趙 英周 凱張 靜浦中濱

(1.內(nèi)蒙古人民醫(yī)院，內(nèi)蒙古呼和浩特010020;2.內(nèi)蒙古食品藥品檢驗(yàn)所，內(nèi)蒙古呼和浩特010010;3.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)，內(nèi)蒙古呼和浩特010010)

HPLC法測(cè)定牛蒡子中綠原酸的含量

趙 英1周 凱2*張 靜3浦中濱3

(1.內(nèi)蒙古人民醫(yī)院，內(nèi)蒙古呼和浩特010020;2.內(nèi)蒙古食品藥品檢驗(yàn)所，內(nèi)蒙古呼和浩特010010;3.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)，內(nèi)蒙古呼和浩特010010)

目的:建立高效液相色譜法測(cè)定牛蒡子中綠原酸的含量，為綠原酸的藥用植物資源開(kāi)發(fā)提供依據(jù)。方法:依利特C18色譜柱(5μm，4.6mm×250mm)，流動(dòng)相為乙腈-0.4%磷酸(10∶90)，流速:1.0 mL·min-1;檢測(cè)波長(zhǎng):327nm;柱溫:30℃。結(jié)果表明:綠原酸在2.82μg·mL-1～56.40μg·mL-1范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系r=0.9999。平均回收率為100.2%，RSD=0.325%(n=6)。結(jié)論:該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、靈敏度高、重現(xiàn)性好，為牛蒡子的內(nèi)在質(zhì)量控制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

牛蒡子;綠原酸;高效液相色譜法;含量測(cè)定

牛蒡子為菊科植物牛蒡Arctium Lappa L.的干燥成熟的果實(shí)。主產(chǎn)于東北及浙江省，此外四川、湖北、河北、河南、陜西等省亦產(chǎn)。秋季果實(shí)成熟時(shí)采收果序，曬干，打下果實(shí)，除去雜質(zhì)，再曬干。生用或炒用，用時(shí)搗碎，為常用中藥。藥性辛﹑苦，寒。歸肺﹑胃經(jīng)。具有疏散風(fēng)熱，宣肺祛痰，利咽透疹，解毒消腫等功效。主要治療風(fēng)熱感冒，溫病初起;麻疹不透，風(fēng)疹瘙癢;癰腫瘡毒，丹毒，痄腮，喉痹［1-2］。牛蒡子煎劑對(duì)肺炎雙球菌有顯著抗菌作用。水浸劑對(duì)多種致病性皮膚真菌有不同程度的抑制作用。牛蒡子有解熱﹑利尿﹑降低血糖抗腫瘤作用［3］。據(jù)有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，牛蒡子中會(huì)有牛蒡苷，有機(jī)酸(綠原酸，咖啡酸等)及黃酮類［4］。綠原酸為本品清熱解毒，抗菌消炎的主要活性成分。故本實(shí)驗(yàn)以高效液相色譜法對(duì)綠原酸進(jìn)行了分析研究，為牛蒡子的質(zhì)量控制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器與藥品

儀器:日本LC-10AVP高效液相色譜儀;檢測(cè)器:紫外可見(jiàn)檢測(cè)器;工作站:Shimadzu CLASS-VP色譜工作站。

試劑與試藥:綠原酸對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào):110753—200413(供含量測(cè)定用);乙腈為色譜純;水為超純水;其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件:依利特C18色譜柱(5μm，4.6mm×250mm);流動(dòng)相:乙腈-0.4%磷酸(10∶90);流速:1.0 mL·min-1;檢測(cè)波長(zhǎng):327nm;柱溫:30℃。在此色譜條件下，分離度好，對(duì)照品及樣品色譜圖見(jiàn)圖1、2。

圖1對(duì)照品色譜圖

圖2供試品色譜圖

2.2 對(duì)照品溶液的制備:精密稱取綠原酸對(duì)照品1.88mg，置于棕色容量瓶中，加適量流動(dòng)相溶解制成每1mL含綠原酸188μg的溶液。即得。

2.3 供試品溶液的制備:取牛蒡子藥材粉末(過(guò)60目篩)約0.5g，精密稱取，置具塞錐形瓶中，精密加入50%的甲醇50mL，稱定重量，加熱回流30min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，即得。

測(cè)定方法:分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。

2.4 線性關(guān)系考察:精密稱取綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品1.88mg，置于10mL容量瓶中，加流動(dòng)相溶解并定容至刻度。精密吸取0.15mL、0.9mL、1.2mL、1.5mL、2.3mL、3mL置10mL容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，分別吸取20μL進(jìn)樣，按上色譜條件測(cè)定。結(jié)果峰面積Y與濃度之間呈良好的線性關(guān)系，回歸方程:Y=63723X+11305，r=0.9999﹙Y為峰面積積分值，X為濃度μg·mL-1).結(jié)果見(jiàn)表1。結(jié)果表明，綠原酸在2.82～56.40μg·mL-1范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

表1標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定結(jié)果

2.5 精密度測(cè)定:取牛蒡子粉末約0.5g，精密稱定，按供試品制備方法操作制備供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)得綠原酸峰面積。結(jié)果見(jiàn)表2，結(jié)果表明儀器精密度良好。

表2精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn):取牛蒡子樣品，按樣品制備項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別于0，1，2，4，6及8h進(jìn)樣，記錄峰面積積分值并計(jì)算含量，供試品在8小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。結(jié)果如下:

表3穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.7 重復(fù)性試驗(yàn):取同一批次牛蒡子粉末6份，精密稱定，每份取樣量約為0.5g。分別按樣品制備方法制備并測(cè)定每份的含量。結(jié)果見(jiàn)表，表明該方法線性良好。

表4重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

2.8 回收率試驗(yàn):取已知含量的牛蒡子粉末6份(綠原酸含量為0.305%)。每份加入綠原酸對(duì)照品0.7625mg。按照樣品制備方法操作測(cè)定每份樣品的含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表5。

表5回收試驗(yàn)結(jié)果

2.9 樣品的測(cè)定:取不同產(chǎn)地及不同批次3批次牛蒡子樣品，按供試品溶液制備及測(cè)定方法處理并測(cè)定以上實(shí)驗(yàn)證明:不同產(chǎn)地的牛蒡子，綠原酸含量在0.29%～0.31%之間。

表63批樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1 牛蒡子為常用中藥，2010版中國(guó)藥典規(guī)定了本品中牛蒡苷的含量，但有關(guān)綠原酸在本品中的分析研究目前尚未有報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)研究證明:牛蒡子中含有較高的綠原酸，本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果對(duì)牛蒡子的質(zhì)量控制及開(kāi)發(fā)利用提供了依據(jù)。

3.2 綠原酸對(duì)照品不穩(wěn)定，配制應(yīng)后置棕色瓶中避光放置或臨用時(shí)配置。

3.3 實(shí)驗(yàn)參照文獻(xiàn)及《藥典》有關(guān)品種中綠原酸的提取方法［5］，比較了超聲提取和加熱回流提取兩種方法，結(jié)果表明，加熱回流提取效果優(yōu)于超聲提取故選擇加熱回流提取方法。加熱回流30min即可達(dá)到提取完全。故選擇加熱回流提取方法，提取30min。

3.4 實(shí)驗(yàn)根據(jù)文獻(xiàn)及中國(guó)藥典2010年版中有關(guān)綠原酸的測(cè)定波長(zhǎng)均為327nm，經(jīng)在200～700nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行光譜掃描證明對(duì)照品及供試品均在327nm處有最大吸收。故選擇327nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，既可保證樣品測(cè)定，又可排除其它組分的干擾。

［1］Tsutomu W.Masabiro Y，Shigeo O.New sulfur-containing acetylenic compounds from Arctium lappa［J］.Agric Biol Chem，1986，50(2):263-269

［2］Tsutomu W.Hideroshi K.Yoshitomi I.Structures of Lappaphen-a and Lappaphen-b，new guaianolides linked with a sulfur containing acetylenic compound from Arctium lappa L［J］.Agric Biol Chem，1987，51(6):1475-1480

［3］高雪敏，中藥學(xué)［M］.北京:中國(guó)中醫(yī)藥出版社，2002:76-77

［4］王海燕，楊峻山.牛蒡子化學(xué)成分的研究〔J〕.藥學(xué)學(xué)報(bào)，1993，28(2)∶911

［5］國(guó)家藥典委員編.(中華人民共和國(guó)藥典)［S］.2010版一部，2010:329

2012年8月7日收稿

HPLC determination of Great Burdock Achene in the content of Chlorogenic Acid

Zhaoying1Zhoukao2Zhangjing3Puzhongbin3
(1.Inner Mongolia People’s Hospital Hohhot010020;2.Inner Mongolia Institute for Food and Drug Control;3.Inner Mongolia Medical University)

Objective:To determine the content of Chlorogenic Acid in Great Burdock Achene by HPLC for developing the medicinal resources of Chlorogenic Acid.Methods:An external standard method by HPLC with Discovery YILITE C18column(250 mm×4.6 mm，25 μm)was employed.The mobile phase was consisted of acetonitrile-0.4%phosphoric acid solution(10︰90)，at the flow rate of 1.0mL·min-1，the detection wavelength was 327 nm，column temperature was 30℃.Results:It showed good linearity in the range of 2.82～56.4μg·mL-1(r=0.9999).The content of Chlorogenic Acid in Great Burdock Achene was 0.343%，and the average recovery rate of Chlorogenic Acid was 100.2%，RSD=0.325%(n=6).Conclusion:The method is simple，accurate，sensitive and reproducible.Internal quality control of the Great Burdock Achene is provided as experimental evidence.

Great Burdock Achene;Chlorogenic Acid;HPLC;Content determination

R291.2

A文獻(xiàn)標(biāo)志碼:1006-6810(2012)09-0044-03

周凱(1953-)，男，漢族，主任藥師，主要從事中蒙藥藥品檢驗(yàn)與分析研究等。聯(lián)系電話:18647101153，郵箱:zhoukai1800@yahoo.com.cn