劉 濤，王 瑞，曲哲會，連慧香，魏愛枝

（信陽農(nóng)業(yè)高等?？茖W校，河南 信陽 464000）

豬大腸桿菌病是由致病性大腸桿菌引起的仔豬的一組腸道傳染性疾病，常見的有仔豬黃痢、仔豬白痢和仔豬水腫3種。以發(fā)生腸炎、腸毒血癥為特征.主要發(fā)生在0～70日齡的仔豬。大腸桿菌病屬于條件性致病菌，當環(huán)境因素惡劣或機體抵抗力下降時，容易引發(fā)該病的發(fā)生，尤其是冬季，天氣寒冷，氣溫劇變，保溫不良，空氣流通不暢，更易引發(fā)此病，造成新生仔豬大批死亡或生長發(fā)育不良，嚴重影響?zhàn)B豬業(yè)的發(fā)展，給養(yǎng)豬戶造成巨大的經(jīng)濟損失。2010年2月到11月期間，我們對信陽地區(qū)存欄母豬在100頭以下的中小型養(yǎng)豬場開展了豬大腸桿菌病血清型流行病學調(diào)查工作。

1 材料與方法

1.1 病料 采自2010年以來河南省信陽地區(qū)平橋區(qū)、浉河區(qū)、羅山縣、光山縣、固始縣、潢川縣、新縣156個發(fā)生豬大腸桿菌病的中小型養(yǎng)豬場；其中，肛門拭子120份，病豬空腸和小腸內(nèi)容物100份，共計220份。

1.2 診斷試劑 大腸桿菌標準抗O型血清，中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所提供。培養(yǎng)基 營養(yǎng)瓊脂、麥康凱培養(yǎng)基、S.S.瓊脂，青島海博生物技術(shù)有限公司提供。微量生化反應管，青島海博生物技術(shù)有限公司提供。

1.3 試驗動物 試驗小鼠（清凈級），信陽職業(yè)技術(shù)學院實驗動物房提供。

1.4 主要儀器 THZ-92C型臺式恒溫振蕩器，E-200型數(shù)碼攝影顯微鏡，PHS25型數(shù)顯式酸度計，DHG-9241A型電熱恒溫干燥箱，WGP-300隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱，7230型紫外分光光度計，LDZX-50KBS型不銹鋼全自動數(shù)顯立式高壓蒸汽滅菌器，SW-CJ-ZF型超凈工作臺，DW-L 中科美菱超低溫冰箱。

1.5 分離培養(yǎng) 病料分別接種普通營養(yǎng)瓊脂平板、鮮血瓊脂平板、麥康凱平板，置37℃培養(yǎng)24h；涂片，革蘭染色鏡檢，挑取培養(yǎng)基上的典型單個菌落，依次接種于麥康凱瓊脂平板、肉湯，進行純培養(yǎng)。

1.6 生化試驗 取純培養(yǎng)菌落接種生化反應管，于37℃培養(yǎng)，按說明書進行生化反應試驗。

1.7 血清型鑒定 將經(jīng)生理生化試驗鑒定為大腸桿菌的純培養(yǎng)菌株于普通瓊脂培養(yǎng)，用2mL0.5%石碳酸生理鹽水洗下以后，以2000r／min離心5 min；取其上清液，8000r／min離心10min；取其沉淀物配成菌懸液，再經(jīng)121℃處理2h，破壞K抗原，即為O抗原；4℃保存，備用。按照大腸桿菌標準抗O血清凝集試驗使用說明書操作。鑒定發(fā)病場豬大腸桿菌致病菌株血清型。

1.8 致病性試驗 將鑒定的大腸埃希氏菌分別接種于營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，37℃振蕩培養(yǎng)，4000r／min離心20min，用等量滅菌生理鹽水配制懸浮液作攻毒用。將27只小鼠，分為9組，每組3只。8個組為試驗組，1個組作為對照，試驗組腹腔注射懸浮液0.2mL／只。注射后每6h觀察1次，連續(xù)觀察72 h，剖檢死亡小鼠，取肝臟，抹片，革蘭染色鏡檢。

2 結(jié)果

2.1 流行病學調(diào)查 對2010年以來河南省信陽地區(qū)156個發(fā)生豬大腸桿菌病的養(yǎng)豬場進行了流行病學調(diào)查、臨床檢查、病理學和實驗室診斷。結(jié)果發(fā)生疫情的豬群總存欄數(shù)為20656頭，總發(fā)病豬4738頭，病死943頭，平均發(fā)病率為22.93% ，平均病死率為19.90%。其中，仔豬黃痢93次，發(fā)病豬3190頭，病死542頭，平均發(fā)病率為15.44%，平均病死率為16.99%；仔豬白痢43次，發(fā)病豬934頭，病死128頭，平均發(fā)病率為4.52%，平均病死率為13.7%；仔豬水腫20次，發(fā)病豬614頭，病死72頭，平均發(fā)病率為2.97%，平均病死率為11.72%（見表1）。

表1 信陽地區(qū)養(yǎng)豬場豬大腸桿菌病流行情況

2.2 分離培養(yǎng) 共分離獲得70株大腸桿菌（見表2）。其在普通營養(yǎng)瓊脂上形成為中等大小、圓形微凸、表面光滑濕潤、淺灰色半透明菌落；在血液瓊脂上出現(xiàn)菌落較大，有黏性邊緣整齊，并有隆起的灰白色菌落，不溶血或β溶血；在麥康凱平板上，形成周邊粉紅中心深紅色菌落；分離菌接種普通肉湯呈均勻混濁，管底有淡白色黏稠沉淀，輕搖呈云霧狀散開，并有糞臭味。

表2 大腸桿菌分離結(jié)果

2.3 生化試驗 分離到的細菌能發(fā)酵葡萄糖、乳糖、蔗糖，能使麥芽糖、甘露醇產(chǎn)酸產(chǎn)氣，不能發(fā)酵肌糖、木糖，不能利用枸櫞酸，V-P試驗（一），M.R.試驗（+）。

2.4 血清型鑒定 仔豬黃痢病料分離菌株血清型分別為 O8（4株）、O9（4株）、O60（2株）、O64（2株）、O115（1株）、O149（9株）、O157（18株），仔豬白痢病料分離菌株血清型分別為 O8（6株）、O9（2株）、O139（1株）、O157（11株），仔豬水腫病料分離菌株血清型分別為 O2（1株）、O8（1株）、O139（3株）、O157（5株）。

2.5 致病性試驗 接種后6h，接種O8，O9，O157的9只小鼠全部發(fā)??；24h后，接種O149的3只小鼠全部發(fā)病，接種O60，O64的6只小鼠中各有2只發(fā)??；72h后，除接種O115的3只小鼠未發(fā)病外，接種試驗組小鼠全部發(fā)病。發(fā)病小鼠出現(xiàn)稀便，沉郁，呼吸加快，肛門周圍被毛玷污；其中，接種 O8，O9，O60，O157，O139，O64菌株小鼠全部死亡，對照組和接種O115組小鼠未出現(xiàn)死亡。死亡小鼠肝涂片，革蘭染色、鏡檢，結(jié)果與分離菌株鏡檢結(jié)果相同（見表3）。

表3 各血清型大腸桿菌致病性試驗結(jié)果

3 小結(jié)與討論

3.1 對2010年以來河南省信陽地區(qū)156個發(fā)生豬大腸桿菌病的養(yǎng)豬場進行了血清型流行病學調(diào)查、臨床檢查、病理學和實驗室診斷。結(jié)果發(fā)生疫情的豬群總存欄數(shù)為20656頭，總發(fā)病豬4738頭，病死943頭，平均發(fā)病率為22.93% ，平均病死率為19.90%。其中，仔豬黃痢93次，發(fā)病豬3190頭，病死542頭，平均發(fā)病率為15.44%，平均病死率為16.99%；仔豬白痢43次，發(fā)病豬934頭，病死128頭，平均發(fā)病率為4.52%，平均病死率為13.7%；仔豬水腫20次，發(fā)病豬614頭，病死72頭，平均發(fā)病率為2.97%，平均病死率為11.72%。表明致病性大腸桿菌引起的仔豬黃痢和仔豬白痢為河南省信陽地區(qū)養(yǎng)豬場仔豬腹瀉性疾病和死亡的重要原因。

3.2 血清型鑒定共檢出8種O抗原血清型，動物試驗 O8，O9，O60，O64，O149，O157，O139血清型接種小鼠全部發(fā)病和致死。這一結(jié)果表明，信陽地區(qū)流行的豬大腸桿菌病血清型復雜，在防治本病時應充分注意，選擇疫苗應與本地流行血清型相對應，有條件的豬場應進行血清型的診斷，或采用本地（場）菌株制造滅活疫苗進行預防接種。

［1］Gyles C L.Escherichia coli Cytotoxins and enterotoxin s［J］.Can J Microbial，1992，38：734-746.

［2］Sehofield F W.Oedema disease（enterotoxins）in swine.Ⅱ.Experiments condered in a susceptible herd［J］.Can J Comp Med，1995，19：242.

［3］Kohler E M.Studies on Escherichia coli in gnotobitic pigs［J］.Comp Med，1967，31：278-283.

［4］王紅寧，代敏，吳祥輝，等，仔豬腹瀉的病因及綜合防治進展［J］.養(yǎng)豬，2002（3）：32-34.

［5］孫廣力，孫剛，李書華，等.黑龍江省規(guī)?；B(yǎng)豬場大腸桿菌病血清型流行病學調(diào)查［J］.黑龍江畜牧獸醫(yī)，2004，32（7）：90-92.

［6］王孝友，曾秀，孔路軍，等.仔豬黃白痢大腸桿菌的分離鑒定［J］.湖北畜牧獸醫(yī)，2004，23（6）：27-29.

［7］王紅寧，劉世貴，劉書亮，等.規(guī)?；i場仔豬黃、白痢的防治研究［J］.中國預防獸醫(yī)學報，1999，21（4）：264-267.

［8］繆梅芳，龔冬堯.仔豬水腫病的綜合防治［J］.中獸醫(yī)學雜志，2003（4）：38-39.

［9］方希修，虞曉春，劉建文，等.豬水腫病的診斷與治療［J］.動物科學與動物醫(yī)學，2004（8）：64-65.