楊婧，張博，辛廣，*，李書倩，孫曉榮，劉長江

（1.沈陽農業(yè)大學食品學院，遼寧沈陽 110161；2.鞍山師范學院化學系，遼寧鞍山 114007）

軟棗獼猴桃（Actinidia arguta Sieb.et Zucc）又名軟棗子、獼猴梨、藤瓜和藤棗。為獼猴桃科獼猴桃屬，多年生落葉藤本植物。軟棗獼猴桃是九種光果獼猴桃種類之一[1]。在我國主要分布于東北、華北、山東、西北及長江流域，其中東北南部山區(qū)較多見[2]，朝鮮、日本、俄羅斯亦有分布[3]。軟棗獼猴桃富含各種營養(yǎng)成分，VC最高達430.8 mg/100g[4]，含有近20種氨基酸及20多種無機元素，果實含豐富的超氧化物歧化酶（SOD）[5]，具有止渴、解熱、利尿、祛痰等作用[6]。

軟棗獼猴桃具有一定的抑菌性[6]和抗氧化性[7]，但由于軟棗獼猴桃果肉中含有大量的果膠類物質[8]，直接影響揮發(fā)油量的提取。利用果膠酶處理軟棗獼猴桃，是由于果膠物質主要存在于植物初生壁和細胞中間，而復合果膠酶能夠除去細胞壁中的果膠質，從而可以有效地破除細胞壁，使細胞中的活性成分溶解出來[9]，使得揮發(fā)性物質的產率大大提高，在生產中有重要的應用價值。

目前對軟棗獼猴桃揮發(fā)性物質提取方法的研究日益增多，主要的提取方法有固相微萃取法[10]和連續(xù)蒸餾法[11]等。利用同時蒸餾萃取裝置進行揮發(fā)物質的提取，特別是對果實進行酶處理后揮發(fā)物質的提取尚未見報道。本文采用同時蒸餾萃取法分別對對照處理及添加1%果膠酶軟棗獼猴桃進行揮發(fā)性成分的提取，用GC-MS對其揮發(fā)性成分進行定性分析。為進一步探討軟棗獼猴桃揮發(fā)油的生物活性提供參考。

1 材料

1.1 軟棗獼猴桃

采于鞍山九龍川，實驗材料生理指標見表1。

表1 采摘的軟棗獼猴桃的生理指標Table 1 Physiological indicators of Actinidia arguta Sieb.et Zucc

1.2 儀器與試劑

同時蒸餾萃取裝置：北京墾堡博美玻璃儀器有限公司；旋轉蒸發(fā)儀RE-52AA：上海亞榮生化儀器廠；電子天平；可調式電熱套；果膠酶：上海藍季科技發(fā)展有限公司；恒溫培養(yǎng)箱：武漢海聲達儀器設備有限公司；二氯甲烷，無水硫酸鈉：AR，天津市光復科技發(fā)展有限公司；HP6890/5973氣相色譜-質譜計算機聯(lián)用儀：美國惠普公司。

1.3 方法

取大小一致、無病蟲害的軟棗獼猴桃500 g；添加1%果膠酶的軟棗獼猴桃500 g（45℃的恒溫箱中，保持4 h），將兩種軟棗獼猴桃分別置于2 000 mL圓底燒瓶，加入1 000 mL蒸餾水，同時蒸餾萃取儀的另一端為裝有60 mL的二氯甲烷的250 mL圓底燒瓶，50℃恒溫水浴加熱。同時蒸餾萃取得到二氯甲烷萃取液，用適量的無水硫酸鈉干燥過夜，濾液旋轉蒸發(fā)除去溶劑，分別得到淡黃色軟棗獼猴桃揮發(fā)油0.4 g和0.9 g，待GC-MS分析。

1.4 氣相色譜-質譜測定

氣相色譜條件：色譜柱為HP-5（25.0 m×0.25 mm，0.25 μm）彈性石英毛細管柱；載氣為He氣，載氣流量1 mL/min；進樣口溫度230℃；無分流進樣；程序升溫40℃→230℃（5℃/min）；解析5 min。

質譜條件：離子源為EI源，離子源溫度230℃；接口溫度230℃；四級桿溫度150℃；倍增器電壓1200eV；電離電壓70 eV；發(fā)射電流34.6 A；掃描范圍20 amu～500 amu。

1.5 定性及定量分析

定性分析：取同時蒸餾萃取的揮發(fā)性成分，用氣相色譜-質譜計算機聯(lián)用儀進行分析鑒定。通過G1701BA化學工作站數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，檢索NIST98譜圖庫，并分別與八峰索引及EPA/NIH質譜圖集的標準譜圖進行對照、復合，再結合有關文獻進行人工譜圖解析，確定揮發(fā)油中的各個化學成分。

定量分析：通過G1701BA化學工作站數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，按峰面積歸一化法進行定量分析，分別求得各化學成分在軟棗獼猴桃果實揮發(fā)性成分中的相對百分含量。

2 結果與分析

2.1 不同處理軟棗獼猴桃揮發(fā)油產率

由化學工作站給出對照處理和1%果膠酶處理的揮發(fā)性成分中化學成分的總離子圖，結果如圖1、2。軟棗獼猴桃揮發(fā)油提取率見表2。

表2軟棗獼猴桃揮發(fā)油提取率Table 2 Essential oil extraction rate of Actinidia arguta Sieb.et Zucc

如表2所示，經過1%果膠酶處理的軟棗獼猴桃揮發(fā)油產率為0.18%，是對照處理軟棗獼猴桃揮發(fā)油產率的2.25倍。

從兩種處理的軟棗獼猴桃果實揮發(fā)性物質中共鑒定出41種化合物，將確定的41種成分及求得的各成分在揮發(fā)性物質中的百分含量列于表3，其中主要成分為糠醛、棕櫚酸、（E）-2-己烯醛、正己醇、1-甲基-4-（1-甲基亞乙基） 環(huán)己烯、苯乙醛、（Z，Z，Z）-9，12，15-十八烷三烯酸乙酯。從添加1%果膠酶處理的軟棗獼猴桃揮發(fā)油中比對照處理的軟棗獼猴桃揮發(fā)油多提取出12種揮發(fā)性成分，其中主要有1，3，3-三甲基-2-氧雜二環(huán)[2.2.2]辛烷，相對含量相差0.92%、1-甲基-4-（1-甲基亞乙基）環(huán)己烯，相對含量相差0.62%、十四（烷）酸，相對含量相差1.03%、棕櫚酸，相對含量相差 2.26%、（Z，Z，Z）-9，12，15-十八烷三烯酸乙酯，相對含量相差1.06%。將兩者化學成分類別區(qū)別列于表4。兩種不同處理的軟棗獼猴桃的揮發(fā)油中提取出的化合物類別有明顯差異。其中酸類和胺類物質的個數(shù)相同，而烯烴類物質相差3種，酯類物質相差7種，醇類物質相差2種。

表3 軟棗獼猴桃揮發(fā)油中的化學成分Table 3 The chemical content of Actinidia arguta essential oil

續(xù)表3 軟棗獼猴桃揮發(fā)油中的化學成分Continue table 3 The chemical content of Actinidia arguta essential oil

2.2 不同處理軟棗獼猴桃揮發(fā)油成分中化合物類別差異

如表4所示，兩種不同處理的軟棗獼猴桃提取的揮發(fā)油鑒定出的化合物在不同類別中種數(shù)不盡相同：除酸類和胺類都為2種和1種外，酶處理鑒定出的烯烴類、酯類、醇類、烷烴類分別比對照多出3種、7種、2種、1種；酶處理鑒定出1種酮類，對照未鑒定出酮類；而酚類和醛類酶處理比對照少1種。

3 結論與討論

本實驗分別對兩種不同處理的軟棗獼猴桃進行揮發(fā)油的提取，含量最多的都是糠醛和棕櫚酸，但經過1%果膠酶處理的軟棗獼猴桃的揮發(fā)油化合物無論種類還是產率都多于對照處理，因為揮發(fā)油主要是次生代謝物質，存在軟棗獼猴桃果實細胞內，破壁的效果是增加提取率的重要原因，而果膠酶能分解細胞壁，有助于軟棗獼猴桃揮發(fā)油的提取，因而產率提高，揮發(fā)油的化學成分增多，但在破壁時是否引發(fā)復雜的化學反應而引產生新的揮發(fā)性成分有待進一步研究。

表4 兩種軟棗獼猴桃中化合物類別Table 4 The chemical compound category in two kinds of Actinidia arguta Sieb.et Zucc

A.J.Matich et al[12]從八個軟棗獼猴桃中采用頂空進樣和溶劑提取法萜烯、苯類、酯類、醛類、酮類、醇類、酸類、烷烴、硫化物、呋喃，與本文研究結果不完全一致。楊明非等[11]采用連續(xù)蒸餾法從軟棗獼猴桃揮發(fā)成分中共分離出13個組分，鑒定了12個組分，其主要成分是酯類、醇類物質。辛廣等[13]利用固相微萃取法研究東北野生軟棗獼猴桃果實的香氣，發(fā)現(xiàn)烯烴占揮發(fā)油比例很大，但酸類物質未被檢出，而本文檢出棕櫚酸相對含量較高，可能是由于二氯甲烷極性大，對極性大的成分（如酸）萃取相對多一些，同時蒸餾萃取法對高沸點成分的提取比較有利，而難提取β-月桂烯、D-檸檬烯等水不溶性的成分。可見，不同原材料包括品種不同、地域差異和不同成熟度，提取方法的不同都會對實驗結果起到一定的影響。

本文沒有對揮發(fā)油化學成分的絕對含量進行分析，也是本文的局限之處，因此，為了能夠更準確分析軟棗獼猴桃的揮發(fā)油成份及果膠酶對其作用，今后要對其揮發(fā)油進行絕對含量分析實驗，對軟棗獼猴桃進行更全面、系統(tǒng)的分析，以便更準確地提供軟棗獼猴桃揮發(fā)油相關的理論數(shù)據(jù)，更加合理地利用和開發(fā)軟棗獼猴桃資源。實驗中發(fā)現(xiàn)，經過酶前處理后提取軟棗獼猴桃揮發(fā)油的顏色比對照更淡，有待于今后的進一步研究。

本文研究主要結論：果膠酶前處理可以提高軟棗獼猴桃揮發(fā)油的產率，增加了鑒定出的揮發(fā)油化合物種數(shù)，進一步研究可應用到其精深加工中。

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