閆雪生，李 巖

(山東省中醫(yī)藥研究院，山東 濟(jì)南 250014)

復(fù)方景天膠囊是我院研制的非標(biāo)制劑，主要由紅景天、人參、菊花、五味子組方，具有滋補(bǔ)強(qiáng)壯、扶正固本功能。為控制膠囊質(zhì)量，筆者以方中主藥紅景天的主要成分紅景天苷為指標(biāo)，參考有關(guān)文獻(xiàn)[1－2]，用高效液相色譜(HPLC)法測(cè)定復(fù)方景天膠囊中紅景天苷含量，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀(美國(guó)Waters公司)，包括Waters 600 Controller，WatersTM600 Pump，Waters996 PhotodiodeArrayDetector;超純水(Millipore公司純水器);所用甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純;紅景天苷對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，供含量測(cè)定用，批號(hào)為110818－200404);復(fù)方景天膠囊(自制)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:lichrospher C18柱江蘇漢邦科技有限公司(250 mm×4.6 mm，5 μm);用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;流動(dòng)相:甲醇－水(12∶88);檢測(cè)波長(zhǎng):275 nm。理論板數(shù)按紅景天苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2 000。

2.2 溶液制備

取本品內(nèi)容物0.2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，準(zhǔn)確加入甲醇10 mL，稱定質(zhì)量，超聲提取30 min，稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液用微孔濾膜濾過，作為供試品溶液。精密稱取紅景天苷對(duì)照品4.60 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，取5 mL稀釋至10 mL，配制成每1 mL含紅景天苷0.23 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。取缺紅景天的陰性樣品，參照供試品溶液的制備方法，制得缺紅景天的陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

陰性干擾試驗(yàn):分別精密吸取2.2項(xiàng)下3種溶液各10 μL，注入液相色譜儀。結(jié)果供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上有色譜峰，陰性對(duì)照品溶液色譜中則無此峰，表明在該測(cè)定條件下，陰性樣品不干擾紅景天苷的測(cè)定，見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察:精密吸取對(duì)照品溶液(0.46 g/L)，分別稀釋成含紅景天苷 0.092，0.184，0.276，0.368，0.460 g/L 的溶液，各吸取10 μL，注入高效液相色譜儀，測(cè)定峰面積積分值。以峰面積積分值為縱坐標(biāo)、進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 Y=260 488 X+14 428，r=0.999 9(n=5)。結(jié)果表明，紅景天苷進(jìn)樣量在0.92～4.6μg范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn):精密吸取同一對(duì)照品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰面積積分值。結(jié)果的 RSD為0.89%(n=5)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):精密吸取同一供試品溶液，于 0，2，4，8，24 h時(shí)進(jìn)樣，記錄每次進(jìn)樣的峰面積。結(jié)果的 RSD為0.99%(n=5)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

重現(xiàn)性試驗(yàn):取同一批樣品5份，按擬訂的方法測(cè)定。結(jié)果每粒膠囊平均含紅景天苷 4.214 mg，RSD 為 0.99%(n=5)，表明方法重現(xiàn)性良好。

加樣回收試驗(yàn):取已知含量的同批樣品6份，每份約0.1g，精密稱定，分別加入紅景天苷對(duì)照品，按供試品溶液制備方法制備溶液并測(cè)定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 紅景天苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測(cè)定

分別精密吸取3批供試品溶液，各10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定各批樣品中紅景天苷的含量，結(jié)果見表2。根據(jù)所用紅景天原料中紅景天苷平均含量為0.953%，結(jié)合藥典規(guī)定紅景天苷含量應(yīng)不低于0.50%計(jì)算，暫訂本品每粒含紅景天以紅景天苷(C14H20O7)計(jì)，不得少于 3.0 mg。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

復(fù)方景天膠囊為中藥復(fù)方制劑，成分復(fù)雜，本試驗(yàn)以紅景天苷作為含量測(cè)定指標(biāo)。紅景天苷的光譜掃描顯示在223 nm波長(zhǎng)處有最大吸收峰，在275 nm波長(zhǎng)處有弱吸收峰，文獻(xiàn)[1－4]中這2個(gè)波長(zhǎng)均作為紅景天苷的測(cè)定波長(zhǎng)。本次試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，紅景天苷在223 nm波長(zhǎng)處測(cè)定易受其他成分干擾;在275 nm波長(zhǎng)處測(cè)定，紅景天苷色譜峰分離好，無干擾。試驗(yàn)中還比較了多種比例的流動(dòng)相，結(jié)果以甲醇－水(12∶88)為優(yōu)，峰的分離效果好，基線平穩(wěn)。采用高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方景天膠囊中紅景天苷含量，簡(jiǎn)便易行，結(jié)果重現(xiàn)性好，可用于復(fù)方景天膠囊的質(zhì)量控制。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:附錄33.

[2]宋興發(fā)，尚 強(qiáng)，高 山.紅景天養(yǎng)生片中紅景天苷的含量測(cè)定[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2009，28(12):1 629－1 630.

[3]WS－10926(ZD－0926)－2002，國(guó)家中成藥標(biāo)準(zhǔn)匯編·中成藥地方標(biāo)準(zhǔn)上升為國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)部分(內(nèi)科氣血津液分冊(cè))[S].

[4]WS3－000(Z－080)－2002(Z)，國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)·新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)(第36冊(cè))[S].