周燕雙 黃惠蓮

跌打傷科酒收載于衛(wèi)生部《藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第十九冊(cè)，是由徐長(zhǎng)卿、澤蘭、兩面針、九節(jié)茶等組成的酒劑，具有活血散瘀，消腫止痛作用。主要用于跌打損傷，積瘀腫痛，筋骨扭傷[1]。原標(biāo)準(zhǔn)中只有九節(jié)茶的薄層色譜鑒別，根據(jù)國家藥典委員會(huì)關(guān)于提高國家藥品行動(dòng)計(jì)劃的要求，對(duì)原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行提高，分析與研究，本實(shí)驗(yàn)按此要求作了一些探索，采用薄層色譜法和高效液相色譜法對(duì)跌打傷科酒進(jìn)行更好的質(zhì)量監(jiān)控。

1 儀器與藥品

高效液相色譜儀:Agilent1100，DAD檢測(cè)器;色譜柱:Diamonsil(鉆石)C18(250 mm×4.6 mm×5 m);電子天秤:Sartorius-CPA225D型號(hào);超聲波清洗器:KQ-500DE型;成像系統(tǒng):CMAG REPROSTARⅡ型號(hào);硅膠G板(青島海洋化工研究所);甲醇:色譜純，Merck KGaA;水為超純水;其余試劑均為分析純;兩面針對(duì)照藥材(中國藥品生物制品檢定所，批號(hào):121014-201003)、熊果酸對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所，批號(hào):110742-200518)、丹皮酚對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所，批號(hào):110708-200505)。跌打傷科酒及陰性對(duì)照(廣州王老吉藥業(yè)股份有限公司提供)。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 澤蘭、兩面針薄層色譜鑒別

2.1.1 陰性對(duì)照溶液的制備 按跌打傷科酒處方配制分別缺澤蘭、兩面針?biāo)幉牡臉悠?，按供試品溶液的制備方法，取同樣比例的量，制備各自的陰性?duì)照溶液。

2.1.2 澤蘭的薄層色譜鑒別 取供試品及陰性對(duì)照樣品各25 ml，加乙酸乙酯提取2次，10 ml/次，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)右掖? ml使溶解，分別作為供試品溶液及陰性對(duì)照品溶液。再取熊果酸對(duì)照品，加乙醇制成每毫升含0.1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI B)試驗(yàn)[2]，吸取上述溶液各6 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯－冰醋酸(12∶4∶0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性對(duì)照品在相應(yīng)位置上無斑點(diǎn)。結(jié)果見圖1。

圖1 澤蘭薄層色譜圖

2.1.3 兩面針的薄層鑒別 取供試品及陰性對(duì)照樣品各10 ml，濃縮至1 ml，再加水10 ml稀釋，用氨水調(diào) pH 值至9，用二氯甲烷提取二次，10 ml/次，合并提取液，蒸干，殘?jiān)右掖? ml，使溶解，分別作為供試品溶液及陰性對(duì)照溶液。取對(duì)照藥材粉末0.5 g，加乙醇30 ml，超聲提取40 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右掖? ml使溶液，作為對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述溶液各6 μl，分別用條狀點(diǎn)樣于同一硅膠G薄層板上，以甲苯－乙酸乙酯－甲醇(18∶2∶0.4)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。陰性對(duì)照液在相應(yīng)位置上無熒光斑點(diǎn)。見圖2。

圖2 兩面針薄層色譜圖

2.2 徐長(zhǎng)卿含量測(cè)定

2.2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)選擇 采用Agilent1100高效液相色譜儀，DAD檢測(cè)器，配制丹皮酚對(duì)照品溶液及跌打傷科酒(缺徐長(zhǎng)卿)陰性對(duì)照溶液，在200～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行光譜掃描。掃描結(jié)果丹皮酚對(duì)照品溶液在274 nm處有最大吸收波長(zhǎng)，跌打傷科酒(缺徐長(zhǎng)卿)陰性對(duì)照溶液，在274 nm處無吸收波長(zhǎng)。選定274 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，結(jié)果見圖3～4。

圖3 丹皮酚光譜圖圖4 跌打傷科酒(缺徐長(zhǎng)卿)陰性光譜圖

2.2.2 色譜條件 色譜柱:Diamonsil(鉆石)C18(250 mm×4.6 mm ×5 μm);流動(dòng)相:甲醇-水(43 ∶57);檢測(cè)波長(zhǎng);274 nm;進(jìn)樣量:10 μl;柱溫:35℃。理論板數(shù)按丹皮酚峰計(jì)算應(yīng)不低于 3000[3]。

2.2.3 溶液制備

2.2.3.1 對(duì)照品溶液的制備 取丹皮酚對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 ml含15 μg的溶液，即得。

2.2.3.2 供試品溶液的制備 精密量取跌打傷科酒25 ml，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⒍ㄈ葜? ml，搖勻，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，即得。

2.2.3.3 陰性對(duì)照品溶液的制備 按跌打傷科酒處方配制缺徐長(zhǎng)卿藥材的樣品，按供試品溶液的制備方法，取同樣比例的量，制備徐長(zhǎng)卿的陰性對(duì)照溶液。

2.2.4 專屬性考察 按制定的色譜條件，將丹皮酚對(duì)照品溶液、供試品溶液、缺徐長(zhǎng)卿的陰性對(duì)照溶液，進(jìn)行液相色譜分析，結(jié)果陰性對(duì)照無干擾。結(jié)果見圖5。圖5:從上至下①丹皮酚對(duì)照品;②供試品溶液;③徐長(zhǎng)卿陰性對(duì)照溶液

圖6

2.2.5 線性關(guān)系考察 精密稱取丹皮酚對(duì)照品適量，加甲醇配制成每 1 ml含丹皮酚 1.9266、3.8530、7.7063、15.4125、30.8250、61.6500、123.3000 g 的溶液。分別吸取 10 μl，進(jìn)行液相色譜分析，計(jì)算回歸方程為:Y=50.837X-2.9426，R=0.9996。說明丹皮酚在1.93～123.30 g之間呈良好的線性關(guān)系。

2.2.6 精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液10 μl，連續(xù)進(jìn)樣5次，進(jìn)行色譜分析，測(cè)定丹皮酚峰面積，并計(jì)算峰面積的RSD=0.54%。說明所建立方法的精密度良好。

2.2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液，精密吸取10 μl，進(jìn)行色譜分析，分別在 0、2、4、8、12、24 小時(shí)測(cè)定，并計(jì)算含量，得相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，RSD=2.65%。說明制備的供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)的樣品6份，按供試品制備方法制備供試品溶液，按制定色譜條件依法測(cè)定，并計(jì)算含量。RSD=1.45%，說明該方法重復(fù)性良好。

2.2.9 加樣回收率試驗(yàn) 精密量取已知含量的跌打傷科酒6份，精密加入一定量的丹皮酚對(duì)照品溶液，按制定的方法進(jìn)行操作與分析，測(cè)定丹皮酚的含量，計(jì)算加樣回收率，回收率為98.44%，RSD=1.22%，該方法準(zhǔn)確度較高，結(jié)果見表1。

表1 跌打傷科酒加樣回收率試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果

2.2.10 樣品測(cè)定 根據(jù)所制定的供試品提取方法及色譜條件對(duì)跌打傷科酒三批進(jìn)行分析與計(jì)算，結(jié)果見表2。

表2 樣品測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1 丹皮酚是該制劑中藥材徐長(zhǎng)卿主要成分之一。鑒于丹皮酚在中藥材及其制劑中含量均不高，加之中藥成分的復(fù)雜性，故取樣量較大，但含量穩(wěn)定性好，高效液相色譜法應(yīng)是中藥材及其制劑中丹皮酚首選的分離分析方法。

3.2 增加澤蘭和兩面針的薄層色譜的定型鑒別，徐長(zhǎng)卿的高效液相定量含量測(cè)定，更好更全面的控制跌打傷科酒的質(zhì)量。

[1]中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)－中藥成方制劑(第19冊(cè))，1998:226.

[2]國家藥典委員會(huì).中國藥典(2005年版).一部.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:233，附錄Ⅵ B，Ⅵ D.

[3]郭漢文，侯峰，任傳波.HPLC法測(cè)定定坤寧丸中丹皮酚的含量，中國藥事，2007，21(9):736.