易先國，雷咸波，何書海，孫 偉，劉漢儒

（1.信陽農(nóng)業(yè)高等?？茖W(xué)校動物科學(xué)系，河南 信陽 464000；2.河南省信陽市光山縣動物衛(wèi)生監(jiān)督所，河南 信陽 464000；3.西南大學(xué)藥學(xué)院，重慶 北碚 400700）

畜禽免疫抑制性疾病是集約化養(yǎng)殖業(yè)所面臨的嚴(yán)峻問題，嚴(yán)重制約我國畜牧業(yè)的發(fā)展。大量文獻(xiàn)資料表明，部分中藥可調(diào)整和明顯增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，使參與細(xì)胞免疫的細(xì)胞數(shù)量增加、活性增強(qiáng)，使參與體液免疫的抗體增加［1］。

紫芪顆粒由紫錐菊、黃芪組成，具有免疫增強(qiáng)及抗病毒的作用［2-3］。本試驗采用氫化可的松制造免疫抑制小鼠病理模型，再分組灌胃給藥不同劑量的紫芪顆粒溶液，探討其對免疫抑制小鼠免疫功能的影響，為紫芪顆粒治療畜禽免疫抑制性疾病提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗動物 體重為20g±2g小鼠，雌雄各半，由重慶騰鑫生物技術(shù)有限公司提供。

1.2 主要藥品與儀器 藥品：紫芪顆粒（西南大學(xué)藥學(xué)院自制，批號：20091127）；氫化可的松注射液（西南藥業(yè)股份有限公司，國藥準(zhǔn)字H50021209，規(guī)格：5mL，含量：25mg）。新生牛血清（FCS）（杭州新銳生物工程有限公司，批號：20080302），小鼠淋巴細(xì)胞分離液（天津灝洋生物制品科技有限責(zé)任公司）。儀器：AC85-268攝影顯微鏡及配套相機(jī)（重慶光學(xué)儀器廠），GNP-9080型隔水式恒溫培養(yǎng)箱（上海精宏實驗設(shè)備有限公司），755B紫外可見分光光度計（上海菁華科技儀器有限公司）。

1.3 主要溶液的配制 無Ca2+、Mg2+Hank′s液：8.00g NaCl、0.35g NaHCO3、0.40g KCl、0.06g Na2HPO4·12H2O、0.06g KH2PO4加 H2O 至1000.00mL，用5.6%NaHCO3調(diào)pH值至7.2，115℃滅菌15min。4℃貯藏備用。

5.6 %NaHCO3液：5.60g NaHCO3，加蒸餾水100.00mL，115℃20min滅菌，4℃貯藏備用。

Alserver′s溶液：二水枸櫞酸鈉8.0g、枸櫞酸0.5g、葡萄糖20.5g、氯化鈉4.2g加蒸餾水至1000mL、過濾，分裝，10磅高壓20min，4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

新生牛血清（FCS）：杭州新銳生物工程有限公司，批號：20080302，購得的新生牛血清先經(jīng)過56℃，30min滅活后使用。

1.4 試驗動物分組及造模 本試驗共分為6組，每組10只小鼠，分為正常生理鹽水對照組（A）、正常紫芪顆粒藥物對照組（B）、免疫抑制模型對照組（C）、紫芪顆粒低劑量組（D）、紫芪顆粒中劑量組（E）和紫芪顆粒高劑量組（F），見表1。

表1 試驗動物分組及處理

免疫抑制小鼠模型的建立：氫化可的松免疫抑制小鼠，所用的氫化可的松劑量為75μg／g體重。一般而言，糖皮質(zhì)激素的抗炎劑量是體內(nèi)生理濃度的10倍，免疫抑制的劑量應(yīng)為抗炎劑量的2倍［4］。

1.5 給藥劑量和給藥時間的確定 根據(jù)《新藥臨床前安全性評價與實踐》（袁伯俊主編，軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)出版社），通用公式logS=0.8762+0.698logW（S：體表面積；W：體重）［5-7］，換算成小鼠劑量為0.026 g／d。具體各組用藥劑量、次數(shù)如下：生理鹽水對照組給0.05mL／只·次·d生理鹽水；紫芪顆粒低劑量組給0.05mL／只·次·d濃度為0.5g／mL紫芪顆粒溶液；紫芪顆粒中劑量組給0.1mL／只·次·d濃度為0.5g／mL紫芪顆粒溶液；紫芪顆粒高劑量組給0.15mL／只·次·d濃度為0.5g／mL紫芪顆粒溶液。

各抑制組在灌胃給藥的第11天皮下注射氫化可的松0.4mL／只·次，隔日1次，共5次，繼續(xù)給藥喂養(yǎng)10d，測定各個指標(biāo)。

1.6 觀察指標(biāo)與方法 （1）腹腔巨噬細(xì)胞吞功能測定 基本按文獻(xiàn)［8］方法進(jìn)行。（2）小鼠外周血淋巴細(xì)胞分離及花環(huán)形成試驗：基本按文獻(xiàn)［9，10］方法進(jìn)行。（3）血清溶血素測定：基本按文獻(xiàn)［11］方法進(jìn)行。（4）脾腺指數(shù)測定：按文獻(xiàn)［11］方法進(jìn)行。

1.7 數(shù)據(jù)處理SPSS分析軟件處理。

2 結(jié)果與分析

測定結(jié)果，見表2。

表2 小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能、E-玫瑰花環(huán)形成率、血清溶血素、脾臟指數(shù)測定結(jié)果 （）

表2 小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能、E-玫瑰花環(huán)形成率、血清溶血素、脾臟指數(shù)測定結(jié)果 （）

注：與生理鹽水比較，＊：P＜0.05，＊＊：P＜0.01；與紫芪顆粒+生理鹽水組比較，△：P＜0.05，△△：P＜0.01；與生理鹽水+氫化可的松組比較，＊：P＜0.05，＊＊：P＜0.01

通過SPSS分析可知，小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬百分率：免疫低下模型組與生理鹽水組之間差異極顯著（P＜0.01），表明用氫化可的松造免疫低下小鼠模型有意義；紫芪顆粒正常藥物對照組與生理鹽水組之間差異極顯著（P＜0.01），紫芪顆粒低、中劑量治療組與免疫低下模型對照組之間差異極顯著（P＜0.01），而與正常生理鹽水對照組之間無顯著性差異，表明紫芪顆粒低、中劑量能顯著的增強(qiáng)免疫低下小鼠的腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能，使其達(dá)到正常生理水平，小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬指數(shù)之間各組差異性不大，紫芪顆粒正常藥物組的吞噬指數(shù)最高，表明紫芪顆粒能增強(qiáng)正常小鼠的腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能。

淋巴細(xì)胞E-玫瑰花環(huán)形成率：免疫低下模型對照組與生理鹽水對照組之間差異顯著（P＜0.05），表明氫化可的松造模有意義；紫芪顆粒正常對照組與生理鹽水對照組之間差異極顯著（P＜0.01），表明紫芪顆粒能明顯提高正常小鼠淋巴細(xì)胞的免疫功能，紫芪顆粒低、中、高劑量抑制組與正常生理鹽水對照組之間均無顯著性差異，表明紫芪顆粒均能增強(qiáng)免疫抑制小鼠淋巴細(xì)胞功能，使其達(dá)到正常生理水平。

小鼠血清溶血素生成量：紫芪顆粒正常對照組與生理鹽水對照組之間有極顯著性差異（P＜0.01），表明紫芪顆粒能極顯著的提高正常小鼠血清溶血素量；紫芪顆粒低、中、高劑量組與生理鹽水對照組之間均有極顯著性差異（P＜0.01），表明紫芪顆粒能極顯著的提高免疫低下小鼠血清溶血素量，能使免疫低下小鼠的血清溶血素量高于正常組。

小鼠脾臟功能：免疫低下模型對照組與生理鹽水對照組之間差異顯著（P＜0.05），表明用氫化可的松造模有意義；紫芪顆粒正常對照組與生理鹽水對照組之間差異極顯著（P＜0.01），表明紫芪顆粒能極顯著的增加正常小鼠的脾臟重；紫芪顆粒低劑量組與生理鹽水對照組之間差異不顯著，與免疫低下模型對照組之間有顯著性差異（P＜0.05），表明紫芪顆粒低劑量能提高免疫抑制小鼠脾臟功能達(dá)到正常生理水平；紫芪顆粒中、高劑量組與生理鹽水對照組之間差異顯著（P＜0.05），與模型對照組之間差異不顯著，表明紫芪顆粒中、高劑量組在提高免疫抑制小鼠脾臟功能方面無明顯作用。

3 小結(jié)與討論

本文通過對免疫低下模型小鼠的腹腔巨噬細(xì)胞吞噬百分率、淋巴細(xì)胞E-玫瑰花環(huán)形成率、血清溶血素生成量、鼠脾臟功能指標(biāo)的測定顯示，免疫低下模型組與生理鹽水組之間差異極顯著（P＜0.01），表明氫化可的松能顯著的降低正常小鼠的腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能，降低正常小鼠的淋巴細(xì)胞E-玫瑰花環(huán)形成率，降低正常小鼠的血清溶血素生成量和降低正常小鼠的脾臟功能，證明了本試驗成功的用氫化可的松制造免疫低下小鼠模型。

通過對紫芪顆粒正常藥物對照組與生理鹽水組小鼠的腹腔巨噬細(xì)胞吞噬百分率、淋巴細(xì)胞E-玫瑰花環(huán)形成率、血清溶血素生成量、鼠脾臟功能指標(biāo)的測定顯示，紫芪顆粒正常藥物對照組與生理鹽水組之間各個指標(biāo)差異都極顯著（P＜0.01），表明紫芪顆粒能顯著的增強(qiáng)正常小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能，能明顯提高正常小鼠淋巴細(xì)胞的免疫功能，能極顯著的提高正常小鼠血清溶血素生成量，能極顯著的增加正常小鼠的脾臟重，證實了紫芪顆粒能明顯的提高正常小鼠的免疫功能。

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