許志仁，卞俊，蔣雪濤，原麗慧（1.解放軍第411醫(yī)院藥學(xué)科，上海20044；2.江西中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，南昌 0004；.第二軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院，上海 2004）

近年來(lái)，隨著時(shí)間生物學(xué)和時(shí)辰藥理學(xué)的發(fā)展，釋藥方式符合人體晝夜節(jié)律變化的口服脈沖釋藥系統(tǒng)受到藥學(xué)研究者的廣泛關(guān)注[1]。目前，國(guó)內(nèi)、外已設(shè)計(jì)和研究了多種不同釋藥機(jī)制的定時(shí)釋藥制劑，主要包括脈沖片劑和脈沖微丸[2，3]。阿莫西林（Amoxicillion，羥氨芐青霉素）是一種半合成青霉素藥物，因其可口服給藥而廣泛用于臨床[4]。青霉素類(lèi)抗生素屬時(shí)間依賴(lài)性抗菌藥，當(dāng)藥物濃度在病原體最低抑菌濃度（MIC）以上時(shí)，發(fā)揮抗菌作用；當(dāng)濃度為最低殺菌濃度（MBC）的4～5倍時(shí)，殺菌作用達(dá)到飽和，此時(shí)再提高藥物濃度已不能提高殺菌作用[5]。因此臨床應(yīng)用阿莫西林時(shí)為少量多次給藥，以使血藥濃度超過(guò)MIC的時(shí)間維持到最長(zhǎng)。為使患者睡眠時(shí)藥物濃度能維持在MIC之上，又避免半夜服藥帶來(lái)的不便，本試驗(yàn)設(shè)計(jì)制備了阿莫西林脈沖釋藥微丸，其可在晚上臨睡前（22：00）時(shí)服用，間隔4 h后于次日凌晨釋放出治療量的藥物，以達(dá)到使血藥濃度超過(guò)MIC的時(shí)間維持到最長(zhǎng)的效果。

1 儀器與試藥

Mini Glatt流化床（德國(guó)Glatt公司）；85-2型恒溫磁力攪拌器（上海司樂(lè)儀器廠）；HL-2恒流泵（上海新波無(wú)線(xiàn)電廠）；SE3001F電子天平（奧豪斯儀器上海有限公司）；UV-2550紫外分光光度計(jì)（日本島津公司）；ZRS-8G智能溶出試驗(yàn)儀（天津天河醫(yī)療儀器有限公司）；標(biāo)準(zhǔn)篩（浙江省上虞市紗篩廠）。

阿莫西林原料藥及對(duì)照品（珠海聯(lián)邦制藥股份有限公司，批號(hào)：3081032009，純度：99.6%）；空白蔗糖丸芯（杭州高成生物營(yíng)養(yǎng)技術(shù)有限公司，規(guī)格：直徑0.4～0.6 mm）；羥丙基甲基纖維素（HPMC，型號(hào)：E5）、乙基纖維素水分散體（Surelease，固含物：25%）均由上?？?lè)康包衣技術(shù)有限公司提供；羧甲基淀粉鈉（CMS-Na，上海晶純實(shí)業(yè)有限公司）；阿莫西林脈沖釋藥微丸（解放軍第411醫(yī)院藥學(xué)科自制，含量：18.1%）。

2 阿莫西林含量及體外釋放度測(cè)定方法的建立

2.1 吸收波長(zhǎng)的選擇

精密稱(chēng)取阿莫西林對(duì)照品適量，加蒸餾水溶解、稀釋?zhuān)苽涑蓾舛葹?33 μg·mL－1的阿莫西林對(duì)照品溶液，按紫外分光光度法（《中國(guó)藥典》2010年版二部附錄ⅣA）[6]在200～700 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行紫外掃描，同時(shí)將制劑所用輔料按處方比例用水制備成溶液，搖勻過(guò)濾后進(jìn)行掃描。結(jié)果顯示，阿莫西林在272 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，而輔料在此吸收可忽略。同法對(duì)阿莫西林在0.1 mol·L－1鹽酸（以下簡(jiǎn)稱(chēng)鹽酸）和pH6.8磷酸鹽緩沖液（PBS）中進(jìn)行紫外掃描，吸收峰位和強(qiáng)度與在水中的相似，所以選擇272 nm作為測(cè)定波長(zhǎng)。阿莫西林和輔料在水中的紫外掃描光譜見(jiàn)圖1。

圖1 紫外掃描光譜圖A.阿莫西林；B.輔料Fig 1 UV spectrumA.amoxicillin；B.excipients

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的建立

精密稱(chēng)取阿莫西林對(duì)照品適量，置于量瓶中，分別以蒸餾水、鹽酸、PBS為溶出介質(zhì)，制備成1 mg·mL－1的對(duì)照品母液，再分別精密吸取0.5、1.0、1.5、2、2.5 mL置于10 mL量瓶中，分別加對(duì)應(yīng)溶出介質(zhì)稀釋?zhuān)脻舛确謩e為50、100、150、200、250 μg·mL－1的溶液，以各自的溶出介質(zhì)為空白，于272 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度（Y）。以Y對(duì)濃度（X）進(jìn)行線(xiàn)性回歸，得回歸方程：水：Y＝0.002 7X+0.005 4（r＝0.999 9）；鹽酸：Y＝0.002 6X+0.013 9（r＝0.999 9）；PBS：Y＝0.002 7X+0.008（r＝0.999 9）。

2.3 回收率試驗(yàn)

按處方量80%、100%、120%精密稱(chēng)取阿莫西林對(duì)照品各3份，按處方量比例加入100%標(biāo)示量的輔料，加溶出介質(zhì)搖勻，過(guò)濾，取續(xù)濾液于272 nm波長(zhǎng)處分別測(cè)定吸光度，計(jì)算。結(jié)果，低、中、高濃度平均回收率分別為（99.75±0.63）%、（100.23±0.74）%、（99.94±1.22）%，總平均回收率為99.97%，RSD＝0.86%。

2.4 精密度試驗(yàn)

按“2.2”項(xiàng)下方法操作，制備濃度分別為100、150、200 μg·mL－1的低、中、高3個(gè)樣品溶液，每個(gè)濃度的溶液各于第1天重復(fù)測(cè)定5次，以后每天測(cè)定1次，連續(xù)測(cè)定5 d。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程計(jì)算含量，得日內(nèi)RSD＝0.86%，日間RSD＝0.96%。

2.5 體外釋放度測(cè)定方法建立

按《中國(guó)藥典》2010年版二部附錄ⅩD釋放度測(cè)定法第一法（籃法）裝置[6]，水為釋放介質(zhì)，轉(zhuǎn)速100 r·min－1，介質(zhì)溫度（37±0.5）℃，在預(yù)定時(shí)間間隔內(nèi)（每隔1 h取樣1次，共取樣12 h）取樣10 mL，0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，并即時(shí)補(bǔ)加介質(zhì)10 mL。為考察介質(zhì)pH對(duì)釋放度的影響，分別以水、鹽酸、PBS為釋放介質(zhì)進(jìn)行試驗(yàn)，用紫外分光分度計(jì)在波長(zhǎng)272 nm處測(cè)定吸光度，計(jì)算藥物累積釋藥百分率。

3 處方與制備

3.1 各層包衣液的處方與制備

3.1.1 含藥層包衣液處方與制備。處方：5%的阿莫西林原料藥+2%HPMC。制備：取黏合劑HPMC溶于適量熱水中，磁力攪拌至完全溶解，再緩慢加入藥物，攪拌均勻，制備成HPMC質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2%、藥物質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的混懸液，將此混懸液過(guò)120目篩，以防止在包衣過(guò)程中小顆粒堵塞噴嘴。

3.1.2 溶脹層包衣液處方與制備。處方：3%的CMS-Na的乙醇-水混懸液。制備：將CMS-Na分散在乙醇-水（1∶1，V/V）混合液中，攪拌均勻。

3.1.3 控釋層包衣液處方與制備。處方：乙基纖維素水分散體。制備：取乙基纖維素水分散體用水稀釋成固含物為10%的溶液，攪拌均勻即得，備用。

3.2 包衣微丸的制備

將空白蔗糖丸芯置于流化床內(nèi)，按含藥層、溶脹層、控釋層的順序依次包衣，進(jìn)風(fēng)溫度55℃，噴液速率1.5～1.8 mL·min－1，流化壓力0.25～0.28 bar，霧化壓力1.8 bar，以底噴方式進(jìn)行包衣，每次包衣完成后流化干燥20 min。包衣增重計(jì)算公式：包衣增重（%）＝（包衣后重－包衣前重）/包衣前重×100%。

3.3 含藥丸芯釋放度考察

按“2.5”項(xiàng)下方法考察含藥丸芯（只有含藥層，未包溶脹層及控釋層的微丸）的釋放度。結(jié)果表明，含藥丸芯中藥物在30 min內(nèi)基本釋放完全，因此，含藥丸芯不會(huì)成為阻滯藥物釋放的因素。釋放曲線(xiàn)見(jiàn)圖2。

圖2 含藥丸芯體外釋藥曲線(xiàn)Fig 2 Dissolution profiles of core containing drug in vitro

3.4 微丸釋藥的影響因素考察

3.4.1 溶脹層（CMS-Na）包衣增重對(duì)藥物釋放的影響。保持控釋層增重28%，以CMS-Na為溶脹層材料，改變?nèi)苊泴影略鲋胤謩e為12%、16%、20%，制備包衣微丸，并分別進(jìn)行累積釋藥百分率測(cè)定，釋放曲線(xiàn)見(jiàn)圖3。

圖3 溶脹層不同包衣增重時(shí)微丸體外釋藥曲線(xiàn)Fig 3 Dissolution profiles of pellets with different thickness of swelling layer in vitro

圖3結(jié)果表明，溶脹層包衣增重達(dá)到一定的厚度時(shí)，才能獲得較好的脈沖釋放效果。保持控釋層包衣增重28%、溶脹層增重12%時(shí)，釋藥曲線(xiàn)類(lèi)似緩釋曲線(xiàn)，這可能是由于溶脹層薄，所產(chǎn)生的膨脹力不足，無(wú)法撐破控釋層衣膜形成裂口，導(dǎo)致藥物層被溶解的藥物只能通過(guò)已被脹大、但未破裂的控釋層衣膜擴(kuò)散所致[7]，因此藥物釋放量少；當(dāng)溶脹層包衣增重達(dá)16%時(shí)，溶脹層已經(jīng)產(chǎn)生足夠的膨脹力來(lái)?yè)纹瓶蒯寣右履ぃ? h時(shí)滯后開(kāi)始釋藥，隨后的4 h累積釋藥百分率達(dá)80%以上；當(dāng)溶脹層包衣膜增重到20%時(shí)，時(shí)滯為2 h，時(shí)滯已達(dá)不到要求。因此本試驗(yàn)選用溶脹層包衣增重16%。

3.4.2 控釋層（乙基纖維素水分散體）包衣增重對(duì)藥物釋放的影響。保持溶脹層包衣增重為16%，改變控釋層包衣增重分別為24%、28%、32%，制備包衣微丸，并分別進(jìn)行累積釋藥百分率測(cè)定，釋放曲線(xiàn)見(jiàn)圖4。

圖4 控釋層不同包衣增重時(shí)微丸體外釋藥曲線(xiàn)Fig 4 Dissolution profiles of pellets with different thickness of controlled-release layer in vitro

圖4結(jié)果表明，保持溶脹層包衣增重16%、控釋層包衣增重24%，釋藥時(shí)滯為2 h，達(dá)不到理想要求；控釋層包衣增重32%，釋藥曲線(xiàn)并沒(méi)有呈現(xiàn)出期望的脈沖釋放效果，而是呈現(xiàn)出一種緩釋的狀態(tài)；而控釋層包衣增重28%時(shí)，藥物釋放可時(shí)滯4 h，并達(dá)到脈沖釋放的效果。

3.4.3 介質(zhì)pH對(duì)藥物釋放的影響。將溶脹層包衣增重16%、控釋層包衣增重為28%的脈沖控釋微丸分別置于水、鹽酸、PBS釋放介質(zhì)中進(jìn)行累積釋藥百分率測(cè)定。結(jié)果，藥物在3種介質(zhì)中的釋放無(wú)顯著性差異，即微丸中藥物的釋放不依賴(lài)于介質(zhì)pH值。

3.5 優(yōu)化條件驗(yàn)證試驗(yàn)

按照上述因素考察得出的優(yōu)化條件，制備了3批微丸，以水為釋放介質(zhì)測(cè)定其累積釋藥百分率，考察其重現(xiàn)性。結(jié)果表明，優(yōu)化的條件重現(xiàn)性良好。12 h內(nèi)累積釋藥百分率（1、4、9、12 h）數(shù)據(jù)如表1，釋藥曲線(xiàn)見(jiàn)圖5。

表1 3批樣品累積釋藥百分率Tab 1 Accumulation drug release rate of 3 batches of samples

圖5 3批樣品體外釋藥曲線(xiàn)Fig 5 Drug release profiles of 3 batches of samples

4 討論

本試驗(yàn)采用雙層包衣模型制備脈沖釋藥微丸，該模型溶脹層為水溶脹型材料，控釋層為惰性高分子材料，藥物的釋放通過(guò)外層膜的破裂而觸發(fā)，與滲透壓調(diào)節(jié)原理[8]和有機(jī)酸誘導(dǎo)原理[9]所制備的脈沖控釋微丸相比，該模型時(shí)滯后的釋藥速率快，藥物釋放不受外界pH值的影響。

含藥包衣液要過(guò)120目篩，防止藥粉中的細(xì)小顆粒堵塞噴嘴。溶脹層材料CMS-Na分散在乙醇-水（1∶1）混合液中，以減小黏度，防止包衣過(guò)程中微丸之間的粘連。

對(duì)優(yōu)化的條件進(jìn)行了驗(yàn)證試驗(yàn)，結(jié)果表明，該優(yōu)化條件下包衣得到的3批微丸的重現(xiàn)性良好，說(shuō)明優(yōu)化條件穩(wěn)定可靠。制備的阿莫西林脈沖釋藥微丸具有體外脈沖釋放作用。

阿莫西林口服后吸收迅速，約75%～90%可自胃腸道吸收，食物對(duì)藥物的吸收影響不顯著，阿莫西林在多數(shù)組織和體液中分布良好，口服阿莫西林0.25 g達(dá)峰時(shí)間為1～2 h。因此為了能維持普通制劑單日內(nèi)6～8 h間隔給藥的療效，本試驗(yàn)設(shè)計(jì)了時(shí)滯為4 h左右的脈沖釋藥微丸，時(shí)滯后4 h釋藥達(dá)到80%左右，目的是在4 h脈沖釋放的阿莫西林在有即刻吸收相之外還具有延遲吸收相，使得在給藥間隔期內(nèi)的大部分時(shí)間內(nèi)，阿莫西林的血藥濃度都能維持在MIC之上，達(dá)到高效的抑菌能力，同時(shí)能滿(mǎn)足制劑的設(shè)計(jì)要求[10，11]。

張瑜[12]等制備了鹽酸維拉帕米脈沖控釋微丸，其內(nèi)層溶脹層采用CMS-Na，中間阻滯層選用HPMC，外層衣膜采用含致孔劑的乙基纖維素，制得的脈沖微丸釋藥曲線(xiàn)與本試驗(yàn)的釋藥曲線(xiàn)類(lèi)似。與其相比，本試驗(yàn)減少了包衣層數(shù)（無(wú)需包中間阻滯層），簡(jiǎn)化了包衣過(guò)程，并考察了溶出介質(zhì)pH對(duì)微丸釋藥的影響。

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