陸翠林 陸海鵬

1.廣西中醫(yī)學(xué)院附屬瑞康醫(yī)院，廣西南寧 530011；2.廣西民族醫(yī)院，廣西南寧 530001

復(fù)方消渴降糖膠囊為我院多年用于臨床治療2 型糖尿病的有效復(fù)方制劑，其處方由番石榴葉、天花粉、生地、山藥、山茱萸、甘草等6 味藥組成，具有清熱生津，除煩止渴的作用，用于熱病津傷口渴、多飲、多尿、多食、消瘦、體倦無(wú)力、尿糖及血糖升高之消渴癥。本文旨在研究復(fù)方消渴降糖膠囊的急性毒性及對(duì)四氧嘧啶性糖尿病小鼠的影響，現(xiàn)報(bào)道如下：

1 儀器與試藥

1.1 儀器

棱光-722 型可見(jiàn)分光光度計(jì)，上海第三分析儀器廠；ML204 型電子天平，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司。

1.2 試藥

1.2.1 試劑 四氧嘧啶 （美國(guó)Sigma公司產(chǎn)品，批號(hào)：12k1460）；葡萄糖測(cè)定試劑盒（上海榮盛生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：20100812）；苯乙雙胍片（北京雙鶴藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：20100505）。

1.2.2 藥物 番石榴葉采集地點(diǎn)分別為廣西南寧、桂林、百色、河池、柳州、欽州、防城等地，經(jīng)鑒定為桃金娘科植物番石榴Psidium guajavae L.的干燥葉[1]；天花粉、生地、山藥、山茱萸、甘草等藥材均購(gòu)南寧一心藥業(yè)有限公司。復(fù)方消渴降糖膠囊稠膏制備：番石榴葉、生地、山藥、山茱萸、甘草等洗凈，加水12 倍量水浸泡2 h，煎煮1.5h，第2次加10 倍量水，煎煮1 h，濾液過(guò)濾，合并，放冷，加入3 倍量95%乙醇，攪拌均勻，放置過(guò)夜，過(guò)濾，濾液回收乙醇后，濃縮成可供小鼠灌胃（ig）給藥的最大濃度的稠膏，加入天花粉（破壁）混合，既得，相對(duì)于3.56 g生藥/mL，使用時(shí)按要求用蒸餾水稀釋，藥品批號(hào)：20100620。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

清潔級(jí)昆明種小鼠，體重18～22 g，由廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物許可證號(hào)：2010A032。

2 方法與結(jié)果

2.1 方法

2.1.1 復(fù)方消渴降糖膠囊最大耐受量實(shí)驗(yàn) 清潔級(jí)昆明種小鼠，18～22 g，雌雄各半，隨機(jī)分正常對(duì)照組、復(fù)方消渴降糖膠囊組，每組動(dòng)物20只。小鼠禁食不禁水12 h后按小鼠體重灌胃給藥2次，體積為0.4 mL/10 g（3.56 g生藥/mL），給藥時(shí)間間隔8 h，間隔期禁食不禁水，空白對(duì)照組則同時(shí)給予等體積的生理鹽水。給藥后動(dòng)物正常飲食，連續(xù)觀察小鼠7 d內(nèi)的飲食、體重變化、毛發(fā)、分泌物及大小便等指標(biāo)。7 d后處死小鼠尸檢，觀察各鼠主要臟器（肝、心、脾、肺、腎），觀察是否有任何異常改變。

2.1.2 復(fù)方消渴降糖膠囊對(duì)正常小鼠血糖的影響[2-3]清潔級(jí)昆明種小鼠48只，18～22 g，雌雄各半，隨機(jī)分為4 組，即正常對(duì)照組（A組）、復(fù)方消渴降糖膠囊高、中、低劑量（30.0、15.0、7.5g/kg，以原生藥材計(jì)，下同）組（B、C、D 組），每組 12只。各組小鼠均按相應(yīng)劑量灌胃給藥，A組給予等量生理鹽水，每天2次，連續(xù)10 d，于末次給藥前禁食12 h，末次給藥后2 h，小鼠靜脈取血測(cè)空腹血糖值。

2.1.3 復(fù)方消渴降糖膠囊對(duì)四氧嘧啶性糖尿病小鼠血糖的影響[4]清潔級(jí)昆明種小鼠約120只，18～22 g，雌雄各半，取12只作為正常對(duì)照組（A組），靜脈注射20 mL/kg生理鹽水，其余造四氧嘧啶性糖尿病模型小鼠，靜脈注射四氧嘧啶0.1 g/kg，72 h后靜脈取血測(cè)血糖值，去除血糖值<11.0 mmol/L小鼠后，隨機(jī)分為5 組，即四氧嘧啶性糖尿病小鼠模型組（B組）、苯乙雙胍陽(yáng)性對(duì)照組（C組）、復(fù)方消渴降糖膠囊組（高、中、低劑量）（D、E、F組），每組12只。A組灌胃給予等體積生理鹽水，B組灌胃給予苯乙雙胍片0.2 g/kg，C、D、E分別灌胃給予復(fù)方消渴降糖膠囊30.0、15.0、7.5g/kg，每天 2 次，連續(xù) 10 d，末次給藥后禁食2 h，靜脈取血測(cè)血糖值。

2.1.4 復(fù)方消渴降糖膠囊對(duì)四氧嘧啶性糖尿病小鼠葡萄糖糖耐量的影響[5]實(shí)驗(yàn)分為5 組，即正常對(duì)照組（A組）、四氧嘧啶性糖尿病小鼠模型組（B組）、復(fù)方消渴降糖膠囊組（高、中、低劑量）（C、D、E 組），每組 12 只，造模及給藥同“2.1.3”項(xiàng)下，末次給藥后禁食2 h，小鼠靜脈抽取血樣后以該血糖值作為0 h血糖濃度，同時(shí)各組小鼠立即灌胃葡萄糖2.5g/kg，于0.5、2.0 h抽取血樣并測(cè)量血糖值，觀察復(fù)方消渴降糖膠囊對(duì)四氧嘧啶糖尿病小鼠葡萄糖糖耐量的影響。

2.1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件處理， 計(jì)量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。以P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.2 結(jié)果

2.2.1 復(fù)方消渴降糖膠囊最大耐受量實(shí)驗(yàn)結(jié)果 各組小鼠未見(jiàn)死亡，在第2次給藥后，B組小鼠進(jìn)食減少及活動(dòng)表現(xiàn)減少，第2 天能恢復(fù)正常活動(dòng)及進(jìn)食。所有小鼠體重自然增長(zhǎng)，兩組動(dòng)物體重比較無(wú)顯著性差異。小鼠毛色、常分泌物及大小便正常。7 d后處死小鼠，檢視心、肝、脾、肺、腎、胃腸等重要臟器，結(jié)果未見(jiàn)異常改變。按生藥量計(jì)復(fù)方消渴降糖膠囊對(duì)小鼠灌胃給藥的最大耐受量為142.4 g生藥/g。

2.2.2 復(fù)方消渴降糖膠囊對(duì)正常小鼠血糖的影響 與正常對(duì)照組比較，復(fù)方消渴降糖膠囊高劑量組能顯著降低正常小鼠血糖（P<0.05），復(fù)方消渴降糖膠囊中劑量及低劑量組雖然也能降低正常小鼠血糖水平，但經(jīng)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。 見(jiàn)表1。

2.2.3 復(fù)方消渴降糖膠囊對(duì)四氧嘧啶性糖尿病小鼠血糖的影響 與正常對(duì)照組比較，四氧嘧啶性糖尿病小鼠模型組血糖水平顯著升高（P<0.05），與四氧嘧啶性糖尿病小鼠模型組比較，苯乙雙胍陽(yáng)性對(duì)照組、復(fù)方消渴降糖膠囊高、中、低劑量組能顯著降低四氧嘧啶性糖尿病小鼠血糖 （P<0.05），與苯乙雙胍陽(yáng)性對(duì)照組比較，復(fù)方消渴降糖膠囊高、中、低劑量組著降低四氧嘧啶性糖尿病小鼠血糖效果相當(dāng) （P>0.05），而復(fù)方消渴降糖膠囊高、中、低劑量組組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。 見(jiàn)表2。

表1 復(fù)方消渴降糖膠囊對(duì)正常小鼠血糖的影響（±s，n=12）

表1 復(fù)方消渴降糖膠囊對(duì)正常小鼠血糖的影響（±s，n=12）

注：與A組比較，*P<0.05

組別 動(dòng)物數(shù)（只）劑量（g/kg）血糖值（mmol/L）正常對(duì)照組（A組）復(fù)方消渴降糖膠囊組高劑量組（B組）復(fù)方消渴降糖膠囊組中劑量組（C組）復(fù)方消渴降糖膠囊組低劑量組（D組）12 12 12 12-30.0 15.0 7.56.02±1.154.64±0.96*5.44±1.16 5.82±1.28

表2 復(fù)方消渴降糖膠囊對(duì)四氧嘧啶性糖尿病小鼠血糖的影響（±s，n=12）

表2 復(fù)方消渴降糖膠囊對(duì)四氧嘧啶性糖尿病小鼠血糖的影響（±s，n=12）

注：與A組比較，*P<0.05；與B組比較，△P<0.05

組別 動(dòng)物數(shù)（只）劑量（g/kg）血糖值（mmol/L）正常對(duì)照組（A組）四氧嘧啶性糖尿病小鼠模型組（B組）苯乙雙胍陽(yáng)性對(duì)照組（C組）復(fù)方消渴降糖膠囊組高劑量組（D組）復(fù)方消渴降糖膠囊組中劑量組（E組）復(fù)方消渴降糖膠囊組低劑量組（F組）12 12 12 12 12 12--0.2 30.0 15.0 7.56.27±1.08 22.51±3.13*15.46±2.52*△13.95±3.98*△15.39±2.27*△16.08±3.80*△

2.2.4 復(fù)方消渴降糖膠囊對(duì)四氧嘧啶性糖尿病小鼠葡萄糖糖耐量的影響 與正常對(duì)照組比較，四氧嘧啶性糖尿病小鼠模型組在 0、0.5、2.0 h時(shí)間點(diǎn)的血糖顯著升高（P<0.05）；與四氧嘧啶性糖尿病小鼠模型組比較，復(fù)方消渴降糖膠囊高、中、低劑量組能顯著控制模型小鼠血糖的升高（P<0.05），復(fù)方消渴降糖膠囊高、中、低劑量組組間比較無(wú)明顯差異（P>0.05）。見(jiàn)表3。

表3 復(fù)方消渴降糖膠囊對(duì)四氧嘧啶性糖尿病小鼠葡萄糖糖耐量的影響（±s，n=12）

表3 復(fù)方消渴降糖膠囊對(duì)四氧嘧啶性糖尿病小鼠葡萄糖糖耐量的影響（±s，n=12）

注：與A組比較，*P<0.05；與B組比較，△P<0.05

組別 動(dòng)物數(shù)（只）劑量（g/kg）血糖值（mmol/L）0 h 0.5h 2.0 h正常對(duì)照組（A）四氧嘧啶性糖尿病小鼠模型組（B組）復(fù)方消渴降糖膠囊組高劑量組（C組）復(fù)方消渴降糖膠囊組中劑量組（D組）復(fù)方消渴降糖膠囊組低劑量組（E組）12 12--6.27±1.08 22.51±3.13*10.76±1.87 37.55±3.72*7.82±1.1527.74±2.73*1230.013.95±3.98*△25.19±5.23*△19.01±3.61*△1215.015.39±2.27*△25.60±3.50*△20.50±2.37*△127.516.38±3.80*△25.65±4.31*△21.75±4.00*△

3 討論

復(fù)方消渴降糖膠囊為在研中藥6 類新藥，其處方由番石榴葉、天花粉、生地、山藥、山茱萸、甘草等6 味藥組成。番石榴葉系桃金娘科番石榴屬植物番石榴的干燥葉及帶葉嫩枝，廣東、廣西、四川和云南等地區(qū)均有野生及人工栽培[6]，其含有黃酮類化合物、三萜類、鞣質(zhì)類、揮發(fā)油、有機(jī)酸等多種活性化學(xué)成分[7]，具有明顯的降血糖功降血脂及降血壓作用[8]，能生津止渴，甘平養(yǎng)胃，斂澀固陰，在中外民間均有廣泛使用，為處方中君藥。天花粉Trichosanthis Radix味甘、微苦、性微寒，具有清熱瀉火、生津止渴、消腫排膿之功效；用于熱病煩渴、肺熱燥咳、內(nèi)熱消渴、瘡瘍腫毒[9]，為臣藥；生地、山藥、山茱萸、甘草共奏養(yǎng)陰生津、滋陰清熱之功效，為佐使藥。全方具有清熱生津，除煩止渴的作用，臨床用于熱病津傷口渴、多飲、多尿、多食、消瘦、體倦無(wú)力、尿糖及血糖升高之消渴癥，臨床使用中具有良好的療效。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)進(jìn)一步研究其急性毒性及降糖作用，對(duì)于該藥物的開(kāi)發(fā)提供數(shù)據(jù)支持。

糖尿病發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，為多種因素綜合的結(jié)果[10]，是以慢性血糖水平增高為特征的代謝性疾病群，臨床治療藥物種類大多數(shù)為西藥，其不良反應(yīng)較大，在改善胰島素抵抗方面不理想，而從天然藥物中尋找降血糖有效成分的研究日益受到重視[11]。復(fù)方消渴降糖膠囊急性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，對(duì)小鼠灌胃給藥的最大耐受量為142.4 g生藥/kg，當(dāng)于成人日用量的100 倍以上，安全無(wú)毒性[12]。四氧嘧啶是特異性的β細(xì)胞毒劑，其在體內(nèi)通過(guò)產(chǎn)生超氧自由基并破壞胰島的β細(xì)胞，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)DNA受到損傷，同時(shí)激活多聚ADP核糖體合成酶的活性，進(jìn)而導(dǎo)致mRNA功能受損，致使β細(xì)胞合成前胰島素顯著減少，并引起實(shí)驗(yàn)性糖尿病[13-14]。通過(guò)實(shí)驗(yàn)表明，復(fù)方消渴降糖膠囊（高劑量組）能顯著降低正常小鼠血糖，能顯著性控制四氧嘧啶性糖尿病小鼠的血糖的升高，并且對(duì)于四氧嘧啶性糖尿病小鼠的糖耐量的控制具有良好的效果，研究結(jié)果提示復(fù)方消渴降糖膠囊具有相似于磺脲類和雙胍類降糖藥的作用[5]，值得進(jìn)一步研究。目前多數(shù)研究表明，復(fù)方中藥在降低血糖作用機(jī)制方面可能與刺激胰島β細(xì)胞釋放胰島素、增加胰島素與靶組織及受體的親和力、促進(jìn)外周組織對(duì)葡萄糖利用或影響到一些和糖代謝途徑關(guān)系密切的酶的作用等有關(guān)[11]，本研究雖然觀察到復(fù)方消渴降糖膠囊具有良好的控制血糖的效果，但其作用機(jī)制尚不能解釋清楚。由于復(fù)方中藥在治療糖尿病療效方面體現(xiàn)在多靶點(diǎn)，多路徑的調(diào)控，所以研究復(fù)方消渴降糖膠囊對(duì)促進(jìn)胰島素的分泌，調(diào)節(jié)體內(nèi)糖、蛋白質(zhì)、脂肪的代謝及自由基的影響以及其抗炎及免疫調(diào)節(jié)作用[15]是下一步研究的方向。

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