吳娟1，胡昌東2

（1.海南省人民醫(yī)院洋浦分院檢驗科，海南?？?78101；2.儋州市中醫(yī)醫(yī)院檢驗科，海南儋州571700）

黏液型銅綠假單胞菌耐藥性分析

吳娟1，胡昌東2

（1.海南省人民醫(yī)院洋浦分院檢驗科，海南?？?78101；2.儋州市中醫(yī)醫(yī)院檢驗科，海南儋州571700）

目的探討?zhàn)ひ盒豌~綠假單胞菌的耐藥性，為臨床治療提供參考。方法對分離出的22株黏液型銅綠假單胞菌用K-B法進行體外藥敏檢測，并進行統(tǒng)計分析。結(jié)果黏液型銅綠假單胞菌對美洛培南、亞胺培南、派拉西林/他唑巴坦、敏感率較高（均為100%），頭孢吡肟為95.45%、慶大霉素、左旋氧氟沙星為90.91%、阿米卡星為86.36%、環(huán)丙沙星為77.27%、頭孢他啶為68.18%、派拉西林為59.09%、頭孢派酮為54.54%。結(jié)論黏液型銅綠假單胞菌體外耐藥性較弱，但因其存在生物膜，體內(nèi)用藥時耐藥率較高，因此臨床培養(yǎng)鑒定出銅綠假單胞菌時，應(yīng)注意是否為黏液型，以便臨床醫(yī)生選擇合適的藥物進行治療。

黏液型銅綠假單胞菌；抗生素；耐藥性；生物被膜

銅綠假單胞菌是慢性呼吸道感染的重要致病菌，根據(jù)其菌落形態(tài)和是否產(chǎn)生藻酸鹽可分為黏液型和非黏液型兩種類型。黏液型銅綠假單胞菌由于大量產(chǎn)生藻酸鹽而更易形成生物被膜，使其逃逸機體免疫清除和增強對抗菌藥物的耐藥性，給臨床治療帶來極大困難。一旦檢出黏液型銅綠假單胞菌立即向臨床報告，以便及時選擇聯(lián)合療法治療。

1 材料與方法

1.1 菌株來源來自2010年1月至2011年6月住院患者送檢的4 000例痰標(biāo)本。白細(xì)胞(WBC)≥25個低倍鏡視野，上皮細(xì)胞(EP)≤10個低倍鏡視野，符合條件者可分離培養(yǎng)。

1.2 藥敏紙片均為英國Oxoid公司產(chǎn)品。

1.3 菌株分離與鑒定標(biāo)本培養(yǎng)、分離嚴(yán)格按照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》第三版進行。35℃培養(yǎng)18～24 h，在血平板上生長為無色、小露滴樣、邊緣不規(guī)則、不溶血小菌落，48 h長大而融合、粘稠、膠凍樣菌落，溶血不典型，可有可無。用接種環(huán)不易挑起無金屬光澤、無特殊氣味的菌落，分純后經(jīng)過法國生物梅里埃VITEK32和API20NE鑒定，結(jié)果均為銅綠假單胞菌，判定為黏液型銅綠假單胞菌。

1.4 藥敏試驗采用K-B紙片擴散法進行藥敏試驗。結(jié)果判定按2009年版CLSI標(biāo)準(zhǔn)。質(zhì)控菌株為大腸埃希菌ATCC25922，銅綠假單胞菌ATCC 27853。

2 結(jié)果

22株黏液型銅綠假單胞菌對11種抗生素藥敏結(jié)果見表1，黏液型銅綠假單胞菌對美洛培南、亞胺培南、派拉西林/他唑巴坦、敏感率較高（均為100%），頭孢吡肟為95.45%、慶大霉素、左旋氧氟沙星為90.9%、阿米卡星為86.36%、環(huán)丙沙星為77.27%、頭孢他啶為68.18%、派拉西林為59.09%、頭孢派酮為54.54%。

表1 22株黏液型銅綠假單胞菌對11種抗生素的耐藥率

3 討論

銅綠假單胞菌廣泛分布于自然界中，可通過環(huán)境污染、交叉感染、內(nèi)源性感染、醫(yī)源性感染等途徑，在免疫力降低時導(dǎo)致呼吸道感染。本文分離出黏液型銅綠假單胞菌的痰標(biāo)本一般屬于長期呼吸道感染患者，且多為老年患者，這可能與呼吸道感染患者免疫力低下、病情嚴(yán)重和大量使用抗生素有關(guān)。隨著抗菌藥物的廣泛使用，細(xì)菌經(jīng)常迅速出現(xiàn)耐藥性而導(dǎo)致治療失敗。黏液型銅綠假單胞菌的分離率有逐年上升的趨勢，且耐藥率也逐年增高[1]。本文主要分析了黏液型銅綠假單胞菌對11種抗生素的耐藥性，但是我們在體外對其進行的藥敏試驗只是測試其浮游細(xì)菌對抗生素的敏感性，而并不能反映其生物膜對抗生素的耐藥性，表1顯示黏液型銅綠假單胞菌的體外敏感抗生素較多，耐藥性較弱，美洛培南、亞胺培南、派拉西林/他唑巴坦、頭孢吡肟對黏液型銅綠假單胞菌的敏感性較高，它們可作為經(jīng)驗治療首選藥物。但用于治療黏液型銅綠假單胞菌引起感染時，還必須考慮其存在生物被膜耐藥的因素。黏液型銅綠假單胞菌的耐藥機制極為復(fù)雜，其他分泌的類似莢膜樣物質(zhì)，借聚糖分解與鄰近細(xì)菌、血小板、纖維蛋白等聚集形成細(xì)菌生物膜。細(xì)菌生物被膜可導(dǎo)致細(xì)菌不易與抗菌藥直接接觸，而對抗菌藥產(chǎn)生耐藥，被膜也阻礙了機體免疫細(xì)胞或抗體與細(xì)菌的接觸，導(dǎo)致細(xì)菌不易被清除，藻酸鹽是黏液型銅綠假單胞菌形成生物被膜的主要成分[2]。體外研究發(fā)現(xiàn)藻酸鹽對黏液型銅綠假單胞菌生物被膜的形成及耐藥性起著重要作用，所以除去生物被膜必須設(shè)法減少藻酸鹽的合成。

近年來，黏液型銅綠假單胞菌的感染患者不斷增多，各種治療方案也越來越多，常用抗生素療法對黏液型銅綠假單胞菌引起的感染療效欠佳，大環(huán)內(nèi)酯類藥物與敏感抗生素聯(lián)合用藥均能有效控制黏液型銅綠假單胞菌所致的感染。有研究表明，大環(huán)內(nèi)酯類抗生素能有效抵抗生物膜的作用，其主要通過以下方式產(chǎn)生作用[3]：(1)使生物膜的表面形成孔穴，從而使生物膜內(nèi)部細(xì)菌得以暴露，有利于敏感藥物進入生物膜內(nèi)部殺滅細(xì)菌。(2)使體內(nèi)藻酸鹽免疫復(fù)合物逐漸下降，有效地抑制由藻酸鹽介導(dǎo)的抗原抗體反應(yīng)。(3)通過免疫調(diào)節(jié)作用，有效地增強中性粒細(xì)胞對銅綠假單胞菌生物膜的吞噬作用。另外，氨溴素可以作用于銅綠假單胞菌的生物膜，并能降低其藻酸鹽的生物合成[4]。所以，臨床醫(yī)生在治療黏液型銅綠假單胞菌引起的感染時應(yīng)考慮其生物膜的影響因素，合理選擇聯(lián)合用藥。

大環(huán)內(nèi)酯類抗原通過抑制生物膜的形成，使抗菌藥物容易通過細(xì)菌生物膜，并增強氧氟喹諾酮類抗菌藥物環(huán)丙沙星對細(xì)菌生物膜的滲透作用，增強殺菌效果[5]?？肆置顾啬苁桂ひ盒豌~綠假單胞菌生物被膜的藻酸鹽多糖減少，使左氧氟沙星容易通過生物被膜，從而增強殺菌效果[6]。據(jù)文獻報道[7]，抗藻酸鹽血清與加替沙星對黏液型銅綠假單胞菌生物被膜形態(tài)構(gòu)建存在協(xié)同作用，抗藻酸鹽血清與加替沙星聯(lián)合應(yīng)用可以增強殺菌作用。因此臨床細(xì)菌學(xué)實驗室發(fā)現(xiàn)黏液型銅綠假單胞菌時應(yīng)盡早報告，以便及時選擇聯(lián)合療法治療。

[1]李玉棟,王海軍,趙建平.銅綠假單胞菌5種菌落形態(tài)與耐藥性監(jiān)測[J].內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)雜志,2006,38（1）：69-70.

[2]柴棟,王睿.藻酸鹽裂解酶對黏液型銅綠假單胞菌生物被膜的影響[J].國外醫(yī)藥抗生素分冊,2001,22(4)：172-175.

[3]范春,牛其昌,王穎.銅綠假單胞菌生物膜耐藥性機制及防治[J].國外醫(yī)藥抗生素分冊,2004,25(5)：230-232.

[4]Li F,Yu J,Yang H.Effects of ambroxol on alginate of mature Pseudomonas aeruginosa biofilms[J].Curr Microbiol,2008,57(1)：1-7.

[5]張文元,楊亞冬,唐靚.十四元環(huán)大環(huán)內(nèi)酯類對細(xì)菌生物被膜形成的影響及對環(huán)丙沙星的增效作用[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,2005, 15（11）：1288-1289.

[6]李鴻雁,夏前明,李福祥,等.克林霉素對黏稠液型銅綠假單胞菌生物被膜的影響[J].解放軍醫(yī)學(xué)雜志,2004,29（10）：875-878.

[7]王睿,裴斐,柴棟,等.抗藻酸鹽血清與加替沙星聯(lián)合對銅綠假單胞菌生物被膜形態(tài)的影響[J].中華醫(yī)學(xué)雜志,2002，82（18）：1276-1278.

Drug resistance analysis of Pseudomonas aexuginosa.

WU Juan1,HU Chang-dong2.Department of Clinical Laboratory,Yangpu Branch of Hainan Provincial People's Hospital.Haikou 578101,Hainan,CHINA;2.Department of Clinical Laboratory,TCM Hospital of Danzhou City,Danzhou 571700,Hainan,CHINA

ObjectiveTo investigate the drug resistance of Pseudomonas aexuginosa and provide guidance for clinical treatment.MethodsTwenty-two strains of Pseudomonas aexuginosa were tested their drug resistance by K-B method and analyzed by statistical method.ResultsPseudomonas aexuginosa was 100%sensitive to Meropenem,Imipenem,Piperacillin/Tazobactam,95.45%sensitive to Cefepime,90.9%sensitive to Gentamycin and Levofloxacin,86.36%sensitive to Amikacin,77.27%sensitive to Ciprofloxacin,68.18%sensitive to Ceftazidime,59.09%sensitive to Piperacillin,and 54.54%sensitive to Cefoperazone.ConclusionDrug resistance of Pseudomonas aexuginosa is low in vitro but high in vivo because of its biological membane.It is important to identify Pseudomonas aexuginosa in order to guide physicians to choose the appropriate drugs.

Pseudomonas aexuginosa;Antibiotic;Drug resistance;Biological membrane

R373.1

A

1003—6350（2012）04—093—02

10.3969/j.issn.1003-6350.2012.04.042

2011-08-29）

吳娟（1979—），女，海南省定安縣人，初級檢驗師。