羊肚菌產量低，遠不能滿足人們的需要[5]。多年來，羊肚菌的人工馴化栽培一直是菌物界的研究熱點之一，雖然國內外均有成功栽培羊肚菌的報道，但迄今為止尚形成成熟的商品化栽培[6]，并且大田栽培出菇不穩(wěn)定和室內栽培不出菇依然是羊肚菌人工栽培的瓶頸[7]。山西省野生羊肚菌資源豐富，我們分離了采自山西境內的一株羊肚菌，經專家鑒定為小羊肚菌(Morchella deliciosa Fr.)，并對其進行組織分離和初步的栽培條件研究，以期為羊肚菌的人工栽培和開發(fā)利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

由采自山西省左云縣境內山區(qū)野生羊肚菌分離獲得，該樣品經鑒定為小羊肚菌 （Morchella deliciosa Fr.）。

1.2 培養(yǎng)基

1.2.1 子實體分離培養(yǎng)基

分離培養(yǎng)基 (g·L-1)：馬鈴薯200、葡萄糖20、瓊脂20、腐殖土 （來自野生羊肚菌周圍）25、蛋白胨2。

1.2.2 母種培養(yǎng)基

M1(g·L-1)：馬 鈴 薯 200、 葡 萄 糖 20、 瓊 脂 20，KH2PO43、 MgSO40.1，蛋白胨1.8。

M2(g·L-1)： 馬 鈴 薯 200、 葡 萄 糖 20、 瓊 脂 20，KH2PO43、MgSO40.5、楊樹根際土25、蛋白胨2。

M3(g·L-1)： 木屑浸出液 （木屑 250g， 加入 1 000 mL中，浸泡12 h，過濾）300、葡萄糖20、瓊脂25、KH2PO41、MgSO41、 蛋白胨 5。

1.2.3 原種培養(yǎng)基

Y1：棉籽殼85%、麩皮12%、石膏1%、磷肥1%、石灰1%，含水量65%。

Y2：棉籽殼80%、麩皮8%、楊樹葉 （采自脫落的楊樹葉子，60℃烘干至恒重，粉碎）6%、普通耕地土3%、石膏1%、磷肥1%、石灰1%，含水量65%。

Y3：大米98%，楊樹根際土2%，含水量55%，并按常規(guī)處理原料[8]。

1.3 方法

1.3.1 子實體分離和培養(yǎng)

將采集下的羊肚菌子實體放入超凈工作臺，清除干凈根部泥土，放入75%的酒精中，搖晃消毒30 s，然后用無菌水漂洗3次，再用無菌紗布或無菌吸水紙除去多余水分，用手術刀在菌柄與菌蓋連接部位切成0.5 cm×0.5 cm的小塊，接入裝有分離培養(yǎng)基的試管中。在25℃恒溫培養(yǎng)7d，并用顯微鏡觀察菌絲形態(tài)特征。菌絲生長旺盛、有明顯菌核形成的試管即為小羊肚菌分離試管種。

1.3.2 母種培養(yǎng)

將羊肚菌分離試管種分別轉接于M1、M2、M3三種供試母種培養(yǎng)基中，在25℃恒溫培養(yǎng)15 d，每12 h觀察一次，記錄菌絲長速、長勢、菌核形成時間等情況。每個處理5個重復。

1.3.3 原種栽培

采用500 mL的栽培瓶，每瓶裝干料300 g，在121℃滅菌2.5 h，然后將上面篩選出的最優(yōu)羊肚菌母種接入不同配方處理下的原種培養(yǎng)基中，在23℃～25℃條件下進行暗培養(yǎng)。在出菇階段給予相對濕度85%和強光照 （10 000 lx）刺激48 h[9]，觀察菌絲長速、長勢、顏色變化，滿瓶時間，菌核形成時間以及大小、數量。

2 結果與分析

2.1 分離培養(yǎng)基對羊肚菌分離效果的影響

羊肚菌在分離培養(yǎng)的第1 d開始萌發(fā)，氣生菌絲旺盛，呈絲狀，分布均勻，第7 d時菌絲可長滿試管，且開始褐化，第9 d在試管壁上開始形成少量的黃色小菌核。與馬鈴薯培養(yǎng)基分離效果相比，萌發(fā)早，菌核形成時間短，效果好。

2.2 母種培養(yǎng)基對菌絲生長的影響

羊肚菌在3種供試培養(yǎng)基上均能生長，顯微鏡下觀察到菌絲直徑約為10 μm，菌絲橫隔和內含物較多；菌絲生長初期，顏色淺白，氣生菌絲旺盛，隨培養(yǎng)時間的增加，菌絲生長變緩，菌絲顏色逐漸變黃，直至褐色；菌核先出現(xiàn)在試管壁上，隨后蔓延到整個試管。

表1 不同母種培養(yǎng)基對菌絲生長和菌核的影響

由表1可知，M2在菌絲生長速度上略快于M1，顯著快于M3，且菌核形成時間最短。菌核能否形成與菌核數量是關乎羊肚菌人工栽培是否成功的重要因子[10]。小羊肚菌在母種培養(yǎng)基M2上，能形成較多的，形狀較大菌核，即M2是小羊肚菌人工栽培的最佳母種培養(yǎng)基。

2.3 原種培養(yǎng)基對菌絲生長和出菇的影響

表2 原種培養(yǎng)基對菌絲和出菇的影響

如表2所示，小羊肚菌均能在供試原種培養(yǎng)基上完成菌絲生長，在Y3上菌絲生長最快，形成菌核時間最短，在Y2和Y1上菌絲生長速度顯著慢于Y3，且菌核形成時間較長；Y1形成的菌核數量極少，沒有出菇，Y2能形成很少且較小的菌核，也沒有形成小羊肚菌子實體原基，Y3能形成多而大的菌核，并且形成了少量的菇蕾。我們在后來的驗證實驗中，用采收子實體進行組織分離，在Y3培養(yǎng)基上，給予上述出菇條件，再次出現(xiàn)結實，但出菇率和子實體生長依然較差。

3 結論與討論

母種、原種培養(yǎng)基對菌絲生長速度、菌核形成時間、菌核數量和大小都有影響，M2、 Y3分別為最佳母種和原種培養(yǎng)基。說明小羊肚菌正常生長需要豐富的氮源和微量元素，但適宜的營養(yǎng)和合理的出菇處理是保證小羊肚菌栽培成功的前提條件。一般認為：覆土和散射光照射處理是羊肚菌栽培的必要條件[11－12]，而本試驗則在大米培養(yǎng)基上，給予相對濕度85%和強光照 （10 000 lx）刺激下，形成了子實體，雖然出菇率和子實體生長依然較差，但為小羊肚菌的人工栽培以及利用開發(fā)提供了途徑。

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