杜愛林,白瑞櫻,姜洪波,李東亮,張瑞嶺△
(1.新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院生理與神經(jīng)生物教研室;2.新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院,河南 新鄉(xiāng) 453003)
分離家兔緩沖神經(jīng)(以前稱為減壓神經(jīng)),刺激緩沖神經(jīng)的中樞端,觀察血壓的變化是生理學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)脈血壓的調(diào)節(jié)、機(jī)能學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)脈血壓的調(diào)節(jié)及急性失血性休克實(shí)驗(yàn)的一個(gè)重要內(nèi)容,目前國(guó)內(nèi)外尚未見刺激緩沖神經(jīng)的中樞端適宜的刺激參數(shù)的報(bào)道。在教學(xué)實(shí)踐中,教師由于不知道刺激參數(shù)的適宜范圍,調(diào)節(jié)刺激參數(shù)時(shí)間較長(zhǎng),有時(shí)因?yàn)闆]有調(diào)節(jié)到適宜的刺激強(qiáng)度和頻率,觀察不到血壓的變化,影響了教學(xué)效果。因此,適宜緩沖神經(jīng)適宜的刺激強(qiáng)度、頻率有助于提高實(shí)驗(yàn)效果并減少實(shí)驗(yàn)時(shí)間。在長(zhǎng)期教學(xué)實(shí)踐中,筆者總結(jié)了以往的經(jīng)驗(yàn),摸索到了較適宜的刺激強(qiáng)度和頻率,希望和大家共同探討,以期尋找更好的實(shí)驗(yàn)方法,提高教學(xué)效果。
1.1 動(dòng)物 健康家兔36只,體質(zhì)量2.4~2.8 kg,新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。分離緩沖神經(jīng),刺激緩沖神經(jīng)的中樞端,由小至大調(diào)節(jié)刺激強(qiáng)度和頻率,直至觀察到血壓變化。
1.2 器械和藥品 哺乳類實(shí)驗(yàn)器械,BL-420F生物信號(hào)采集處理系統(tǒng),電腦,動(dòng)脈夾,氣管插管,兔手術(shù)臺(tái),1~50 ml注射器,紗布,壓力換能器同,動(dòng)脈插管,刺激電極,棉線,小燒杯,三通;20%氨基甲酸乙酯,0.1%肝素,生理鹽水,0.01% 腎上腺素,0.01%去甲腎上腺素,0.01%異丙腎上腺素,2%654-2。
1.3 步驟和項(xiàng)目
1.3.1 抓取、稱重、麻醉、固定 抓取家兔,秤重后,用20%氨基甲酸乙酯按每公斤體重1 g的劑量從耳緣靜脈緩慢注入,動(dòng)物麻醉的標(biāo)志為夾后趾反射消失。麻醉后用繩子將動(dòng)物背位固定于手術(shù)臺(tái)上,以備手術(shù)。
1.3.2 頸部手術(shù) 用粗剪刀剪除手術(shù)野的兔毛,沿頸部正中線切開皮膚6~7 cm,用止血鉗沿正中線分離皮下組織及肌肉,暴露出氣管并游離氣管2~3 cm,在氣管下穿線備用。用兩把止血鉗分別夾住氣管兩側(cè)的皮膚和肌肉的邊緣,并將其拉向兩側(cè),即可見到氣管兩側(cè)與氣管平行的左、右頸總動(dòng)脈及與其相伴而行的一束神經(jīng),這束神經(jīng)中包括迷走神經(jīng)(三根神經(jīng)中最粗)、交感神經(jīng)和緩沖神經(jīng)(三根神經(jīng)中最細(xì),以前稱為減壓神經(jīng))。
①氣管插管 用組織剪在甲狀軟骨下3~4軟骨環(huán)之間做一橫切口,其大小為氣管周徑的1/2,再向頭端方向做一縱向切口,使總切口呈倒“T”型,把氣管插管斜面向下朝向肺臟方向插入,旋轉(zhuǎn)180°,用備用棉線結(jié)扎固定,并在氣管插管分叉處2次結(jié)扎固定。
②分離 左側(cè)緩沖神經(jīng)、交感神經(jīng)、迷走神經(jīng)、頸總動(dòng)脈、頸外靜脈,穿線備用,分離右側(cè)頸總動(dòng)脈備用,注意先分離神經(jīng)后分離血管,分離神經(jīng)先細(xì)后粗。
③全身肝素化 耳緣靜脈(右頸外靜脈)注射125 U/ml的肝素,首次劑量為1 mL/kg,此后每隔1 h注射1 mL維持抗凝狀態(tài)。
④右頸外靜脈插管 先用動(dòng)脈夾夾閉靜脈近心端,靜脈充盈后結(jié)扎遠(yuǎn)心端,用眼科剪朝向心臟方向與靜脈成30~45°角剪開靜脈,切口大小為靜脈周徑的1/2,靜脈插管和輸液線相連,斜面向下朝向心臟方向插入靜脈(2次結(jié)扎固定,以防插管滑脫),撤掉動(dòng)脈夾,調(diào)整輸液速度,以15~20滴/min為宜,常溫組(n=18),靜脈輸注液體溫度(20.83±2.55)℃;溫?zé)峤M(n=18),靜脈輸注液體溫度(40.89 ±1.18)℃。
⑤左頸總動(dòng)脈插管 先結(jié)扎動(dòng)脈遠(yuǎn)心端,動(dòng)脈充盈后用動(dòng)脈夾夾閉近心端,用眼科剪朝向心臟方向與動(dòng)脈成30~45°角剪開動(dòng)脈,切口大小為動(dòng)脈周徑的1/2,向心臟方向插入充滿125 U/mL肝素溶液,帶有三通接頭并與壓力換能器相連的動(dòng)脈插管,2次結(jié)扎固定,先松開動(dòng)脈夾,觀察沒有出血,再輕輕撤掉動(dòng)脈夾。
1.3.3 實(shí)驗(yàn)裝置的連接 把壓力換能器的輸入線插入BL-420F生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)上的信號(hào)輸入孔,刺激電極插入刺激輸出孔,打開電腦進(jìn)入BL-420F生物信號(hào)采集處理系統(tǒng),調(diào)整三通的位置,選擇相應(yīng)通道,開始實(shí)驗(yàn)觀察。
1.3.4 動(dòng)脈血壓的調(diào)節(jié) ①正常血壓出現(xiàn)三級(jí)波,一級(jí)波(心搏波):由于心室的收縮和舒張引起的血壓的波動(dòng),心室收縮時(shí),曲線上升,心室舒張時(shí),曲線下降。二級(jí)波(呼吸波):由于呼吸運(yùn)動(dòng)所引起的血壓的波動(dòng),吸氣時(shí),曲線下降,呼氣時(shí),曲線上升。三級(jí)波:不常出現(xiàn),可能是由于心血管運(yùn)動(dòng)中樞緊張性的周期性變化的結(jié)果[2]。②向心臟方向快速牽拉一側(cè)頸總動(dòng)脈插管,觀察血壓的變化。③向心臟方向持續(xù)牽拉一側(cè)頸總動(dòng)脈插管,觀察血壓的變化。④夾閉另一側(cè)頸總動(dòng)脈3~5 s,觀察血壓的變化。⑤將緩沖神經(jīng)雙重結(jié)扎并從中間剪斷,以刺激強(qiáng)度0.6 v、刺激頻率10 Hz開始,由小到大分別刺激中樞端和外周端觀察血壓的變化,以出現(xiàn)能觀察到血壓變化的最小刺激強(qiáng)度和最小頻率為家兔適宜的刺激強(qiáng)度、頻率。⑥記錄和整理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
1.3.5 處死動(dòng)物方法 空氣栓塞法。
向心臟方向快速牽拉一側(cè)頸總動(dòng)脈插管,表現(xiàn)為動(dòng)脈血壓下降。向心臟方向持續(xù)牽拉一側(cè)頸總動(dòng)脈插管,表現(xiàn)為動(dòng)脈血壓下降但沒有快速牽拉一側(cè)頸總動(dòng)脈插管幅度大。夾閉另一側(cè)頸總動(dòng)脈3~5 s,表現(xiàn)為動(dòng)脈血壓上升。將緩沖神經(jīng)雙重結(jié)扎并從中間剪斷,分別刺激中樞端和外周端。刺激緩沖神經(jīng)的外周端對(duì)血壓和心率沒有影響,適宜的刺激強(qiáng)度、頻率刺激緩沖神經(jīng)的中樞端會(huì)引起血壓降低(見表1)。
表1 家兔適宜的刺激強(qiáng)度、頻率(±s)
表1 家兔適宜的刺激強(qiáng)度、頻率(±s)
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 n 適宜的刺激強(qiáng)度(U/v)適宜的刺激頻率(f/Hz)
向心臟方向快速牽拉一側(cè)頸總動(dòng)脈插管,對(duì)頸動(dòng)脈竇壓力感受器刺激加強(qiáng),壓力感受器傳入沖動(dòng)增加,心迷走神經(jīng)緊張性增加,交感神經(jīng)緊張性降低,心率減慢,心輸出量減少,外周血管阻力降低,動(dòng)脈血壓下降。向心臟方向持續(xù)牽拉一側(cè)頸總動(dòng)脈插管,由于頸動(dòng)脈竇壓力感受器對(duì)刺激的快速變化敏感,持續(xù)牽拉沒有快速牽拉刺激的變化快,表現(xiàn)為動(dòng)脈血壓下降但沒有快速牽拉一側(cè)頸總動(dòng)脈插管幅度大。夾閉另一側(cè)頸總動(dòng)脈3~5 s,由于血流被阻斷,頸動(dòng)脈竇壓力感受器處的血壓下降,頸動(dòng)脈竇神經(jīng)傳入沖動(dòng)減少,使迷走神經(jīng)緊張性降低,交感緊張加強(qiáng),表現(xiàn)為外周阻力增加,心率加快,心輸出量增加,從而導(dǎo)致動(dòng)脈血壓上升。緩沖神經(jīng)為傳入神經(jīng),刺激緩沖神經(jīng)的外周端對(duì)血壓和心率沒有影響;適宜的刺激強(qiáng)度、頻率[(0.81 ±0.21)v,(25.39 ±6.81)Hz]刺激緩沖神經(jīng)的中樞端會(huì)引起血壓降低。刺激強(qiáng)度、頻率太小不會(huì)引起血壓降低,刺激強(qiáng)度、頻率太大能引起血壓降低,但會(huì)導(dǎo)致神經(jīng)損傷。緩沖神經(jīng)較細(xì),分離時(shí)要快速輕柔,全程用生理鹽水潤(rùn)濕緩沖神經(jīng),才能保證實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行。
[1]常全忠.機(jī)能實(shí)驗(yàn)學(xué)[M].第1版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2007:126-131.
[2]李東亮,王合軒.生理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法[M].第2版.北京:北京軍事誼文出版社,1999:73-76.
[3]王建榮,張黎明,劉玉春,等.溶液溫度對(duì)失血性休克兔循環(huán)功能的影響[J].中華護(hù)理雜志,2004,39(12):896-898.