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        低溫脅迫對觀光木幼苗離體葉片生理特性的影響

        2012-09-12 00:55:44林寧謝安德王凌暉潘啟龍秦武明唐春紅
        湖北農(nóng)業(yè)科學(xué) 2012年16期
        關(guān)鍵詞:低溫脅迫生理特性葉片

        林寧 謝安德 王凌暉 潘啟龍 秦武明 唐春紅

        摘要:以一年生盆栽觀光木幼苗為材料,研究了低溫脅迫(12、8、4、0 ℃)下幼苗葉片有關(guān)的生理生化指標(biāo)變化及其與抗寒性的關(guān)系。結(jié)果表明,低溫對觀光木葉片的相對電導(dǎo)率、丙二醛含量、超氧化物歧化酶活性、脯氨酸和可溶性糖含量的影響均達到極顯著水平。隨溫度的降低,觀光木葉片的相對電導(dǎo)率、脯氨酸和可溶性糖含量不斷升高;丙二醛含量呈先上升后略下降的變化趨勢,但總體高于對照(25 ℃)的含量;超氧化物歧化酶活性也不斷升高,且在0 ℃時達到最大值,為對照的4.43倍。相關(guān)性分析結(jié)果顯示,低溫與相對電導(dǎo)率、可溶性糖含量的相關(guān)系數(shù)均達0.894以上,呈顯著的負(fù)相關(guān),但低溫與丙二醛含量、超氧化物歧化酶活性、脯氨酸含量的相關(guān)性不顯著。

        關(guān)鍵詞:觀光木;葉片;低溫脅迫;生理特性

        中圖分類號:Q949.747.1;Q948.112+.2;Q946 文獻標(biāo)識碼:A文章編號:0439-8114(2012)16-3524-04

        Effects of Low-Temperature Stress on Physiological Characteristics of In VitroTsoongiodendron odorum Seedlings Leaves

        LIN Ning1,XIE An-de2,WANG Ling-hui2,PAN Qi-long2,QIN Wu-ming2,TANG Chun-hong2

        (1. Liuwan National Forest Farm of Guangxi Zhuang Autonomous Region,Yulin 537800,Guangxi,China;

        2. College of Forestry, Guangxi University,Nanning 530005,China)

        Abstract: The relationship between cold-resistance and physiological changes of seedlings leaves under cold stress(12, 8, 4, 0 ℃) was studied using one-year-old pot Tsoongiodendron odorum as material. The results showed that the effects of low-temperature on relative electric conductivity (REC), malondialdehyde (MDA) content, superoxide dismutase (SOD) activity, proline (Pro) and soluble sugar content in leaves of T. odorum were extremely significant. With the decreasing of temperature, the REC, Pro and soluble sugar content increased obviously; the MDA content increased firstly and then reduced slightly, but generally was higher than that of control(25 ℃); the activity of SOD increased continuously and reached the peak(4.43 times of that of control) at 0 ℃. Correlation analysis showed that the correlation between low- temperature and REC, soluble sugar content was significantly negative as the correlation efficient was above 0.894. However, the relevance between low-temperature and MDA content, SOD activity, Pro content was not significant.

        Key words: Tsoongiodendron odorum Chun.; leaves; low-temperature stress; physiological characteristics

        觀光木(Tsoongiodendron odorum Chun.)又名香花木、香木楠、宿軸木蘭,為木蘭科(Magnoliaceae)觀光木屬(Tsoongiodendron Chun)多年生常綠喬木,是中國特有的植物,廣泛分布于福建、廣東、海南、廣西等?。ㄗ灾螀^(qū))以及云南省東南部、江西省南部等地區(qū)[1]。觀光木以其良好的速生性與豐產(chǎn)性而成為亞熱帶地區(qū)極有發(fā)展前途的速生用材樹種[2],而且樹冠濃密、株型優(yōu)美、花朵漂亮、香氣襲人,是城市園林綠化及景觀建設(shè)中具有較高觀賞價值的優(yōu)良樹種;并且樹干挺直、木材輕軟、結(jié)構(gòu)細(xì)、開裂少、易加工,是家俱、樂器和膠合板生產(chǎn)等工業(yè)領(lǐng)域的良好用材;在精細(xì)化工方面還可提取香料;同時,由于觀光木是中國特有的古老孑遺樹種,對研究古代植物區(qū)系、古地理、古氣候都有重要的科學(xué)價值;此外,該種為木蘭科的單種屬植物,目前多呈零星分布,數(shù)量極少,加上其種子易喪失發(fā)芽能力,更新困難,隨著森林的破壞及亂砍濫伐現(xiàn)象的加劇,若不采取有效措施加以保護,有滅絕的危險,現(xiàn)在已處于瀕危狀態(tài),被列為國家二級保護植物[3]。溫度作為重要的環(huán)境因子之一,對植物的地域分布和生長發(fā)育等方面起著重要的作用。低溫能影響植物的生長代謝,引起相關(guān)生理指標(biāo)的變化。一般認(rèn)為,脯氨酸(Proline,Pro)和可溶性糖(Soluble sugar)是植物重要的滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)和防脫水劑,與植物的抗逆性密切相關(guān)。其含量的增加有利于提高植物的抗寒性能[4]。目前有關(guān)對觀光木的抗寒性研究較少,僅李剛等[5]、方小平等[6]分別對南京市和貴州省的觀光木幼苗的半致死溫度(Semilethal tempera-ture,LT50)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量或超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)活性進行了探討,尚未見對兩廣地區(qū)的觀光木以及結(jié)合滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)如脯氨酸、可溶性糖的含量等生理指標(biāo)進行過研究。為此,試驗以南寧市的鄉(xiāng)土樹種觀光木幼苗離體枝條上的葉片為材料,研究其在低溫脅迫下的細(xì)胞膜透性(Cell membrane permeability)、MDA含量、SOD活性以及其他滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)含量等生理生化指標(biāo)的變化規(guī)律,探索其抗寒機理及抗寒能力,以期為觀光木的遷地保護、栽培和引種馴化等方面提供一定的技術(shù)依據(jù)。

        1材料與方法

        1.1材料及處理

        試驗于廣西大學(xué)林學(xué)院苗圃教學(xué)實習(xí)基地和實驗室內(nèi)進行。2010年3月22日將園土和腐殖土按3∶1(體積比)充分混合后,裝入規(guī)格為15 cm (直徑)×20 cm(高) 的花盆中,選用一年生觀光木實生苗進行栽植,每盆1株。9月20日,在苗高約35 cm時,隨機采集長勢良好、無病蟲害的幼苗枝條,裝入密封保鮮袋中帶回實驗室。先用去離子水洗凈枝條和葉片表面的污物,吸水紙吸干水分,然后放入預(yù)先設(shè)置為25 ℃的人工氣候箱中進行低溫處理。溫度分別設(shè)置為25(CK)、12、8、4、0 ℃共5個不同梯度的處理,每個處理設(shè)6個重復(fù);且溫度以2 ℃/h的速度降溫,當(dāng)溫度降至某一設(shè)定值后,保持24 h,并隨機取葉片測定;然后繼續(xù)降溫。降溫期間的環(huán)境條件是光照時間為處理日當(dāng)天8∶00~20∶00、光照強度為120 μmol/(m2·s)、空氣相對濕度保持在80%左右。

        1.2測定方法

        植物細(xì)胞膜透性的高低是植物處在逆境條件下細(xì)胞膜的完整程度與穩(wěn)定性的體現(xiàn),也是衡量植物抗逆性強弱的重要指標(biāo)之一,在正常情況下,細(xì)胞膜對進出細(xì)胞的物質(zhì)具有選擇性透過能力;當(dāng)植物受到逆境脅迫后,植物的形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變,細(xì)胞膜受到破壞,膜的透性增加,從而使細(xì)胞內(nèi)的電解質(zhì)外滲,進而使植物細(xì)胞浸提液的相對電導(dǎo)率(Relative electric conductivity,REC)增大;細(xì)胞膜透性增大(相對電導(dǎo)率增大)的水平與受傷害的程度有關(guān)[7]。所以細(xì)胞膜透性用相對電導(dǎo)率表示,相對電導(dǎo)率采用電導(dǎo)儀法測定[7];MDA含量采用硫代巴比妥酸顯色法測定[7],SOD活性采用NBT光化還原法測定[8],脯氨酸含量采用酸性茚三酮法測定[8],可溶性糖含量采用蒽酮比色法測定[7]。對試驗所得數(shù)據(jù)進行方差分析和相關(guān)性分析。

        2結(jié)果與分析

        2.1低溫脅迫對觀光木葉片細(xì)胞膜透性的影響

        細(xì)胞膜是植物抵御低溫脅迫的關(guān)鍵結(jié)構(gòu),對低溫較為敏感,其電解質(zhì)的變化可顯示細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能的受損程度[9]。低溫脅迫對觀光木葉片細(xì)胞膜透性的影響測定結(jié)果見圖1,由圖1可以看出,葉片組織相對電導(dǎo)率隨著溫度的降低逐漸升高,當(dāng)溫度降至12 ℃時,相對電導(dǎo)率緩慢增加,為22.11%,是對照的1.54倍;而繼續(xù)降低到8 ℃與4 ℃時,相對電導(dǎo)率顯著增加到37.38%和55.54%,分別是對照的2.60、3.87倍;再降到0 ℃時,相對電導(dǎo)率達到61.78%,為對照的4.30倍。說明溫度越低,相對電導(dǎo)率增加的幅度越大,細(xì)胞膜受到傷害的程度也就越嚴(yán)重。方差分析結(jié)果表明,低溫對相對電導(dǎo)率的影響達到了極顯著差異水平(P<0.01)。

        2.2低溫脅迫對觀光木葉片MDA含量的影響

        MDA是膜脂過氧化的最終產(chǎn)物之一,能嚴(yán)重?fù)p害植物的細(xì)胞膜系統(tǒng),干擾植物的光合、呼吸及其他代謝過程,其含量的高低是膜脂過氧化程度的重要標(biāo)志[10]。低溫脅迫對觀光木葉片MDA含量的影響測定結(jié)果見圖2,由圖2可見,隨著溫度的降低,葉片MDA含量呈先升高后略下降的變化趨勢,但總體含量均高于對照。當(dāng)溫度降至12 ℃時,MDA含量緩慢增加,為14.43 nmol/g;到8 ℃時,MDA含量明顯增加,為21.86 nmol/ g;到4 ℃時達到最大值,為38.89 nmol/g,是對照的2.91倍,說明此時的膜脂過氧化程度最嚴(yán)重;到0 ℃時,MDA含量為33.24 nmol/g,比4 ℃時的含量略有下降,可能是此時體內(nèi)較高的SOD活性抑制了膜脂過氧化作用所致。方差分析結(jié)果表明,低溫對MDA含量的影響呈極顯著差異水平(P<0.01)。

        2.3低溫脅迫對觀光木葉片SOD活性的影響

        SOD是能清除氧自由基的細(xì)胞保護酶,在植物體內(nèi)可提高植物組織的抗氧化能力,其活性的大小與植物的抗逆性密切相關(guān)。低溫脅迫對觀光木葉片SOD活性的影響測定結(jié)果見圖3。由圖3可以看出,葉片SOD活性隨著溫度的降低呈不斷增加的變化趨勢。當(dāng)溫度降至12 ℃和8 ℃時,SOD活性增加緩慢,分別為51.56、64.93 U/g,分別是對照的1.16、1.47倍;降到4 ℃之后,SOD活性顯著增加;到0 ℃時,SOD活性達到196.18 U/g,是對照的4.43倍。說明隨著溫度的降低,刺激了SOD活性增強。方差分析結(jié)果表明,低溫對SDO活性的影響達到了極顯著差異水平(P<0.01)。

        2.4低溫脅迫對觀光木葉片Pro含量的影響

        Pro是一種具有高度水溶性的游離氨基酸,作為滲透調(diào)節(jié)物質(zhì),能保持細(xì)胞原生質(zhì)體與環(huán)境的滲透平衡,還可穩(wěn)定生物大分子結(jié)構(gòu)、保持膜結(jié)構(gòu)的完整性[11]。低溫脅迫對觀光木葉片Pro含量的影響測定結(jié)果見圖4,由圖4可見,隨著溫度的降低,葉片Pro含量呈不斷增加的變化趨勢。當(dāng)溫度降至12 ℃時,Pro含量顯著增加至504.63 μg/g(FW),為對照的1.19倍;之后緩慢增加,在0 ℃時,Pro含量達587.96 μg/g(FW),為對照的1.39倍,說明Pro含量一直保持著較高的水平,這對于細(xì)胞抵御低溫脅迫具有一定的積極作用。方差分析結(jié)果表明,低溫對Pro含量的影響達到了極顯著差異水平(P<0.01)。

        2.5低溫脅迫對觀光木葉片可溶性糖含量的影響

        可溶性糖是植物體內(nèi)的重要代謝產(chǎn)物,在抗寒過程中發(fā)揮著重要作用。低溫脅迫對觀光木葉片可溶性糖含量的影響測定結(jié)果見圖5,由圖5可以看出,隨著溫度的降低,葉片可溶性糖含量不斷增加。其中,當(dāng)溫度降至12 ℃時,可溶性糖含量較低,與對照的差異不顯著(P >0.05);之后可溶性糖含量顯著增加,在8 ℃和4 ℃時分別為5.96%、6.06%;到0 ℃時,可溶性糖含量達6.52%,為對照的1.34倍。方差分析結(jié)果表明,低溫對可溶性糖含量的影響達極顯著差異水平(P<0.01)。

        2.6低溫與各生理指標(biāo)之間的相關(guān)性分析

        在低溫脅迫下,植物的生理代謝因受到干擾而發(fā)生紊亂,使植物受傷甚至死亡。分析低溫與各生理指標(biāo)之間的相關(guān)性,有助于發(fā)現(xiàn)低溫與各生理指標(biāo)之間以及各生理指標(biāo)之間的緊密聯(lián)系程度。低溫脅迫下觀光木葉片各生理指標(biāo)變化的相關(guān)性分析結(jié)果見表1,由表1可知,低溫與相對電導(dǎo)率、可溶性糖含量呈顯著的負(fù)相關(guān),但與MDA含量、SOD活性、Pro含量的相關(guān)性不顯著;相對電導(dǎo)率與MDA含量、SOD活性呈顯著的正相關(guān),與可溶性糖含量呈極顯著的正相關(guān)。因此,低溫脅迫下可以通過測定植物細(xì)胞的相對電導(dǎo)率或可溶性糖含量等指標(biāo)來間接反映出觀光木的抗寒性能。

        3小結(jié)與討論

        Lyons[12]認(rèn)為,在低溫脅迫下受到冷害的植物細(xì)胞,細(xì)胞膜首先發(fā)生物相變化,膜脂從液晶態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)槟z態(tài),膜收縮后出現(xiàn)裂縫,造成細(xì)胞內(nèi)含物外滲,導(dǎo)致膜透性增大。與此同時,植物細(xì)胞內(nèi)活性氧代謝的平衡被破壞,有利于活性氧的產(chǎn)生,從而引發(fā)或加劇膜脂過氧化作用,造成細(xì)胞膜系統(tǒng)的損傷。在試驗中,隨著溫度的降低(從25 ℃降到4 ℃),觀光木葉片的相對電導(dǎo)率、MDA含量不斷升高,可能的原因是在溫度降低時SOD活性增加緩慢、酶的活性保持在較低的水平所致,也說明是細(xì)胞對低溫環(huán)境的一個適應(yīng)過程;而在0 ℃時,相對電導(dǎo)率升高的程度減緩,MDA含量略有下降,此時的SOD活性達到最大值,說明一定的低溫能刺激SOD活性的大大增強,SOD能夠及時清除體內(nèi)過多的活性氧自由基,減輕膜脂過氧化引起的膜傷害,保護膜的完整性,從而使觀光木表現(xiàn)出能忍受0 ℃的低溫。同時,這也可能是細(xì)胞對低溫脅迫的一種保護性應(yīng)激反應(yīng)。這與王永紅等[9]對山茶(Camellia japonica L.)的研究結(jié)果相一致;但與李晶等[13]對紅松(Pinus koraiensis Sieb. et Zucc.)、楊德浩等[14]對歐洲白樺(Betula pendula Roth.)的SOD活性研究結(jié)果不相一致,可能的原因是不同樹種對于低溫脅迫的抗寒機理或響應(yīng)機制不一樣所致。相關(guān)性分析結(jié)果表明,相對電導(dǎo)率與MDA含量、SOD活性呈顯著的正相關(guān)。

        一般情況下,植物體內(nèi)的游離脯氨酸含量并不多;但經(jīng)低溫脅迫后,其作為細(xì)胞內(nèi)的滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)、防凍劑或膜穩(wěn)定劑[15]會迅速增加含量。不過目前有關(guān)脯氨酸的積累與植物抗寒性的關(guān)系存在2種不同的觀點,一種認(rèn)為脯氨酸的積累與植物抗寒性存在著一定的相關(guān)性;另一種則認(rèn)為脯氨酸的積累與植物抗寒性無關(guān)。在試驗中,觀光木葉片脯氨酸含量隨著溫度的降低不斷增加,且相關(guān)性分析表明,脯氨酸含量與低溫存在著一定的負(fù)相關(guān)性(相關(guān)系數(shù)=-0.812);這與王連敏等[16]對玉米(Zea mays L.)、黎明等[17]對香木蓮(Manglietia aromatica Dandy)的抗寒性研究結(jié)果一致。但Yelenosky[18]在對柑橘(Citrus reticulata Blanco)的研究中指出,脯氨酸積累與柑橘的抗寒性無關(guān)。

        可溶性糖作為低溫脅迫下植物細(xì)胞的主要滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)之一,一直被研究者所關(guān)注。簡令成[19]認(rèn)為,在低溫脅迫初期,植物可能依賴其細(xì)胞內(nèi)可溶性糖含量的增加來抵御低溫傷害;而當(dāng)脅迫加劇時,可能轉(zhuǎn)為依靠細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)與核酸的變化和提高來抵御低溫傷害??扇苄蕴呛颗c植物抗寒性之間存在著相關(guān)性[4]。試驗中,觀光木葉片的可溶性糖含量隨著溫度的降低明顯在增加;且相關(guān)性分析結(jié)果表明,可溶性糖含量與低溫呈顯著的負(fù)相關(guān)(相關(guān)系數(shù)=-0.894),這與黎明等[17]對香木蓮、李曉儲等[20]對樂昌含笑(Michelia chapensis Dandy)的研究結(jié)果一致。

        植物的抗寒性不僅與植物本身的遺傳基因有關(guān),而且還與植物的生長環(huán)境有關(guān)。李剛等[5]研究表明,南京市一年生觀光木幼苗能忍耐-6 ℃左右的低溫;方小平等[6]研究表明,貴州省二年生觀光木幼苗能忍耐-4 ℃左右的低溫,而本試驗的研究結(jié)果卻表明,南寧市一年生觀光木幼苗能忍耐0 ℃左右的低溫,這種差異性可能是觀光木對當(dāng)?shù)貧夂驐l件適應(yīng)性的結(jié)果或是生長發(fā)育階段不同、亦或是低溫處理的溫度不同所導(dǎo)致的。同時本試驗只是在人工模擬低溫條件下對觀光木幼苗離體枝條葉片的抗寒性進行了初步研究,對于其抗寒能力的強弱還需要在田間進行真實性抗寒比較來檢驗。

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