李丹，鄒偉，王瓏，孫曉偉，滕偉

(1.北京中醫(yī)藥大學(xué)第三附屬醫(yī)院，北京 100029;2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150040)

腦出血是常見病、多發(fā)病，是嚴(yán)重威脅著人類的生活質(zhì)量和健康的一類疾病。本實驗的研究從針刺調(diào)控內(nèi)源性神經(jīng)營養(yǎng)因子表達(dá)，探討針刺促進神經(jīng)修復(fù)的腦保護作用機制。本研究探討針刺對腦出血大鼠腦內(nèi)bFGF蛋白表達(dá)的影響，將結(jié)果報告如下。

1 材料與方法

1.1 實驗試劑

bFGF兔抗大鼠多克隆抗體(美國Santa Cruz公司);BCA蛋白定量試劑盒(碧云天);茴拉西坦(憶立福，山西亞寶藥業(yè)集團有限公司，50mg/片)。

1.2 實驗方法 實驗動物設(shè)備及方法參考本課題組前期研究成果［1］。

2 結(jié)果

由表1可見，各組大鼠腦內(nèi)bFGF蛋白表達(dá)的Western印跡結(jié)果:空白組有少量表達(dá)。模型組在腦出血后6h表達(dá)量開始明顯增加，蛋白陽性信號持續(xù)增強，于3天達(dá)高峰，7天時仍有表達(dá)，與空白組比較，P＜0.01;針刺組各個時相點與模型組比較，具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);針刺組與西藥組比較，各個時相點具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。

表1 各組大鼠不同時相點血腫周圍腦組織bFGF蛋白表達(dá)相對含量比較(s)

表1 各組大鼠不同時相點血腫周圍腦組織bFGF蛋白表達(dá)相對含量比較(s)

注:針刺組與模型組比較，▲P＜0.01;針刺組與西藥組比較，●P＜0.05;西藥組與模型組比較，#P＜0.05;模型組與空白組比較，★P＜0.01。

組別 n 6h 1天 2天 3天 7天空白組 6 0.21 ±0.02 0.21 ±0.02 0.21 ±0.02 0.21 ±0.02 0.21 ±0.02模型組 30 0.27 ±0.02★ 0.31 ±0.02★ 0.38 ±0.02★ 0.48 ±0.02★ 0.33 ±0.02★西藥組 30 0.29 ±0.02 0.32 ±0.02 0.39 ±0.01 0.49 ±0.03 0.36 ±0.02#針刺組 30 0.31±0.02▲● 0.35 ±0.02▲● 0.46±0.04▲● 0.55±0.02▲● 0.39 ±0.02▲●

3 討論

bFGF是一種廣譜的有絲分裂原，具有廣泛的細(xì)胞增殖效應(yīng)，它對廣泛的來源于中胚層和神經(jīng)外胚層的細(xì)胞具有明顯的促增殖作用，其靶細(xì)胞有成纖維細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞等。bFGF是神經(jīng)營養(yǎng)因子，可促進神經(jīng)元的存活及突起生長，對神經(jīng)起保護作用［2－3］。bFGF是一種具有多種生物活性的神經(jīng)營養(yǎng)因子，它的基本生物學(xué)作用是促進細(xì)胞分裂增殖，可增強有絲分裂活性。bFGF可促進的神經(jīng)元的存活及突起生長，對神經(jīng)保護的作用。其與相關(guān)聯(lián)的受體結(jié)合導(dǎo)致廣泛的細(xì)胞反應(yīng)，包括細(xì)胞增殖和分化、血管形成和抑制凋亡等。研究表明，bFGF在體內(nèi)、外對多種神經(jīng)元有維持生存和促進生長的作用，并能促進受損神經(jīng)元的修復(fù)和再生。在培養(yǎng)的胎鼠海馬神經(jīng)元中加入bFGF可使神經(jīng)元成活時間增加和軸突延長［4］，bFGF及其受體FGFR濃度的變化調(diào)節(jié)著膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元的生長［5］。正常腦組織中bFGF表達(dá)很少，腦組織缺血損傷后bFGF表達(dá)明顯增強。bFGF能改善血供，對抗缺血缺氧，減少腦水腫，促進成纖維細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞的分裂和增殖，促進新生血管和突觸形成，改善新生神經(jīng)元突起的生長，有助于神經(jīng)元抵御缺血性損傷;外源性給予bFGF可降低腦缺血后的腦梗死體積［6］。bFGF對早期神經(jīng)細(xì)胞發(fā)育分化的影響主要表現(xiàn)在促使神經(jīng)干細(xì)胞存活、增殖并分化［7］。

通過本實驗的研究發(fā)現(xiàn)，各組大鼠不同時間點血腫周圍腦組織bFGF蛋白表達(dá)的Western blot檢測結(jié)果:在腦出血后6h模型組表達(dá)量顯著增加，蛋白陽性信號增強，于3天達(dá)高峰，7天時仍有表達(dá);針刺可上調(diào)腦出血后bFGF的水平，針刺組與模型組比較，具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);針刺組與西藥組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。通過實驗結(jié)果我們可以看到，在腦出血的過程中，針刺可能通過bFGF表達(dá)的增強，進而保護神經(jīng)元，營養(yǎng)膠質(zhì)細(xì)胞，從而實現(xiàn)了其促進神經(jīng)修復(fù)的腦保護作用。而且bFGF與腦出血后的缺血性損傷、神經(jīng)元的修復(fù)有密切關(guān)系［8］。綜上所述，“百會”透“曲鬢”針刺法可能通過促進腦出血后bFGF蛋白表水平，從而減輕神經(jīng)元損傷并促進神經(jīng)修復(fù)與再生。

［1］李丹，鄒偉，王瓏，等.針刺對實驗性腦出血急性期大鼠腦組織Nestin表達(dá)的影響［J］.中醫(yī)藥學(xué)報，2010，38(2):60－62.

［2］Kim MS，Kim CJ，Jung HS，et al.Fibroblast growth factor－2 induces differentiation and apoptosis of Askin tumor cells［J］.Pathol，2004，202(1):103－112.

［3］李欣欣，戴德哉.堿性成纖維細(xì)胞生長因子對腦塊血的保護作用［J］.藥學(xué)進展，2003，27(1):103 －112.

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［5］Stachowiak EK，F(xiàn)ang X，Myers J，et al.CAMP － induced differentration of human neuronal progenitor cells is mediated by nuclear fibroblast growth factor receptor－1(FGFR －1)［J］.Neurochem，2003，84(6):1296－1312.

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［8］鄒偉，王瓏，孫曉偉，等.頭針透刺對腦出血大鼠腦組織IL－6表達(dá)影響的研究［J］.中醫(yī)藥學(xué)報，2012，40(1):81 －83.