(遼寧醫(yī)學院附屬第一醫(yī)院，遼寧錦州 121001)

腎臟是高血壓病的重要靶器官之一，目前研究表明高血壓與動脈粥樣硬化共同導致炎癥的病理生理過程是高血壓腎損害的主要原因［1］。他汀類藥物具有肯定的降脂作用，還原型谷胱甘肽具有明顯的抗炎作用，而其對高血壓腎損害的治療作用尚無報道［2，3］。1990年9月 ～ 2012年4月，本研究采用阿伐他汀聯(lián)合還原型谷胱甘肽干預自發(fā)性高血壓(SHR)大鼠，觀察其對大鼠腎損害的治療效果并探討其機制?，F(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及試劑 SPF級8周齡SHR雄性大鼠32只，體質(zhì)量 250～300 g，8只 Wistar-Kyoto(WKY)大鼠作為對照組，體質(zhì)量250～300 g，均由遼寧醫(yī)學院實驗動物中心贈予。Trizol試劑購自Sigma-Aldich公司;Trizol試劑、RT-PCR試劑盒、Marker等均購自TaKaRa公司，抗體購自美國Santa Cruz公司;過氧化物酶增殖物激活受體γ(PPARγ)引物正鏈5'-GAGATGCCATTCTGCCCCACCAACTTCGG-3'，負 鏈 5'-TATCATAAATAAGCTTCAATCGGATGGTTC-3';轉化生長因子(TGF)-β1引物正鏈5'-TGGCGTTACCTTGGTAACC-3'，負鏈 5'-GGTGTTGAGCCCTTTCCAG-3'，由TaKaRa公司設計。超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒、丙二醛(MDA)試劑盒購于南京建成生物工程研究所;PCR擴增儀購自德國Biometra公司;GIS凝膠圖像分析系統(tǒng)(上海天能科技有限公司);酶標儀Spectra Max190(美國Molecular Devices公司);分光光度計UV-1700(日本Shimadzu公司)。其他試劑為國產(chǎn)分析純。

1.2 實驗動物分組及處理 將32只SHR大鼠隨機分為聯(lián)合組、阿伐他汀組、谷胱甘肽組、模型組，各8只，以8只同周齡的WKY大鼠為對照組。將兩種藥物溶于蒸餾水中灌胃給藥，阿伐他汀組、谷胱甘肽組分別給予阿伐他汀20 mg/mL、還原型谷胱甘肽200 mg/(kg·d)灌胃，聯(lián)合組兩藥合用。模型組及對照組大鼠每日按10 mL/kg蒸餾水灌胃，于給藥6周后腹腔注射40 mg/kg戊巴比妥鈉麻醉，頸椎脫臼處死，取出腎臟組織液氮速凍后－80℃保存。

1.3 大鼠腎臟組織中SOD、MDA的檢測 各組取大鼠凍存腎臟組織約100 mg，采用黃嘌呤氧化酶法測定SOD，用分光光度計測550 nm處的吸光度;采用硫代巴比妥酸法測定MDA，用分光光度計測532 nm處吸光度。

1.4 大鼠腎臟組織中 PPARγ、TGF-β1 mRNA的檢測 采用RT-PCR法。取各組大鼠凍存腎臟組織約100 mg，按Trizol試劑使用說明提取總 RNA。PCR反應條件為:95℃預變性10 min，94℃變性1 min，60℃退火1 min，72℃延伸2 min，30個循環(huán)之后，72℃延伸8 min。PCR產(chǎn)物在瓊脂糖凝膠中電泳分離，紫外分析儀觀察后攝片。Lab Works軟件進行凝膠成像分析，測定陽性電泳條帶的平均灰度值，計算各樣本目的基因與β-actin電泳條帶的平均灰度值比，作為其相對表達量。

1.5 統(tǒng)計學方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計學軟件。計量資料以±s表示，組間比較采用t檢驗，多組比較采用單因素方差分析。P≤0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 各組大鼠腎臟SOD活性、MDA水平比較 見表1。與模型組相比，聯(lián)合組、阿伐他汀組及谷胱甘肽組MDA水平明顯減少、聯(lián)合組最低(P均＜0.05)。與模型組相比，聯(lián)合組、阿伐他汀組及谷胱甘肽組SOD活性明顯升高、聯(lián)合組最高(P均＜0.05)。

表1 各組大鼠腎臟SOD活性、MDA水平比較(±s)

表1 各組大鼠腎臟SOD活性、MDA水平比較(±s)

注:與模型組相比，*P ＜0.05;與聯(lián)合組相比，▲P ＜0.05

組別 MDA(nmol/mg) SOD(U/mg)聯(lián)合組 9.337 ±0.254* 292.561 ±15.063*阿伐他汀組 13.824±0.457＊▲ 264.259± 9.226＊▲谷胱甘肽組 14.296±0.394＊▲ 271.167±10.851＊▲模型組 21.876 ±0.597 193.110 ± 7.545對照組 15.130 ±0.210* 299.910 ±14.582*

2.2 各組腎臟組織中PPARγ、TGF-β1 mRNA表達比較 見表2、圖1。模型組PPARγ mRNA表達量接近對照組，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。與模型組相比，聯(lián)合組PPARγ mRNA表達量上調(diào)(P均＜0.05)，阿伐他汀組與谷胱甘肽組相近(P＞0.05)。模型組TGF-β1 mRNA表達量明顯高于對照組(P＜0.05)，聯(lián)合組 TGF-β1 mRNA 表達量低于對照組外的各組(P均＜0.05)。

表2 各組腎臟組織中PPARγ、TGF-β1 mRNA相對表達量比較(±s)

表2 各組腎臟組織中PPARγ、TGF-β1 mRNA相對表達量比較(±s)

注:與聯(lián)合組相比，▲P ＜0.05;與對照組相比，*P ＜0.05

組別 PPARγ mRNA TGF-β1 mRNA聯(lián)合組0.95 ±0.22 0.29 ±0.11阿伐他汀組 0.63±0.19＊▲ 0.51±0.16＊▲谷胱甘肽組 0.57±0.20＊▲ 0.60±0.20＊▲模型組 0.31±0.17▲ 0.86±0.29＊▲對照組 0.28±0.14▲ 0.09±0.01▲

圖1 各組腎臟組織中PPARγ、TGF-β1 mRNA的相對表達量

3 討論

高血壓對腎臟的損害主要是由動脈粥樣硬化引起的腎小球及腎小管病理改變，表現(xiàn)為尿微量白蛋白、血肌酐及尿素氮水平升高，進一步發(fā)展為尿毒癥［4］。還原型谷胱甘肽是重要的小分子抗氧化和自由基清除劑，它可提供活性巰基，中和氧自由基，避免ROS和氧自由基產(chǎn)生過氧化脂質(zhì)，減輕自由基對腎臟組織的損害。阿伐他汀目前被用為降脂藥物，具有調(diào)脂及抗炎作用［5］。

炎癥是高血壓和動脈硬化共同的病理生理機制，其中TGF-β1是與動脈粥樣硬化發(fā)生、發(fā)展有關的促炎因子［6］。TGF-β1可刺激單核巨噬細胞、成纖維細胞和腎血管上皮合成膠原及蛋白多糖，促進纖溶酶原激活物因子和金屬蛋白酶組織抑制因子的表達，促進整合素表達進而增強細胞質(zhì)相互作用，導致腎小球和腎小管細胞外基質(zhì)進行性沉積［7］。TGF-β1可反映高血壓腎病的嚴重程度，可作為其疾病進展標記物［8］。研究表明，PPARγ可在炎癥反應中起到重要的保護作用。PPARγ能與氧化配體結合，減少細胞內(nèi)反應性氧化產(chǎn)物產(chǎn)生［9］。

多項研究發(fā)現(xiàn)，SOD屬于機體內(nèi)對抗自由基的酶促體系，生理狀態(tài)下SOD可有效清除超氧自由基的內(nèi)源性金屬離子，通過其他抗氧化物質(zhì)的協(xié)同作用，保護細胞膜和大分子不受氧自由基的攻擊［10］。SOD活性間接反映運動中自由基的平衡狀態(tài)與體內(nèi)的物質(zhì)代謝情況。而MDA是機體脂質(zhì)過氧化反應中的代謝產(chǎn)物之一，其水平可反映機體脂質(zhì)過氧化程度，間接反映細胞的損傷情況［11，12］。

他汀類藥物的降脂作用早已在大量的實驗研究和臨床實踐中得到了公認，而且不斷有學者發(fā)現(xiàn)他汀類藥物還有很多獨立于其降脂作用的效果，即“他汀類藥物的多效性”，包括改善內(nèi)皮功能、穩(wěn)定動脈硬化斑塊、抑制細胞遷移和增生、減輕炎癥和氧化應激等作用［13，14］。還原型谷胱甘肽可抑制炎癥細胞因子如DTNF、IL-6、IL-8、巨噬細胞炎癥蛋白(MIP)-2、單核細胞趨化蛋白(MCP)-1的產(chǎn)生與合成;不但能有效地控制氧化應激狀態(tài)，還能通過抑制多種炎癥因子的活化產(chǎn)生抗炎效應;還原型谷胱甘肽及其前體還可作為自由基清除劑，減少TNF-α介導的細胞過氧化損傷，減輕對內(nèi)皮細胞通透性損害［15，16］。

本研究結果顯示，與模型組相比，聯(lián)合組、阿伐他汀組及谷胱甘肽組大鼠腎臟組織SOD活性明顯升高，且聯(lián)合組明顯高于兩個單藥組;聯(lián)合組、阿伐他汀組及谷胱甘肽組MDA水平低于模型組，且聯(lián)合組明顯低于兩個單藥組;聯(lián)合組腎臟組織中PPARγ mRNA 的表達量高于、TGF-β1 mRNA 表達量低于兩個單藥組及模型組，說明阿伐他汀聯(lián)合還原型谷胱甘肽干預治療能夠有效抑制高血壓對SHR大鼠腎臟的損害作用，較單獨用藥效果顯著，這可能是通過上調(diào)PPARγ mRNA表達、下調(diào)TGF-β1 mRNA表達來實現(xiàn)的。

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