周慧敏，趙彤

（國家糧食監(jiān)督檢驗中心大連市產品質量監(jiān)督檢驗所，遼寧大連 116021）

甜蜜素又名環(huán)己基氨基磺酸鈉，是一種在我國廣泛使用的無營養(yǎng)、甜度高的食品甜味劑。但也有研究表明：人體過量攝入甜蜜素會產生致癌、致畸、損害腎功能等副作用[1-2]。到目前為止，已建立的測定甜蜜素的方法很多，主要有氣相色譜法、比色法、薄層層析法[3]、液相色譜-質譜法[4]。在國家抽查中，GB/T 5009.97—2003《食品中環(huán)己基氨基磺酸鈉的測定》中氣相色譜法是最常用的，即利用環(huán)己基氨基磺酸鈉在酸性條件下與亞硝酸鈉反應，以生成的環(huán)己醇亞硝酸酯定性和定量。但采用填充柱，峰形不夠尖銳，給積分定量造成一定誤差；沒有凈化步驟，樣品會污染設備；使用100 mL比色管過大，不適合批量檢驗；環(huán)己醇亞硝酸酯不穩(wěn)定易分解，影響定量。結合食品中甜蜜素測定方法的相關報道和實際工作經驗，采用OV-101毛細管色譜柱代替填充柱，使用正己烷凈化樣品，按比例減小取樣量和試劑使用量，以環(huán)己醇亞硝酸酯和環(huán)己醇峰面積加和定量，以避免以上問題。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器

6890N氣相色譜儀：安捷倫科技有限公司；OV-101毛細管柱（30 m×0.53 mm×0.5 μm）色譜柱：中國科學院大連化學物理研究所；TB—114電子天平：北京塞多利斯儀器系統(tǒng)有限公司；QN—999多功能食物攪拌機：韓國日進精工有限公司；QL-866渦旋混合器：海門市其林貝爾；CR21G離心機：日本日立公司。

1.1.2 試劑

甜蜜素標準品：上海泉島公司；甜蜜素標準溶液：2 mg/mL用蒸餾水配制；濃硫酸（優(yōu)級純）：100 g/L，用蒸餾水配制；亞硝酸鈉（分析純）：50 g/L，用蒸餾水配制；正己烷（色譜純）。

1.2 標準系列制備

分別取 2 mg/mL 甜蜜素標準溶液 2、20、50、100、200 μL于10 mL離心管中加蒸餾水至4 mL，加入50 g/L的亞硝酸鈉溶液1 mL、100 g/L的硫酸溶液1 mL，渦旋混合，冰浴中反應30 min后，加入2 mL正己烷提取，渦旋混合1 min，4 000 r/min離心2 min，取上清液供分析用。

1.3 方法

1.3.1 固體樣品

試樣用粉碎機粉碎。稱取已粉碎的樣品10 g置于50 mL具塞三角瓶中，加入50 mL蒸餾水，振蕩60 min，過濾，取濾液10 mL并加入5 mL正己烷，渦旋混合儀混合2 min，4 000 r/min離心5 min，棄去有機相后，移取4 mL水相，轉移到10 mL離心管。向離心管中先后加入50 g/L的亞硝酸鈉溶液1 mL、100 g/L的硫酸溶液1 mL，渦旋混合，冰浴中反應30 min后，加入2 mL正己烷提取，渦旋混合1 min，4 000 r/min離心2 min，取上清液供分析用。

1.3.2 液體樣品

稱取10 g樣品置于50 mL容量瓶中，加蒸餾水定容至刻度，搖勻，取10 mL并加入5 mL正己烷，渦旋混合儀混合2 min，4 000 r/min離心5 min，棄去有機相后，移取4 mL水相，轉移到10 mL離心管。向離心管中先后加入50 g/L的亞硝酸鈉溶液1 mL、100 g/L的硫酸溶液1 mL，渦旋混合，冰浴中反應30 min后，加入2 mL正己烷提取，渦旋混合1 min，4 000 r/min離心2 min，取上清液供分析用。

1.4 色譜條件

色譜柱OV-101毛細管柱（30m×0.53mm×0.5μm），進樣口溫度160℃，FID檢測器溫度180℃，柱箱溫度80℃保持6min。載氣高純氮氣4mL/min，進樣量1μL。

1.5 測定

甜蜜素標準溶液圖，見圖1。

經GC-MS驗證，如圖1所示峰1為甜蜜素衍生主產物環(huán)己醇亞硝酸酯，峰2為甜蜜素衍生副產物環(huán)己醇，環(huán)己醇亞硝酸酯不穩(wěn)定隨時間推移會分解成環(huán)己醇。為了減少環(huán)己醇亞硝酸酯分解給定量帶來的影響，本方法用環(huán)己醇亞硝酸酯和環(huán)己醇峰面積加和定量。

2 結果與討論

2.1 線性范圍和檢出限

按1.2的方法配制標準序列，以1.4的色譜條件進樣見圖 1。在 2 μg/mL～200 μg/mL 選定的質量濃度范圍內甜蜜素的含量與環(huán)己醇亞硝酸酯和環(huán)己醇峰面積之和的線性相關系數為0.999 6，見表1。

表1 甜蜜素的保留時間、線性范圍、相關系數Table 1 Retention time，Linear rang，correlative coefficients（r）of sodium cyclamate

在系列樣品中，將濃度為1.6 μg/mL的標液1 μL進樣后，所示得到的峰面積為12 PA*S，由此計算最低檢出濃度為4 mg/kg。

2.2 定量峰的選擇

國標方法以環(huán)己醇亞硝酸酯定量，但環(huán)己醇亞硝酸酯不穩(wěn)定會隨時間推移分解成環(huán)己醇，影響定量，而且衍生后的樣品放置時間過長無法使用。在20℃下，以200 μg/mL標準品為例，其衍生產物隨時間變化，見表2。

表2 甜蜜素產物隨時間變化Table 2 Derivative varition with tim

由表2知，在40 h內兩者峰面積之和是穩(wěn)定的。因此，本方法選擇環(huán)己醇亞硝酸酯和環(huán)己醇峰面積加和定量，以避免上述問題。

2.3 樣品的測定、回收率和精密度試驗

2.3.1 空白樣品

取一空白糕點樣品在0.1、0.5、1.0 g/kg三個水平，每個水平同時做6組平行樣，按1.3的方法前處理，進行回收率試驗?；厥章试?3%～104%之間，相對標準偏差（RSD）為2.6%～4.3%，結果見表3。

表3 糕點試樣加標回收率和精密度（n=6）Table 3 Recoveries and precision of cake samples（n=6）

2.3.2 陽性樣品

取一陽性糕點樣品在0.5水平，同時做6組平行樣，按1.3的方法前處理，進行回收率試驗?；厥章蕿?3.6%，相對標準偏差（RSD）為4.7%，結果見表4。

表4 糕點試樣加標回收率和精密度（n=6）Table 4 Recoveries and precision of cake samples（n=6）

3 結論

本次實驗主要是用氣相色譜法對實際樣品進行檢驗，結果表明，該方法可準確測定食品中的甜蜜素含量，且有很好的線性關系，相關系數大于0.999 5，最低檢出濃度為4 mg/kg，回收率為93%～104%，相對標準偏差（RSD）為2.6%～4.7%。從而確認本方法可準確測定食品中的甜蜜素。

:

[1]Jacks0n C D,Baetcke K P.Causative agents in the induction of bladder cancer[J].Ann Clin Lab Sci,1976,6(3):223-232

[2]Bopp B A,Senders R C,Kesterson J W.Toxicological aspects of cyclamate and cyclohexylamine[J].Crit Rev Toxicol,1986,16(3):213-306

[3]張暖民.GB/T 5007.97-2003《食品中環(huán)己基氨基磺酸鈉的測定》[S].北京:中國標準出版社:689-693

[4]王明泰.SN/T 1948-2007《進出口食品中環(huán)己基氨基磺酸鈉的檢測方法液相色譜-質譜質譜法》[S].北京:中國標準出版社