滿永宏 包東武

復(fù)方中藥CRFC-2對(duì)小鼠食物過(guò)敏模型拮抗作用的實(shí)驗(yàn)研究

滿永宏 包東武

目的研究復(fù)方中藥CRFC-2在小鼠食物過(guò)敏動(dòng)物模型中拮抗花生變態(tài)反應(yīng)的效果及機(jī)制。方法以花生粗提物和金黃色葡萄球菌腸毒素B誘導(dǎo)花生過(guò)敏小鼠動(dòng)物模型，分別經(jīng)CRFC-2處理和胃腸道激發(fā)后，檢測(cè)過(guò)敏癥狀、直腸體溫、血管滲出、組胺水平、血清特異性抗體水平。結(jié)果CRFC實(shí)驗(yàn)組小鼠未出現(xiàn)明顯的過(guò)敏癥狀。結(jié)論復(fù)方中藥CRFC-2在小鼠動(dòng)物模型中能夠拮抗花生誘導(dǎo)的食物變態(tài)反應(yīng)。

食物過(guò)敏;CRFC;復(fù)方中藥

多數(shù)花生過(guò)敏是由IgE抗體介導(dǎo)的I型超敏反應(yīng)，可以引起血壓降低、面部和喉嚨腫脹等癥狀阻礙呼吸，從而導(dǎo)致休克。同時(shí)，花生過(guò)敏也是食物過(guò)敏中導(dǎo)致死亡人數(shù)最高的一種，90%因食物過(guò)敏引發(fā)的死亡都是由花生導(dǎo)致的，而西醫(yī)對(duì)花生過(guò)敏尚缺乏有效的預(yù)防手段［1］。先前的研究中，我們已經(jīng)證實(shí)復(fù)方中藥CRFC-1可以在食物過(guò)敏小鼠動(dòng)物模型中阻斷變態(tài)反應(yīng)，本實(shí)驗(yàn)去掉了艾葉、黃苓兩味中藥，研究其是否具有相同的功能。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 清潔級(jí)Balb/c小鼠50只，鼠齡6～8周，雄性，體重18～20g，購(gòu)自鄭州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

1.2 復(fù)方中藥CRFC-2由當(dāng)歸、黃芪、香附、荊芥、麻黃、陳皮、黨參、黃連、靈芝組成。原材料購(gòu)自南陽(yáng)市乾景中藥村有限責(zé)任公司，產(chǎn)地明確，并經(jīng)南陽(yáng)醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校中醫(yī)系教研室鑒定并煎制，含原藥材0.16g/ml，置于4℃冰箱備用。

1.3 試劑 山羊抗小鼠IgE抗體為Serotec公司產(chǎn)品;組胺檢測(cè)試劑盒為eBioscience公司產(chǎn)品;小鼠組胺ELISA試劑盒為The Binding Site，Inc公司產(chǎn)品;Evan’s藍(lán)染料為上海如吉生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品;金黃色葡萄球菌腸毒素B(SEB)購(gòu)自中國(guó)軍事醫(yī)學(xué)研究院;花生粗取物(WPE)按文獻(xiàn)方法制備［2］。

1.4 給藥及分組 50只實(shí)驗(yàn)小鼠隨機(jī)分為CRFC-2組(n=25)和對(duì)照組共兩組(n=25)。2mg WPE與10μg SEB混合，共溶于400μl 0.2M重碳酸鹽中，灌胃喂服小鼠每周2次，連續(xù)3周。從第3周開始，CRFC-2組按10ml/kg體質(zhì)量取復(fù)方中藥CRFC-2灌胃，對(duì)照組給予等體積蒸餾水，2次/d，連續(xù)7周(3～9周)。在第5周和第7周，分別給予2mg WPE與10μg SEB混合物灌胃以維持致敏狀態(tài)。在第10周，兩組均以100mg WPE灌胃進(jìn)行胃腸道激發(fā)。

1.5 過(guò)敏癥狀檢查 WPE灌胃5～10min之后，小鼠開始出現(xiàn)癥狀，30～50min達(dá)到高峰，評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)如下:0-無(wú)癥狀發(fā)生;1-搔撓鼻子及頭部;2-呼吸部位毛豎起、眼周和唇部水腫增加或腹瀉;3-口周及尾巴紫紺、呼吸困難或震顫及痙攣;5-死亡。

1.6 血管性滲出檢查 WPE灌胃激發(fā)前，從小鼠尾靜脈注入 Evan’s藍(lán)染料100μl(0.5%)，胃腸道激發(fā)后30～40min之后，檢查小鼠四肢變藍(lán)程度確定血管滲出性。

1.7 直腸溫度檢查 胃腸道激發(fā)后25min，以體溫計(jì)測(cè)量小鼠直腸溫度。

1.8 血漿組胺水平檢測(cè) 胃腸道激發(fā)后30min取血約0.8ml，室溫放置2～3h，離心取上層血清檢測(cè)組胺水平。

1.9 血清特異性IgE檢測(cè) CRFC組和對(duì)照組于第3、5、9周于尾靜脈取血，分別貯存于-20℃，最后同時(shí)檢測(cè)血清特異性IgE水平。

2 結(jié)果

2.1 過(guò)敏癥狀 CRFC組和對(duì)照組激發(fā)后的體征結(jié)果如表1所示。

表1 胃腸道激發(fā)后小鼠的變態(tài)反應(yīng)體征

2.2 血管性滲出檢查 對(duì)照組存在明顯的血管滲出性改變(藍(lán)色)，而CRFC-2組未見此特征。

2.3直腸溫度檢測(cè) CRFC-2組直腸平均溫度為37.4℃，而對(duì)照組為34.4℃，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

2.4 血漿組胺水平檢測(cè) CRFC-2組組胺水平為(51±25)nmol/L，對(duì)照組為(5421±2836)nmol/L，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05)。

2.5 小鼠血清特異性IgE CRFC-2組和對(duì)照組在第3周和第5周，血清特異性卵清蛋白IgE水平無(wú)明顯差異，第9周兩組血清特異性卵清蛋白IgE的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表2。

表2 CRFC-2組及對(duì)照組血清特異性卵清蛋白IgE水平(nmol/L)

3 討論

花生過(guò)敏是具有較高致死率的變態(tài)反應(yīng)，至今尚無(wú)有效的治療手段。雖然部分新型免疫療法可以在一定程度上預(yù)防其發(fā)生，但還沒(méi)有能完全降低或阻斷其嚴(yán)重癥狀的方法。

多數(shù)花生過(guò)敏為I型速發(fā)型超敏反應(yīng)，其發(fā)病機(jī)制中，IgE抗體的產(chǎn)生是重要的中心環(huán)節(jié)?；ㄉ械腁rah1和Arash2蛋白誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生食物特異性IgE抗體，IgE和過(guò)敏原通過(guò)高親和力的IgE受體(FceRI)，激活已致敏的肥大細(xì)胞及嗜堿性粒細(xì)胞脫顆粒，釋放組胺等生物活性介質(zhì)，引起毛細(xì)血管擴(kuò)張、通透性增加、平滑肌收縮、腺體分泌增加，產(chǎn)生一系列局部或全身性臨床癥狀［3］。

本研究以花生粗提物(WPE)和金黃色葡萄球菌腸毒素B(SEB)混合物致敏小鼠，誘導(dǎo)建立花生過(guò)敏動(dòng)物模型。對(duì)照組小鼠出現(xiàn)呼吸困難、眼周和唇部水腫等癥狀，血清中特異性IgE水平上升，這與Kirthana的研究結(jié)果一致［4］。

研究結(jié)果顯示，CRFC-2復(fù)方中藥在小鼠模型中可以完全預(yù)防花生過(guò)敏。在所有監(jiān)測(cè)指標(biāo)中，對(duì)照組表現(xiàn)出花生過(guò)敏癥狀，包括明顯的過(guò)敏體癥;血清特異性IgE、組胺水平顯著升高;直腸溫度下降，血管滲出性改變，而CRFC-2組則未出現(xiàn)明顯的過(guò)敏癥狀及上述生理指標(biāo)的改變。

因此，復(fù)方中藥CRFC-2可以在小鼠花生過(guò)敏動(dòng)物模型中阻斷花生過(guò)敏原誘發(fā)的食物變態(tài)反應(yīng)，該方的毒理作用及對(duì)人類花生過(guò)敏的治療效果有待進(jìn)一步研究。

［1］劉文忠，韓躍華.食物超敏反應(yīng).國(guó)外醫(yī)學(xué).消化系疾病分冊(cè)，2003，23(1):3.

［2］Bock SA，Munoz-Furlong A，Sampson HA.Fatalities due to anaphylactic reactions to foods.J Allergy Clin Immunol，2001，107:191-193.

［3］Norman PS.Immunotherapy:1999-2004.J Allergy Clin Immunol，2004，113:1013-1023.

［4］Ricki M，Helm，Richard W.Nonmurine animal models of food allergy.Environ Health Perspect，2003，111(2):239-244.

Herbal formula crfc-2blocks peanut-induced anaphylaxis in food allergy model

MAN Yong-hong，BAO Dong-wu.Microbiology Laboratory of Nanyang Medical College，Nanyang 473061，China

ObjectiveThe purpose of this study was to investigate the effects and mechanism of a herbal formula，CRFC-2on anaphylactic reactions induced by peanut in a mouse model.MethodsAfter CRFC treatment for 7weeks，the mice were challenged with peanut and the anaphylactic scores rectal temperature，vascular leakage，plasma histamine levels，serum IgE were measured.ResultsAfter challenges，CRFC treated mice showed no sign of anaphylactic reactions.ConclusionCRFC-2treatment completely eliminated anaphylaxis in peanut-sensitized mice.

Food allergy; CRFC;Herbal formula

473061南陽(yáng)醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)?；A(chǔ)醫(yī)學(xué)部病免教研室