暴希照，宋愛新

(1.湯陰縣人民醫(yī)院，河南 湯陰456150;2.安陽市第三人民醫(yī)院，河南 安陽455000)

CyclinD1 蛋白是細(xì)胞分裂周期中非常重要的負(fù)性調(diào)節(jié)劑，是CDK4/6 活化因子，參與并調(diào)控細(xì)胞從G1 期到S 期的分裂，與其結(jié)合后共同促進(jìn)細(xì)胞周期。研究表明cyclinD1 蛋白過度表達(dá)可以加速G1/S 期轉(zhuǎn)化，使損傷的DNA 得不到修復(fù)而導(dǎo)致細(xì)胞異常增殖。然而，關(guān)于cyclinD1 在腎癌中的表達(dá)及其相互關(guān)系目前尚不明確。本文旨在研究cyclinD1 蛋白在腎癌中的表達(dá)及其與腫瘤生物學(xué)行為的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 選用該院2006 ～2009年泌尿外科腎癌切除術(shù)后經(jīng)病理證實的標(biāo)本63 例，年齡在23 ～67 歲，平均46 歲;男性35 例，女性28 例;按Fuhrman 分級標(biāo)準(zhǔn):G1 期28 例，G2 期20 例，G3 期15例;臨床分期按UICC 標(biāo)準(zhǔn):T1 期22 例;T2 期18例;T3 期15 例;T4 期8 例。另取10 例正常腎組織作為對照組，標(biāo)本均來自腎外傷腎切除手術(shù)患者。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集 全部標(biāo)本均經(jīng)10%福爾馬林液固定，常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)切片，厚約4 μm，蘇木精-伊紅染色。

1.2.2 試劑與方法 鼠抗人cyclinD1 多克隆抗體、DAB 試劑盒、SP-9003 免疫組化試劑盒均購自北京中山生物公司。操作過程嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。

1.3 結(jié)果判斷 cyclinD1 陽性染色定位于細(xì)胞核。隨機(jī)選取10 個高倍視野，計數(shù)1 000 個腫瘤細(xì)胞，計算陽性細(xì)胞百分率。陽性細(xì)胞百分率低于10%為陰性“-”，10% ～50% 為弱陽性“+ ”，高于50% 為陽性“++”，弱陽性和陽性例數(shù)之和作為陽性總數(shù)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS 10.0 統(tǒng)計軟件包分析，2 組均數(shù)間比較用t 檢驗，計數(shù)資料組間比較采用卡方檢驗和Pearson 相關(guān)分析，以P ＜0.05 為有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 cyclinD1 在腎組織中的表達(dá) cyclinD1 主要在細(xì)胞核中表達(dá)，在細(xì)胞核中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性表達(dá)。在正常腎組織中，cyclinD1 蛋白的陽性表達(dá)率為24.3%，腎癌組織中的陽性表達(dá)率為60.8%，明顯高于正常腎組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P ＜0.05)。

2.2 cyclinD1 表達(dá)與腎癌生物學(xué)行為的關(guān)系 cyclinD1 陽性表達(dá)率在腎癌中隨著臨床腫瘤分級級別的增高逐漸減低，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P ＞0.05);cyclinD1 陽性表達(dá)率在腎癌中隨著腫瘤組織學(xué)分級級別的增高也逐漸減低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P ＜0.05)。cyclinD1 在腎癌中的陽性表達(dá)與年齡、性別無關(guān)，見表1。

表1 cyclinD1 在腎癌中的表達(dá)及與臨床各參數(shù)的關(guān)系

3 討論

細(xì)胞周期調(diào)控失調(diào)是腫瘤發(fā)生、發(fā)展的重要環(huán)節(jié)，細(xì)胞周期紊亂是基因組不穩(wěn)定的中心環(huán)節(jié)，可使不穩(wěn)定細(xì)胞發(fā)生癌變的幾率明顯提高，從而參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展［1］。

cyclinD1 基因定位于染色體l1q13，編碼由295個氨基酸組成的蛋白產(chǎn)物。研究認(rèn)為cyclinD1 的作用與視網(wǎng)膜神經(jīng)膠原瘤蛋白(Rb 蛋白)有關(guān)，當(dāng)Rb失活或功能減低或cyclinD1 過度表達(dá)時，都有可能影響到正常的細(xì)胞周期調(diào)控，使細(xì)胞周期越過G1/S限制點，導(dǎo)致各種原因受損傷的DNA 修復(fù)障礙及細(xì)胞增殖周期加快，最終使細(xì)胞惡變或惡性增殖［2］。Umekita 等報道在乳腺癌患者中，低級別的較高級者更易表達(dá)cyclinD1［3］。Lee 等在乳腺癌患者中發(fā)現(xiàn)，CyclinD1 陽性表達(dá)率高于正常乳腺組織，但隨腫瘤分級增高，陽性率逐漸下降，CyclinD1 的表達(dá)與乳腺癌病理分級呈負(fù)相關(guān)［4］。該實驗研究發(fā)現(xiàn):在正常腎組織中，cyclinD1 蛋白的陽性表達(dá)率為24.3%，腎癌組織中的陽性表達(dá)率為60.8%，明顯高于正常腎組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。cyclinD1 在腎癌中隨著臨床腫瘤分級級別的增高其陽性表達(dá)率逐漸減低，差異無統(tǒng)計學(xué)意義，而隨著腫瘤組織學(xué)分級級別的增高其陽性表達(dá)率也逐漸減低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，cyclinD1 在腎癌中的陽性表達(dá)與年齡、性別無關(guān)，與Lee 等的研究結(jié)果基本一致。在腎癌早期cyclinD1 高表達(dá)，隨著腫瘤的進(jìn)展，腫瘤細(xì)胞的生長轉(zhuǎn)化為其他癌因子調(diào)控，不需要cyclinD1 的調(diào)控，從而引起cyclinD1 的低表達(dá)，這也就可以解釋在組織學(xué)分級低的腎癌標(biāo)本中，cyclinD1 高表達(dá)，而在惡性程度較高、組織學(xué)分級較高的腎癌標(biāo)本中低表達(dá)這一現(xiàn)象。

綜上所述，cyclinD1 在腎癌的發(fā)病機(jī)制中起著重要作用，有望成為判斷腎癌惡性程度分級的標(biāo)志物，但這一點還有待于對腎癌患者術(shù)后的隨訪調(diào)查而進(jìn)一步完善。

［1］Hoeijmakers JH.Genome maintenance mechanisms for preventing cancer［J］.Nature，2001，411(6 835):366 -374.

［2］Diehl JA.Cycling to cancer with CyclinD1［J］.Cancer Biol Ther，2002，1(3):226 -231.

［3］Umekitay，Oh IY，Sagaray，et al.Over expression of cyclinD1 predicts for poor prognosis in estrogen receptor-negative breast cancer patients［J］.Int J Cancer，2002，98(3):415 -418.

［4］Lee CC，Yamatnoto S，Morirnura K，et al.Significance of cyclinD1 over expression in transitional cell carcinoma of the urinary bladderand Its correlation with histopathologic features［J］.Cancer，1997，79 (4):780 -789.