朱剛毅，劉寶有，陶正澤，邢四仙，王兆美，張明芬，李盛達(dá)

（云南省江川縣畜牧局，云南 江川 652600）

在每年春秋兩季的重大動(dòng)物疫病免疫抗體監(jiān)測(cè)中，我們發(fā)現(xiàn)，少部分蛋雞場(chǎng)的商品蛋雞一個(gè)飼養(yǎng)周期只注射過2次禽流感（H5+H9）二價(jià)滅活疫苗，但在商品蛋雞淘汰時(shí)（540日齡左右）采血檢測(cè)禽流感H5亞型和H9亞型病毒免疫抗體效價(jià)，抗體合格率（≥5log2）還在90%以上。目前商品蛋雞場(chǎng)疫苗防疫種類繁多，如果單用禽流感H5、H9單價(jià)滅活疫苗免疫商品蛋雞，一個(gè)飼養(yǎng)周期禽流感疫苗就得注射6～8針。對(duì)此，我們用禽流感（H5+H9）二價(jià)滅活疫苗分別對(duì)兩組商品蛋雞1次性免疫和2次性免疫注射后，定期采血進(jìn)行HI抗體效價(jià)跟蹤檢測(cè)；并對(duì)只做2次禽流感（H5+H9）二價(jià)滅活疫苗的一個(gè)商品蛋雞場(chǎng)的三批蛋雞作了禽流感免疫抗體效價(jià)和禽流感病毒抗原快速檢測(cè)的調(diào)查。旨在探索一種簡(jiǎn)便、安全有效的蛋雞禽流感的預(yù)防免疫程序。報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 禽流感（H5+H9）二價(jià)滅活疫苗（H5N1Re-5+H9N2Re-2株） 由農(nóng)業(yè)部批準(zhǔn)的某禽流感生產(chǎn)廠家生產(chǎn)。H5亞型和H9亞型禽流感標(biāo)準(zhǔn)抗原及陽(yáng)性、陰性血清，由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所生產(chǎn)。禽流感病毒抗原快速檢測(cè)試劑盒：BioN-ote，lnc生產(chǎn)，羅曼動(dòng)物保健有限公司經(jīng)銷。

1.2 試驗(yàn)雞分組 1日齡的海藍(lán)褐商品蛋雞600只。分為A、B兩組，A組為1次性免疫組；B組為2次性免疫組，每組300只，由某商品雞場(chǎng)在相同環(huán)境中飼養(yǎng)。

1.3 免疫預(yù)防方法 15日齡A、B兩組每只雞頸部皮下注射禽流感H5+H9滅活疫苗0.3mL。B組至96日齡每只雞再注射禽流感H5+H9滅活疫苗0.5mL。其他疫苗按常規(guī)免疫方法進(jìn)行。

1.4 血清樣品采集 采血日齡為A組：8、12、21、29、36、66、97、127、150；B 組 8、12、21、29、36、66、97、127、150、181、211、241、271、301、331、361、391、421、451、481、511、541。每組試驗(yàn)雞隨機(jī)抽樣30只，每只雞用1次性2.5mL塑料注射器翅膀下靜脈采血1.5mL，分離血清，冷凍保存?zhèn)錂z。

1.5 抗體效價(jià)檢測(cè) 按《中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)-高致病性禽流感診斷技術(shù)》GB／T18936-2003）規(guī)定的操作規(guī)范進(jìn)行血凝試驗(yàn)、血凝抑制試驗(yàn)（HAHI）檢測(cè)H5亞型和H9亞型禽流感抗體效價(jià)［4］，每組求取抗體效價(jià)平均值，繪制坐標(biāo)圖（見圖1）。A組測(cè)致平均抗體效價(jià)＜5log2，B組測(cè)致541日齡（老雞淘汰）。試驗(yàn)結(jié)束。

1.6 被調(diào)查商品蛋雞場(chǎng)的調(diào)查方法 在某一商品蛋雞場(chǎng)選擇了3批商品蛋雞，禽流感（H5+H9）二價(jià)滅活疫苗只免疫過2次，首免時(shí)間為14～17日齡，二免時(shí)間為90～110日齡；每批為每批為3000～5000只，商品蛋雞淘汰前（520～540日齡）每批隨機(jī)抽樣30只，每只雞用1次性2.5mL塑料注射器翅膀下靜脈采血1.5mL，分離血清，冷凍保存?zhèn)錂z禽流感免疫抗體效價(jià)。每只雞采血后用禽流感病毒抗原快速檢測(cè)試劑盒中的樣品采集拭子插入雞喉頭擦拭幾次后，抽出采集拭子放入樣品管，與樣品管中的液體充分混合，一只樣品管液混合5只雞的采集拭子；再用1次性滴管吸取樣品管中混合好的上層樣品液，滴入4～5滴樣品到試紙條樣品孔，室溫水平放置試紙條20～30min內(nèi)，判定結(jié)果。禽流感病毒抗原的判定標(biāo)準(zhǔn)為 ：陽(yáng)性：試紙?jiān)贑區(qū)和T區(qū)位置出現(xiàn)平行的紫紅色（或紅色）線；陰性：試紙只在C區(qū)位置出現(xiàn)一條紫紅色（或紅色）線；無效：試紙不出現(xiàn)任何線。

2 結(jié)果

2.1 A組（1次性免疫組）禽流感H5+H9滅活疫苗免疫7d后禽流感抗體效價(jià)開始回升，免疫后15日H5、H9抗體效價(jià)平均值分別為6.07log2、6.05 log2，21日 H5、H9抗體效價(jià)平均值分別為7.32 log2、7.79log2，達(dá)峰值；H5、H9免疫后112日抗體效價(jià)平均值分別為6.21log2、6.62log2（≥5log2），抗體合格率100%，往后逐漸下降 ，到免疫后135日，H5、H9抗體效價(jià)平均值分別只有3.64log2、3.81log2（＜5log2）。H5、H9亞型HI抗體消長(zhǎng)規(guī)律同步，離散度較?。ㄒ妶D1）。

2.2 B組（二次性免疫組）禽流感H5+H9滅活疫苗二免（96日齡）前禽流感H5+H9抗體效價(jià)平均值以A組相近，二免后第30天達(dá)峰值 ，分別為11.05log2和11.62log2，持續(xù)1個(gè)月后緩慢下降。二免后445d（541日齡），禽流感H5+H9抗體效價(jià)平均值分別為6.51log2、6.8log2（≥5log2），免疫合格率86.7%。H5+H9亞型HI抗體消長(zhǎng)規(guī)律同步，離散度稍大（見圖2）。

2.3 A、B兩組首免前的8日齡雛雞禽流感H5+H9母源抗體效價(jià)平均值維持在7.35log2～7.82 log2之間。12日齡母源抗體效價(jià)平均值則下降致3.01log2～3.72log2（＜5log2）。

2.4 被調(diào)查商品蛋雞場(chǎng)的蛋雞禽流感調(diào)查結(jié)果（見表1）。

表1 商品蛋雞場(chǎng)的蛋雞禽流感調(diào)查結(jié)果

3 討論

3.1 用禽流感（H5+H9）二價(jià)滅活疫苗免疫商品蛋雞，產(chǎn)蛋前免疫未見到明顯的不良反應(yīng)，免疫效果確實(shí)有效。15日齡1次性免疫組免疫后112d，檢測(cè)禽流感病毒H5、H9亞型HI抗體效價(jià)平均值都在6log2以上（＞5log2），免疫合格率100%，到免疫后135日，H5、H9抗體效價(jià)平均值在5log2以下（＜5log2），免疫保護(hù)期只能維持4個(gè)月左右［3］，與使用說明書和吳艷濤等報(bào)道相似。

3.2 15日齡、96日齡二次性免疫組二免后445d（541日齡），檢測(cè)禽流感病毒H5、H9亞型HI抗體效價(jià)平均值仍在6log2以上，免疫合格率86.7%，免疫保護(hù)時(shí)間比1次性免疫組延長(zhǎng)11個(gè)月，免疫保護(hù)期則延至541日齡。從做過2次禽流感（H5+H9）二價(jià)滅活疫苗的3批商品蛋雞抽檢的101份樣品結(jié)果看，一是禽流感病毒H5、H9亞型抗原檢測(cè)都是陰性，整個(gè)飼養(yǎng)周期未發(fā)生過禽流感疫情；二是禽流感病毒H5、H9亞型免疫HI抗體效價(jià)平均值尚在6log2至7log2之間，免疫抗體合格率在85%左右；試驗(yàn)結(jié)果與調(diào)查結(jié)果基本一致。商品蛋雞一個(gè)飼養(yǎng)周期一般為一年半，筆者認(rèn)為，實(shí)際工作中只需用禽流感（H5+H9）二價(jià)滅活疫苗，在14～17日齡和96～115日齡時(shí)，給商品蛋雞2次頸部皮下注射，就可有效地預(yù)防商品蛋雞禽流感病毒H5亞型和H9亞型的感染。

3.3 從結(jié)果坐標(biāo)圖分析 A、B兩組試驗(yàn)雞禽流感H5亞型和H9亞型HI抗體消長(zhǎng)規(guī)律，都在疫苗免疫1周后上升，免疫后21～30d達(dá)峰值［1-2］。但B組抗體效價(jià)峰值比A組抗體效價(jià)峰值高出4log2，說明加強(qiáng)免疫后雞體對(duì)禽流感H5亞型和H9亞型病毒的免疫機(jī)能比1次性免疫的免疫機(jī)能更強(qiáng)大。禽流感H5亞型和H9亞型HI抗體升降幅度基本一致。

3.4 本次禽流感H5亞型和H9亞型HI母源抗體效價(jià)平均值的測(cè)定 雛雞12日齡與8日齡相比，時(shí)間只相差4d，母源抗體效價(jià)平均值從7log2以上迅速下降為4log2以下，說明12日齡后的雛雞，母源抗體難以抗拒禽流感H5亞型和H9亞型的侵襲。為減少母源抗體對(duì)疫苗免疫效果的干擾，我們建議二次性免疫的首免時(shí)間為14～17日齡注射疫苗。

［1］蔡戈，亓文寶，徐成剛，等.種雞禽流感（H5+H9）二價(jià)滅活疫苗免疫程序的研究［J］.中國(guó)獸醫(yī)雜志，2009，45（7）：14-16.

［2］汪淑芳，周春宇，梁梓，等.H5亞型高致病性禽流感免疫抗體檢測(cè)及分析［J］.畜牧獸醫(yī)雜志，2008，27（1）：34-27.

［3］吳艷濤，桑蓮花，董燕平，等.免疫雞群新城疫與禽流感的流行病學(xué)檢測(cè)［J］.中國(guó)家禽，2009，31（16）：56-57.

［4］GB／T18936-2003.高致病性禽流感診斷技術(shù)［S］.