陸 瀅（江蘇鹽城市第一人民醫(yī)院，江蘇鹽城 224001）

鹽酸普魯卡因是局部麻醉藥，主要用于浸潤(rùn)麻醉、阻滯麻醉、硬膜外麻醉及封閉療法等，該藥含量測(cè)定方法主要是永停滴定法（采用亞硝酸鈉滴定液滴定）[1]，但永停滴定法操作煩瑣且費(fèi)時(shí)，干擾因素較多。為此，筆者查閱文獻(xiàn)[2]并加以摸索，建立了高效液相色譜（HPLC）法測(cè)定其含量，該法操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確，可用于注射用鹽酸普魯卡因的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

Agilent 1200型HPLC測(cè)定儀，包括G1314B紫外檢測(cè)器、AgiLent色譜工作站（美國(guó)Agilent科技有限公司）；BP 211D型電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；TB224S型電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）。

鹽酸普魯卡因?qū)φ掌罚ㄖ袊?guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：100098-2007009）；注射用鹽酸普魯卡因（常州蘭陵制藥有限公司，批號(hào)：200910232、201001031、201005032、201007093、201009031）；甲醇、庚烷磺酸鈉均為色譜純（Fisher），其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Aglient C18柱（150 mm×4.6 mm，5μm）；流動(dòng)相：0.1%庚烷磺酸鈉的0.05 moL·L－1磷酸二氫甲溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0）-甲醇（70∶30）；流速：1.0 mL·min－1；檢測(cè)波長(zhǎng)：290 nm；進(jìn)樣量：10μL；柱溫：25℃。在該色譜條件下標(biāo)準(zhǔn)品、供試品色譜見(jiàn)圖1。理論板數(shù)以鹽酸普魯卡因峰計(jì)在2 000以上。

圖1 高效液相色譜圖A.對(duì)照品；B.供試品；C.陰性對(duì)照Fig 1 HPLC chromatogramsA.test sample；B.substance control；C.negative control

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 取鹽酸普魯卡因?qū)φ掌罚芊Q定100.03 mg，置于5 mL容量瓶中，加流動(dòng)相適量溶解，并加至刻度，搖勻。精密量取0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 mL，分別置于5 mL容量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 取注射用鹽酸普魯卡因5瓶，取其內(nèi)容物，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于鹽酸普魯卡因0.2 g），置于10 mL容量瓶中，加水適量振搖使主藥成分溶解，并加水至刻度，搖勻，濾過(guò)，即得。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液的制備 按處方量取缺普魯卡因的其他組分，按“2.2.2”下方法制備，即得。

2.3 線性關(guān)系考察

精密量取對(duì)照品0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 mL，分別置于5 mL容量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，搖勻。分別取10μL，注入HPLC儀測(cè)定。以鹽酸普魯卡因進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（c），峰面積積分值為縱坐標(biāo)（A），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得普利卡因的回歸方程c＝57.660 8A－45.950 9（r＝0.999 6）。結(jié)果表明，普魯卡因檢測(cè)濃度在2.0～160.0 mg·mL－1范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。

2.4 精密度試驗(yàn)

精密吸取同一對(duì)照品溶液適量，重復(fù)進(jìn)樣6次，按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。結(jié)果，RSD＝0.33%，表明該方法的精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密量取鹽酸普魯卡因?qū)φ掌啡芤哼m量，按樣品含量測(cè)定項(xiàng)下操作，隔3 h測(cè)1次，共測(cè)定5次，計(jì)算含量。結(jié)果，日內(nèi)RSD＝0.19%，說(shuō)明供試品在16 h內(nèi)穩(wěn)定。另取上述不同濃度的溶液適量，同法處理，3 d重復(fù)測(cè)定3次，計(jì)算含量。結(jié)果，日間RSD＝0.36%，說(shuō)明供試品在3 d內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取含量測(cè)定項(xiàng)下的供試品溶液（批號(hào)：201005032）適量，重復(fù)測(cè)定6次。結(jié)果，RSD＝0.39%，說(shuō)明重復(fù)性良好。

2.7 回收率試驗(yàn)

取陰性對(duì)照溶液適量（批號(hào)：200910232、201001031、201005032），精密測(cè)定，按照相當(dāng)于樣品含量80%、100%、120%加入對(duì)照品，照“2.1”項(xiàng)下方法操作，記算回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果Tab 1 Results of recovery tests

2.8 樣品含量測(cè)定

分別取供試品溶液和對(duì)照品溶液各10μL，注入HPLC儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，結(jié)果詳見(jiàn)表2。

表2 永停測(cè)定法和HPLC法檢測(cè)結(jié)果比較（n＝5）Tab 2 Comparison of results between the permanent stop determination of test sample and HPLC（n＝5）

由表2可見(jiàn)，二者無(wú)顯著性差異（P＞0.05），表明本法可作為注射用鹽酸普魯卡因的質(zhì)量控制方法。

3 討論

筆者選擇參考文獻(xiàn)[2]介紹的290 nm波長(zhǎng)測(cè)定，結(jié)果有較好的線性且無(wú)干擾，故選用290 nm波長(zhǎng)作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

流動(dòng)相首先選用甲醇-水，結(jié)果分離效果不好。在進(jìn)行多次試驗(yàn)后，選用以含0.1%庚烷磺酸鈉的0.05 mol·L－1磷酸二氫甲溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0）-甲醇（70∶30）作為流動(dòng)相，取得了較好的峰形、分離度。

綜上所述，采用HPLC測(cè)定注射用鹽酸普魯卡因的含量，方法操作簡(jiǎn)便、靈敏、結(jié)果準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于注射用鹽酸普魯卡因的質(zhì)量控制。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（二部）[S].2010年版.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：794.

[2]魏世超，汪秋蘭，張 南，等.高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定鹽酸普魯卡因注射液中鹽酸普魯卡因含量及對(duì)氨基苯甲酸限量[J].藥物分析雜志，2007，27（8）：1 249.

[3]黃玲霄.高效液相色譜法測(cè)定胃炎干糖漿中鹽酸普魯卡因的含量[J].中國(guó)藥業(yè)，2003，12（9）：42.

[4]劉曉玲，單 敏，呼延玲.復(fù)方益康寧膠囊中鹽酸普魯卡因和維生素B6的含量測(cè)定[J].中國(guó)藥業(yè)，2004，13（6）：44.