覃勇榮,馮濟(jì)梅,梁文忠,李秋明,劉旭輝
(河池學(xué)院化學(xué)與生命科學(xué)系,廣西宜州546300)
鎘脅迫下的桑樹(shù)幼苗葉片丙二醛含量動(dòng)態(tài)分析
覃勇榮,馮濟(jì)梅,梁文忠,李秋明,劉旭輝
(河池學(xué)院化學(xué)與生命科學(xué)系,廣西宜州546300)
采用水培試驗(yàn)方法,分別研究了不同濃度重金屬鎘脅迫背景下,添加或不添加EDTA處理的桑苗葉片丙二醛含量45 d的動(dòng)態(tài)變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:(1)桑苗葉片的丙二醛含量與鎘濃度有關(guān),在21 d~27 d內(nèi),丙二醛含量呈波動(dòng)上升趨勢(shì),之后呈波動(dòng)下降趨勢(shì);(2)與不添加EDTA的對(duì)照組比較,加入EDTA處理的桑苗葉片丙二醛含量波動(dòng)比較平緩,隨鎘脅迫時(shí)間的增加,其葉片中的丙二醛含量緩慢增加;(3)低濃度的鎘離子對(duì)桑苗生長(zhǎng)有一定的促進(jìn)作用,但濃度較高時(shí)會(huì)對(duì)其造成一定的傷害,使其生長(zhǎng)受到抑制,葉片變黃,萎蔫,甚至死亡;(4) EDTA能適當(dāng)緩解鎘離子對(duì)桑苗的傷害。
桑樹(shù)幼苗;重金屬;鎘脅迫;丙二醛含量
廣西礦產(chǎn)資源豐富,享有“有色金屬之鄉(xiāng)”的美譽(yù)。過(guò)去,由于資金缺乏或者技術(shù)落后,礦業(yè)開(kāi)發(fā)不可避免地對(duì)周邊環(huán)境造成一定的影響。近年來(lái),隨著東桑西移及農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)的調(diào)整,廣西已成為我國(guó)重要的桑蠶種養(yǎng)基地。但是,礦區(qū)及其周邊環(huán)境重金屬污染的風(fēng)險(xiǎn)依然存在。殘留于土壤中的重金屬元素可參與到水體—土壤—生物的系統(tǒng)循環(huán),也可以通過(guò)植物的吸收或動(dòng)物的取食進(jìn)入食物鏈,從而影響農(nóng)業(yè)生產(chǎn)和生態(tài)系統(tǒng)的安全[1-3]。所以,篩選抗性強(qiáng)、適應(yīng)性廣的高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)桑樹(shù)品種,對(duì)廣西桑蠶產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展具有重要意義[4]。
鎘是一種有毒的重金屬,也是自然界的一種主要污染源,鎘脅迫嚴(yán)重影響植物的生長(zhǎng)發(fā)育,降低作物的產(chǎn)量和質(zhì)量[5]。研究表明,高濃度的鎘能誘導(dǎo)過(guò)量活性氧的產(chǎn)生,破壞細(xì)胞的氧化還原狀態(tài)和細(xì)胞膜的穩(wěn)定性,干擾細(xì)胞的正常代謝[6],鎘在土壤中的高毒性更令人擔(dān)憂[7]。
螯合劑對(duì)金屬離子有很強(qiáng)的螯合能力,能增大土壤中重金屬的溶解度,促進(jìn)重金屬在植物地上部的積累。近年來(lái),利用螯合劑輔助植物提取的技術(shù)(Chelate-assistedphyto-extraction)備受青睞。陳亞華等人研究發(fā)現(xiàn),游離態(tài)的Pb或EDTA對(duì)幼苗具有毒害作用,而螯合態(tài)的Pb-EDTA基本不具有生物毒性[8,9]??梢?jiàn),在適當(dāng)濃度的EDTA作用下,重金屬對(duì)植物的生理脅迫可能會(huì)有一定程度的緩解。因?yàn)橹参飳?duì)重金屬脅迫有一定的耐性,同時(shí)也會(huì)產(chǎn)生一定的抗逆性。所以,了解植物對(duì)重金屬脅迫的抗逆機(jī)理、耐受重金屬的濃度范圍及產(chǎn)生適應(yīng)性所需時(shí)間,可以在重金屬污染的土壤篩選合適的修復(fù)植物,或者種植耐性較強(qiáng)、經(jīng)濟(jì)價(jià)值較高的作物,充分利用有限的土地資源,發(fā)揮最大的生態(tài)經(jīng)濟(jì)效益。
關(guān)于重金屬污染對(duì)植物影響的相關(guān)研究,大多集中在探討植物對(duì)重金屬的吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)、累積,以及重金屬對(duì)植物光合作用和呼吸作用的影響等方面。關(guān)于鎘對(duì)小麥、玉米等作物生長(zhǎng)發(fā)育及其生理生化影響的研究相對(duì)較多[10-12],而關(guān)于重金屬對(duì)桑蠶的生長(zhǎng)、產(chǎn)量及毒性機(jī)理等方面的研究報(bào)道甚少,關(guān)于鎘等重金屬對(duì)廣西桑蠶產(chǎn)業(yè)影響的研究亦鮮有報(bào)道[13]。以桑樹(shù)幼苗為實(shí)驗(yàn)材料,采用水培方法,模擬不同濃度的重金屬鎘脅迫,采取添加或者不添加螯合劑EDTA兩種不同的處理方式,分析不同濃度重金屬鎘脅迫背景下,桑樹(shù)幼苗葉片MDA含量隨時(shí)間動(dòng)態(tài)變化的特征,可以了解桑樹(shù)幼苗的受害過(guò)程及機(jī)理,為減輕鎘等重金屬對(duì)桑樹(shù)的危害,提高桑蠶及相關(guān)產(chǎn)業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益提供理論依據(jù)。
本研究的實(shí)驗(yàn)材料——桑樹(shù)幼苗品種為特優(yōu)二號(hào),苗齡45d,由廣西宜州市城南廣場(chǎng)桑苗批發(fā)部提供,均未受到有害物質(zhì)的污染。
實(shí)驗(yàn)儀器:AL204型電子分析天平(梅特勒—托科多儀器上海有限公司);80-2型臺(tái)式電動(dòng)離心機(jī)(常州國(guó)華電器有限公司);CFA-160型微電腦光波電熱爐(茂名市恒聲電器有限公司);722N型可見(jiàn)分光光度計(jì)(上海精密科學(xué)儀器有限公司);101-2-BS型臺(tái)式恒溫干燥箱(上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠);UV-1800型紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)(上海:島津國(guó)際貿(mào)易有限公司);艾柯DZG-303A型純水儀(臺(tái)灣艾柯成都康寧試驗(yàn)專用純水設(shè)備廠);華燁HYP-1040型四十孔消化爐﹙上海纖檢儀器有限公司﹚;pHS-3C型pH計(jì)(上海精密科學(xué)儀器有限公司);FZ-102型微型植物樣品粉碎機(jī)(天津市泰斯特儀器有限公司)。
主要試劑:Cd(NO3)2、EDTA、Ca(NO3)2、ZnSO4、KNO3、(NH4)3PO4、MgSO4、Fe3+、微量元素。鎘標(biāo)準(zhǔn)液、二甲酚橙、六亞甲基四胺、無(wú)水乙醇、乳化劑OP、磷酸二氫鈉、硼砂、三氯乙酸(trichloroacetic acid,TCA)、2-硫代巴比妥酸(2-thiobarbituric acid,TBA)。
以上試劑除2-硫代巴比妥酸(C4H4N2O2S)為生化試劑(BR)外,均為分析純(AR),實(shí)驗(yàn)用水為去離子水。
1.3.1 材料處理
選擇外觀大小、規(guī)格基本一致的健壯桑苗,先用清水把根部的泥沙洗滌干凈,然后用KMnO4溶液浸泡10min,再用去離子水清洗干凈,備用。
1.3.2 水培試驗(yàn)
用盆栽模擬法[14],以4L/盆Hoagland營(yíng)養(yǎng)液作為培養(yǎng)液,設(shè)不同Cd2+濃度處理,以不添加EDTA的桑樹(shù)幼苗水培試驗(yàn)作對(duì)照。因?yàn)楦邼舛鹊闹亟饘匐x子脅迫很快會(huì)使桑苗死亡,所以,根據(jù)筆者前期進(jìn)行的預(yù)備實(shí)驗(yàn)結(jié)果并參考有關(guān)文獻(xiàn),水培液中的Cd2+濃度分別設(shè)為0、2.5、5.0、10.0、25.0、50.0、100.0、150.0、200.0、250.0mg/L,EDTA的濃度均為0.55mmol/L。重金屬Cd2+用Cd(NO3)2配制,Cd2+濃度以純金屬離子計(jì)算[15,16]。加入重金屬Cd2+后,以3d為一個(gè)時(shí)間間隔,分別取樣測(cè)定桑樹(shù)幼苗基部葉片的丙二醛含量。培養(yǎng)幼苗時(shí),每種不同的實(shí)驗(yàn)處理均設(shè)三個(gè)重復(fù),以保證樣品測(cè)試時(shí)材料的供應(yīng)和數(shù)據(jù)的可靠性。
1.3.3 丙二醛及鎘含量的測(cè)定
(1)丙二醛含量的測(cè)定用硫代巴比妥酸法[17]。
(2)鎘含量的測(cè)定用HNO4-HClO4消化,二甲酚橙分光光度法[18],實(shí)驗(yàn)材料為培養(yǎng)45d的桑樹(shù)幼苗。
1.3.4 數(shù)據(jù)處理
數(shù)據(jù)處理用Microsoft Excel 2003和SPSS18.0軟件進(jìn)行,每個(gè)樣品均做三個(gè)平行測(cè)定,結(jié)果取平均值。利用單因子方差分析(one-way ANOVA)和最小顯著差數(shù)法(LSD),對(duì)不同樣品的測(cè)定數(shù)據(jù)進(jìn)行比較和差異顯著性檢驗(yàn)。
圖1為水培液中不添加EDTA時(shí),桑樹(shù)幼苗在各種不同濃度Cd2+脅迫的情況下,其葉片丙二醛含量的測(cè)定結(jié)果。由圖1可看出,隨著Cd2+濃度的升高,丙二醛含量呈上升趨勢(shì)。加重金屬鎘6d后,丙二醛含量明顯低于3d后的含量,可能是桑樹(shù)幼苗對(duì)重金屬鎘脅迫產(chǎn)生生理抗逆性的結(jié)果。在加入Cd2+后的21~27d時(shí)間內(nèi),大部分桑樹(shù)幼苗葉片的丙二醛含量呈逐漸上升趨勢(shì),之后變化較平緩,說(shuō)明桑苗在經(jīng)歷重金屬鎘脅迫一段時(shí)間后,有了一定的有適應(yīng)性。加入Cd2+濃度為250、200、150、100、50mg/L脅迫處理的桑苗,分別在第12d、30d、30d、30d、36d摘不到葉子,說(shuō)明隨著重金屬離子濃度的增高,鎘對(duì)桑樹(shù)幼苗的生長(zhǎng)產(chǎn)生了明顯的抑制作用。通過(guò)每天的觀察記錄得知:隨著Cd2+濃度提高和時(shí)間的推移,桑樹(shù)幼苗葉片褪綠、變黃、枯槁及萎蔫的現(xiàn)象越明顯,因此也越難長(zhǎng)成葉子,甚至一些幼苗逐漸出現(xiàn)死亡癥狀。從桑樹(shù)幼苗丙二醛含量的分析結(jié)果來(lái)推斷,低濃度的Cd2+可能對(duì)桑樹(shù)幼苗的生長(zhǎng)有一定的促進(jìn)作用,但高濃度的Cd2+對(duì)桑樹(shù)幼苗生長(zhǎng)卻能產(chǎn)生明顯的毒害作用。
圖1 不同濃度的Cd2+對(duì)桑樹(shù)幼苗葉片丙二醛含量的影響
圖2為水培液中添加EDTA時(shí),桑樹(shù)幼苗在各種不同濃度Cd2+脅迫下,其葉片丙二醛含量的測(cè)定結(jié)果。由圖2可看出,加入EDTA的桑樹(shù)幼苗在重金屬Cd2+的脅迫下,隨著時(shí)間的推移,其葉片中的丙二醛含量稍有上升。通過(guò)對(duì)圖1和圖2的比較可知,前者丙二醛含量大多為0.015μmol/g左右,而后者的丙二醛含量則大多在0.015μmol/g之下??瞻讓?duì)照組與單獨(dú)加EDTA的實(shí)驗(yàn)處理組相比,加EDTA處理組的丙二醛含量明顯高于空白對(duì)照組。
圖2 EDTA對(duì)鎘脅迫下的桑樹(shù)幼苗葉片丙二醛含量的影響
圖3為不添加EDTA水培45d,桑苗葉片丙二醛含量與桑苗中鎘含量的比較??梢?jiàn),桑樹(shù)幼苗的鎘含量隨著培養(yǎng)液中的Cd2+濃度增大而逐漸升高,丙二醛含量與桑樹(shù)幼苗吸收的鎘成正相關(guān)(r=0.83,p<0.01)。當(dāng)培養(yǎng)液中Cd2+為250mg/L時(shí),隨著桑樹(shù)幼苗對(duì)鎘離子吸收的增加,MDA含量卻明顯下降,其原因有待研究。
圖3 桑苗葉片丙二醛含量與桑苗吸收Cd2+的情況比較
圖4為添加EDTA水培45d,桑苗葉片丙二醛含量與桑樹(shù)幼苗中鎘含量的比較。值得注意的是,在培養(yǎng)液中的Cd2+濃度為200mg/L時(shí),桑苗對(duì)鎘離子吸收量最大(此時(shí)其桑苗葉片中的丙二醛的含量也達(dá)到一個(gè)峰值),說(shuō)明桑樹(shù)幼苗對(duì)重金屬鎘的吸收是一個(gè)十分復(fù)雜的過(guò)程,許多問(wèn)題尚有待進(jìn)一步研究。
圖4 添加EDTA處理對(duì)桑苗葉片丙二醛含量及其體內(nèi)吸收Cd2+的影響
植物生理生化研究結(jié)果表明,植物細(xì)胞損傷過(guò)程中,生物膜的破壞是由細(xì)胞產(chǎn)生的超氧自由基誘導(dǎo)脂質(zhì)中的不飽和脂肪酸發(fā)生過(guò)氧化作用造成的[19]。丙二醛的積累來(lái)自不飽和脂肪酸的降解,它的生成是植物體內(nèi)自由基引發(fā)而產(chǎn)生的,丙二醛的積累能夠反映植物體內(nèi)自由基的活動(dòng)狀態(tài)[20]。因此,在植物逆境生理研究中,丙二醛被普遍地作為一種表示傷害的指標(biāo)。在本試驗(yàn)中,在重金屬鎘脅迫下,隨著水培液中的Cd2+濃度升高,桑樹(shù)幼苗葉片細(xì)胞損傷程度增加,丙二醛含量增多。高濃度的Cd2+脅迫,桑苗受害嚴(yán)重,甚至死亡。本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果與鄭世英、鄭愛(ài)珍等相關(guān)研究的結(jié)果相一致[21,22]。由本試驗(yàn)結(jié)果可知,單獨(dú)加EDTA對(duì)植物細(xì)胞也有一定損害。在重金屬離子存在的情況下,加入EDTA能促進(jìn)了桑苗對(duì)鎘的吸收,鎘與EDTA螯合,可降低其對(duì)桑樹(shù)幼苗的毒害作用,這與陳亞華等對(duì)螯合態(tài)的Pb-EDTA作用于油菜幼苗的結(jié)果相似[8,24]。一般情況下,植物吸收的重金屬主要積累在根部,然而這種現(xiàn)狀也會(huì)受到重金屬濃度的限制,隨著重金屬處理濃度的升高,重金屬離子在其體內(nèi)積累量逐漸增加,從而對(duì)植物的毒害作用加劇,重金屬脅迫使植物細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生活性氧自由基超過(guò)保護(hù)酶系統(tǒng)的清除能力時(shí),就會(huì)導(dǎo)致自由基在葉細(xì)胞內(nèi)的大量積累,從而誘導(dǎo)對(duì)植物細(xì)胞的過(guò)氧化傷害[23]。這也表明重金屬脅迫條件下,植物體內(nèi)活性氧清除系統(tǒng)對(duì)植物細(xì)胞的保護(hù)作用是有限度的。本研究發(fā)現(xiàn),桑樹(shù)幼苗對(duì)重金屬Cd2+具有一定的耐性,在桑苗培養(yǎng)的過(guò)程中,在一定的濃度范圍內(nèi),桑樹(shù)幼苗能夠耐受脅迫,生長(zhǎng)良好,很少死苗現(xiàn)象。至于桑樹(shù)幼苗對(duì)其他重金屬離子脅迫的抗逆機(jī)理,以及EDTA對(duì)其他重金屬毒害是否也有降解作用,目前還不甚明了,有待進(jìn)一步研究。
根據(jù)實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果及以上分析討論,可以初步得到以下結(jié)論:
(1)桑樹(shù)幼苗對(duì)重金屬鎘具有一定的耐性。但是,在Cd2+的脅迫下,桑樹(shù)幼苗細(xì)胞膜受損,丙二醛含量升高。(2)低濃度的Cd2+對(duì)桑樹(shù)幼苗生長(zhǎng)有一定的促進(jìn)作用,但Cd2+濃度大于50mg/L時(shí),對(duì)桑苗生長(zhǎng)有毒害作用。(3)桑樹(shù)幼苗對(duì)Cd2+的吸收是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程,其葉片中的丙二醛含量及體內(nèi)的Cd含量并非與水培液中的Cd2+濃度成正相關(guān),但是,其葉片中的丙二醛含量與莖葉中的鎘含量成正相關(guān)。(4)EDTA促進(jìn)了桑苗對(duì)Cd2+的吸收,對(duì)緩解重金屬鎘的毒害具有一定的作用。
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[責(zé)任編輯劉景平]
Dynam ic Analysis of Malondialdehyde Content inMorus AlbaSeed ling Leaves Under Cd2+Stress
QIN Yong-rong,F(xiàn)ENG Ji-mei,LIANG W en-zhong,LIQiu-m ing,LIU Xu-h(huán)ui
(Department of Chem istry and Life Science,Hechi University,Yizhou,Guangxi546300,China)
By water-implantation experiment,different concentrations of Cd2+are added to the nutrient solution respectively.In each solution of one group,treatmentwith 0.55 mmol/L EDTA is compared to the other groups untreated with EDTA.The dynamic changes ofmalondialdehyde(MDA)content in theMorusalbaleaves for 45 days are investigated.The results show that:(1)there are some relationship between MDA contents inMorusalbaleaves and Cd2+concentration in the solution.During the period of21 to 27days,MDA contentof the leaves has a rising trend of fluctuation at first,and then declines in a fluctuating state;(2)Compared with the groups untreated with EDTA,MDA content in the leaves not only remains at a relative stable level,but also increases gradually with time prolonging;(3)When Cd2+concentration is ata lower level,itwill promote the growth ofMorus albaseedling,butwhen Cd2+concentration is at a higher level,such poisonous effects will happen,that is,the growth of the seeding will be inhibited,and the leaves of seedingswill turn yellow or wither;(4)EDTA can alleviate Cd2+poisonous effects onMorusalbaseedlings.
Morusalbaseedling;heavymetal;Cd2+stress;malondialdehyde content
book=0,ebook=51
X53
A
1672-9021(2012)02-0017-06
覃勇榮(1963-),男,廣西平南人,河池學(xué)院化學(xué)與生命科學(xué)系教授,主要研究方向:高校生物學(xué)教學(xué),巖溶地區(qū)生態(tài)修復(fù)。
廣西高校重點(diǎn)建設(shè)學(xué)科基金資助項(xiàng)目(桂教科研〔2007〕20號(hào));廣西高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室基金資助項(xiàng)目(桂教科研〔2010〕6號(hào));廣西高等學(xué)校特色課程及專業(yè)一體化建設(shè)基金資助項(xiàng)目(桂教高教〔2011〕102號(hào))。
2012-03-11