馬明明 王雪晶 方燕南 李瑋 張杰文

腦卒中是臨床上常見的急性腦血管病，具有高度的致殘率和致死率，如何有效地促進腦梗死后神經(jīng)元及突觸的可塑性，是目前亟待解決的關(guān)鍵問題。我們既往的研究發(fā)現(xiàn)證明了電刺激可通過增強星形膠質(zhì)細胞活性而促進癱瘓肢體功能恢復(fù)［1-3］，但對肢體和梗死灶周圍頭皮電針的刺激沒有作對照，因此對肢體電刺激和梗死灶周圍頭皮的電刺激對腦梗死后的神經(jīng)干細胞的梗死后的修復(fù)情況有待于進一步研究。本課題根據(jù)以上研究成果，結(jié)合臨床上電刺激治療缺血性卒中的不同方法，本課題擬解決梗死灶周圍頭皮電針刺激和肢體電針刺激對大腦缺血性卒中的恢復(fù)程度有無影響和二者之間的差異。

1 資料與方法

1.1 動物模型與分組 本課題選用2～3月齡，體重80～120 g雄性SD大鼠95只。85只大鼠建立雙腎雙夾法的方法復(fù)制RHRSP模型［4］。術(shù)前1 d測1次基礎(chǔ)血壓，RHRSP后1周開始，每周測定1次，待血壓升高并趨于穩(wěn)定后，每2周測1次。RHRSP后12周選擇血壓＞24 kPa且無腦卒中癥狀，體重450～500 g 的 RHRSP 75 只，采用 Wahl等［5，6］的方法加以改良制作MCAO模型。

分組如下:①梗死灶周圍電刺激組(A組):進行MCAO模型制作24 h后選擇梗死灶周圍頭皮進行電刺激治療，1次/d。分別在1 d、2 d及1周、2周、3周、4周每個療程結(jié)束后次日處死。每個時間點3只，共18只。②肢體電刺激組(B組):進行MCAO模型制作24 h后選穴病灶對側(cè)相當于人的“曲池”、“外關(guān)”、“太沖”及“足三里”，進行上述同樣強度和時間的電刺激干預(yù)治療。1 d、2 d、1周、2周、3周、4周每個時間點3只，共18只。③對照組(C組):進行MCAO模型制作，但不進行電刺激治療。1 d、2 d、1周、2周、3周、4周每個時間點3只，共18只。④假手術(shù)組(D組):手術(shù)過程同上，但不凝閉大腦中動脈。

1.2 電刺激治療和神經(jīng)功能評分 ①A組:選擇梗死灶周圍頭皮進行電刺激治療，1次/d。頻率75次/min，電流1～2 mA，20 min/次。1 d實驗組大鼠治療24 h后，于次日處死待查。1周實驗組治療6次后，于次日處死待查。2周、3周、4周實驗組大鼠6 d治療1個療程，停1 d進行下個療程治療，每個療程結(jié)束后次日處死。②B組:選穴為病灶對側(cè)相當于人的“曲池”、“外關(guān)”、“太沖”及“足三里”，上述同樣強度和時間的電刺激干預(yù)治療。③C組和D組:不進行電刺激治療。

各組均于梗死第2天開始神經(jīng)功能評分(BWT，beamwalking test)［7］，第一周 1 次/d，以后每周兩次。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用 SPSS 12.0統(tǒng)計軟件。正態(tài)分布計量資料用均數(shù)±標準差表示，偏態(tài)分布資料用中位數(shù)表示。3組或以上的方差齊性計量資料用單因素方差分析(ANOVA)，兩組獨立樣本用t檢驗統(tǒng)計方法。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 RHRSP(腎血管性高血壓大鼠)血壓改變 85只SD大鼠用于復(fù)制RHR，RHRSP術(shù)后12周內(nèi)死亡3只，血壓未達到180 mm Hg以上兩只，有卒中癥狀及體征5只。另10只大鼠作假手術(shù)組，僅打開腹腔，但不進行雙側(cè)腎動脈夾閉術(shù)。術(shù)后隨機抽取10只大鼠與假手術(shù)組組進行統(tǒng)計學(xué)分析。

應(yīng)用SDP-1型大鼠心率血壓計測量的尾動脈血壓為大鼠的收縮壓。RHRSP術(shù)前血壓為(115.21±12.03)mm Hg，MCAO 后2、4、8、12周血壓明顯高于術(shù)前(P ＜0.05)，RHRSP后各時間點的血壓明顯高于假手術(shù)組(P＜0.05)。假手術(shù)組大鼠術(shù)前血壓為(117.45±10.78)mm Hg，RHRSP后血壓波動，無明顯規(guī)律性(P＞0.05)。

2.2 電刺激對神經(jīng)功能評分的影響 按照Feeney運動功能評分方法［8］。假手術(shù)組無運動功能缺損，評分均為7分(正常)。電刺激前A組、B組及C組3組間評分沒有顯著性差異(P＞0.05)。電刺激后第1周，A組分別與B組、C組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，而B組與C組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。電刺激治療后第2周，A組與B組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，其兩者分別與C組相比差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，此時3組評分較刺激前差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。刺激后第3周到第4周A組與B組評分差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，其二者與C組(對照組)相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。組內(nèi)比較，刺激后第1周開始，A組、B組、C組和刺激前相比均有顯著性差異(P＜0.05)，此種現(xiàn)象一直持續(xù)至第4周。

3 討論

本實驗按照雙腎雙夾方法復(fù)制腎血管性高血壓模型，血壓在腎動脈狹窄RHRSP后1～2周開始上升，10周后血壓基本穩(wěn)定，與既往研究結(jié)果一致。說明該模型的方法穩(wěn)定可靠，能夠模擬人類高血壓的發(fā)展過程，以此作為腦梗死的研究模型更接近臨床，具有更大的指導(dǎo)意義。在RHRSP基礎(chǔ)上制作大腦中動脈皮層支永久性閉塞模型(MCAO)［4，6］，產(chǎn)生恒定的梗死灶，不同個體間的一致性好，更好顯示電刺激對神經(jīng)功能恢復(fù)的影響，RHRSP制備的各種腦缺血-梗死模型，可廣泛用于模擬人類高血壓動脈硬化性腦卒中的發(fā)病機制、發(fā)病后病理生理改變、預(yù)防和治療效果驗證等多方面研究。

本課題為了觀察電刺激對腦缺血后神經(jīng)干細胞的影響，在MCAO模型制作成功24 h后給予電刺激干預(yù)治療。在不同的時間段內(nèi)進行神經(jīng)功能評分，并比較電針刺激肢體與梗死灶周圍頭皮對神經(jīng)功能評分的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn):第1周開始A組恢復(fù)程度比其他兩組都好，但B組并不比C組好，與刺激前比較僅A組有進步;第2周A組仍比B組好，但B組較刺激前開始有進步，而C組較刺激前進步仍無意義;第3周到第4周3組均較刺激前均有進步，且A組及B組較C組恢復(fù)好，二者間比較，A組和B組之間沒有顯著性差異(P＞0.05);C組雖然較刺激前有改善，但較A組、B組仍差。

刺激前三者均為MCAO成功大鼠，彼此之間沒有顯著性差異;隨著電刺激的進行，三者之間出現(xiàn)差距，從上可以看出電刺激治療的效果較快，在電刺激后1周A組的神經(jīng)功能均較C組有了明顯改善，在電刺激第2周兩個電刺激組均較C組有了明顯改善。這也說明電刺激可以改善神經(jīng)功能評分，但梗死灶周圍頭皮電刺激比肢體電刺激對神經(jīng)功能的改善要早而且快。提示我們在臨床上可以采取肢體電刺激和梗死灶周圍頭皮電刺激結(jié)合的方法對腦卒中進行康復(fù)。從上述結(jié)果對電刺激刺激對神經(jīng)功能的改善不同時段的觀察可以看出，三個實驗組有一個共同的現(xiàn)象就是從MCAO后的第2周開始神經(jīng)功能有了明顯改善，這種改善持續(xù)到第四周。這說明，腦缺血運動功能康復(fù)的關(guān)鍵時期是兩周之內(nèi)，在梗死后7 d之內(nèi)梗死灶周圍頭皮電刺激已開始促進神經(jīng)功能的恢復(fù)，而且較肢體電刺激早而明顯。提示我們，腦梗死后盡早干預(yù)治療的重要性。

考慮電刺激治療促進急性腦梗死后運動功能康復(fù)的可能機制為:反復(fù)的電刺激可能通過機械刺激，通過感覺傳導(dǎo)通路或非特異性感覺傳導(dǎo)通路或網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，到達對側(cè)半球的腦梗死邊緣區(qū)功能尚存的星形細胞或神經(jīng)元，激發(fā)他們的活性，重建與周圍神經(jīng)元的信息聯(lián)絡(luò)網(wǎng)，使腦內(nèi)側(cè)支循環(huán)開放、腦組織細胞供血、供氧能力增強，雖不能使壞死的神經(jīng)元“死而復(fù)生”，但卻可以消除梗死邊緣區(qū)的水腫，挽救瀕臨失去功能的神經(jīng)元，促使星形膠質(zhì)細胞增殖，加強修復(fù)功能;另一方面使癱瘓肢體功能重建［1-3，9-11］。這提示電刺激可能通過該“重建的通路”以促進星形膠質(zhì)細胞的缺血性水腫的消退，從而更好地發(fā)揮其功能，促進神經(jīng)元信息聯(lián)絡(luò)網(wǎng)的重建，進行功能代償。這可能與星形細胞能引起腦微血管舒張的假說有關(guān)［12，13］。但這種微血管的擴張究竟是否與星形細胞有關(guān)，有待今后進一步提出更多的實驗證據(jù)來證實。

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