杜申道 孫雙姣 黃增妍 鄺思群

邵陽醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，湖南 邵陽 422000

頭孢他啶（CAZ）是第三代頭孢菌素，與第一、二代頭孢菌素相比，其抗菌譜進(jìn)一步擴(kuò)大，對(duì)β-內(nèi)酰胺酶高度穩(wěn)定。對(duì)革蘭陰性菌的作用較強(qiáng)，對(duì)大腸埃希菌、腸桿菌屬、克雷伯桿菌、奇異變形桿菌、普通變形桿菌、流感嗜血桿菌腦膜炎球菌等有良好的抗菌效果。高效液相色譜法[1-3]是現(xiàn)已報(bào)道的測(cè)定CAZ含量的主要方法，其次有流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光法[4]、毛細(xì)管區(qū)帶電泳法[5]、單掃描示波極譜法[6]、熒光光度法[7-8]、紫外可見分光光度法[9-11]，但這些方法往往存在儀器昂貴、操作繁瑣、時(shí)問長(zhǎng)等不足。本實(shí)驗(yàn)利用KMnO4氧化CAZ而褪色，建立了高錳酸鉀褪色分光光度法測(cè)定針劑中CAZ含量的新方法。該方法采用普通的可見分光光度計(jì)，簡(jiǎn)單的常規(guī)試劑，操作簡(jiǎn)單方便，精密度好，準(zhǔn)確度高，在針劑CAZ的定量測(cè)定中，效果較好。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

日本島津UV-2450紫外可見分光光度計(jì)。CAZ標(biāo)準(zhǔn)品購自于中國藥品生物制品檢定所，儲(chǔ)備液為500 mg/L；濃H2SO4購自邵陽市化學(xué)試劑廠，工作液為6 mol/L；KMnO4購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑公司，儲(chǔ)備液為0.02 mol/L，工作液為0.001 0 mol/L，實(shí)驗(yàn)所用試劑均為分析純，水為二次蒸餾水。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

在比色管中分別加入1.20 mL H2SO4工作液，1.20 L KMnO4工作液、適量CAZ標(biāo)準(zhǔn)液后用二次蒸餾水定容至5 mL，搖勻。反應(yīng)溫度為室溫，反應(yīng)時(shí)間為15 min。取反應(yīng)后適量溶液至1 cm比色皿中，空白試劑為二次蒸餾水，于分光光度計(jì)上波長(zhǎng)掃描得吸收光譜，吸光度（A）測(cè)定波長(zhǎng)為525 nm。

2 結(jié)果

2.1 工作曲線和檢出限

分別取不同濃度的CAZ標(biāo)準(zhǔn)液，在試驗(yàn)得出的最佳條件下，按照“1.2”項(xiàng)下實(shí)驗(yàn)方法以CAZ濃度ρ與其525 nm處對(duì)應(yīng)的吸光度（△A525）作圖。 在 0.80～40.00 μg/mL 范圍內(nèi)，CAZ濃度與△A525之間具有較好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r為0.998 7，回歸方程為△A525=0.01ρ+0.051 4，檢出限為 0.64 μg/mL。

2.2 樣品分析

在分析天平上稱取3個(gè)不同廠家CAZ針劑各0.200 0 g，溶解后，轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶并定容搖勻。樣品溶液不用時(shí)須置冰箱中4℃保存。使用時(shí)準(zhǔn)確移取1.00 mL至25 mL容量瓶，定容至刻度后搖勻，再準(zhǔn)確移取1.00 mL稀釋溶液按照“1.2”項(xiàng)下實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定回收率，測(cè)定結(jié)果見表1。

表1 樣品回收率的測(cè)定（n=5）

2.3 吸收光譜的選擇

按照“1.2”項(xiàng)下實(shí)驗(yàn)方法，對(duì)體系在400～700 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，即得體系吸收光譜（圖1）。KMnO4溶液本身呈紫紅色，有兩個(gè)較強(qiáng)吸收峰位于545、525 nm處。當(dāng)CAZ加入后，CAZ與KMnO4發(fā)生氧化還原反應(yīng)而使紫紅色變淡，400～700 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)的吸光度均降低。由于最強(qiáng)吸收峰位于525 nm處，且△A525變化最大，所以本實(shí)驗(yàn)測(cè)定波長(zhǎng)選定為525 nm。

圖1 各體系吸收光譜

2.4 酸的選擇及用量影響

HNO3是氧化性酸，HCl是還原性酸，酸性KMnO4本身具有強(qiáng)氧化性，CAZ具有還原性，在該體系中，硝酸或鹽酸的加入必然導(dǎo)致副反應(yīng)的發(fā)生，故本實(shí)驗(yàn)調(diào)節(jié)酸度選擇H2SO4，H2SO4用量的影響見圖2。當(dāng)H2SO4的用量為1.2 mL，濃度為1.44 mol/L時(shí)體系△A525最大且較穩(wěn)定。故本實(shí)驗(yàn)選擇最佳濃度為1.44 mol/L。

圖2 硫酸用量的影響曲線

2.5 高錳酸鉀用量的影響

KMnO4用量的影響見圖 3。CAZ 沒加入時(shí)（圖 3a），A525隨KMnO4濃度的增加而增強(qiáng)。加入CAZ 5.00 μg/mL后（圖3b），A525相對(duì)降低，但也隨著KMnO4濃度的增加而增強(qiáng)，當(dāng)KMnO4溶液使用體積為1.2 mL，對(duì)應(yīng)濃度為0.24 nmol/L時(shí)，△A525達(dá)到最大值，本實(shí)驗(yàn)KMnO4濃度選擇為0.24 nmol/L。

2.6 體系的穩(wěn)定性

當(dāng) CAZ的濃度分別為 2.00、5.00、10.00 μg/mL時(shí)， 反應(yīng)時(shí)間對(duì)A525的影響實(shí)驗(yàn)表明，在室溫時(shí)，反應(yīng)進(jìn)行較快，12 min后反應(yīng)完全且A525比較穩(wěn)定，在60 min內(nèi)A525無明顯變化。本實(shí)驗(yàn)選擇在室溫下反應(yīng)15 min。

2.7 體系的抗干擾性

當(dāng) CAZ濃度為 10.00 μg/mL時(shí)，按照“1.2”項(xiàng)下實(shí)驗(yàn)方法，考察了共存物質(zhì)對(duì)CAZ測(cè)定的影響。當(dāng)相對(duì)誤差在±5.0%之間，可允許 6.00 mg/mL 的 Zn2+、Cl-、Na+、NO3-、K+、果糖、Ca2+和Mg2+的存在，4.00 mg/mL的NO3-和1.00 mg/mL的葡萄糖、酒石酸、檸檬酸、尿素存在；以F-做掩蔽劑，可允許0.40 mg/mL的Fe3+存在，故該法抗干擾性較好。

3 討論

高錳酸鉀是氧化還原滴定分析中測(cè)定還原性物質(zhì)的常用標(biāo)準(zhǔn)溶液，由于本身為紫紅色溶液，在滴定分析中不需另加指示劑。本實(shí)驗(yàn)以高錳酸鉀為顯色劑，通過其氧化具有還原性的頭孢他啶導(dǎo)致顏色褪色，對(duì)CAZ測(cè)定建立了新的分光光度法，該方法所用儀器為簡(jiǎn)單分光光度計(jì)，試劑種類少，操作快、簡(jiǎn)便且迅速，通過對(duì)3個(gè)不同廠家的樣品進(jìn)行測(cè)定并測(cè)定了試驗(yàn)回收率，RSD為0.44%～0.90%，回收率為97.70%～100.70%，實(shí)驗(yàn)方法可靠，結(jié)果滿意，適合于醫(yī)院制劑質(zhì)量控制。

[1]國家藥典委員會(huì).中國藥典[S].二部.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：144.

[2]彭軍，任耘，孫悅.高效液相色譜法測(cè)定頭孢他啶注射劑的含量[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2001，21（10）：600-602.

[3]艾又生，徐楚鴻，陳華庭，等.高效液相色譜法測(cè)定血清中頭孢他啶的濃度[J].華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2004，33（4）：512-514.

[4]王玨，屈建瑩，朱莉莉，等.流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光法測(cè)定頭孢他啶[J].分析測(cè)試學(xué)報(bào)，2011，30（1）：91-94.

[5]李捷偉，柴逸峰，劉長(zhǎng)海，等.毛細(xì)管區(qū)帶電泳法測(cè)定頭孢他啶粉針劑的含量[J].西北藥學(xué)雜志，2002，17（3）：99-100.

[6]李艷霞，王運(yùn)生，劉波.單掃描示波極譜法測(cè)定針劑中頭孢他啶含量[J].理化檢驗(yàn)：化學(xué)分冊(cè)，2009，45（1）：21-24.

[7]王崇妍，李永強(qiáng)，張遠(yuǎn)馥，等.熒光分光光度法測(cè)定注射用頭孢他啶的含量[J].河南大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2006，25（4）：48-50.

[8]梁彥秋，臧樹良，趙雪.頭孢他啶與牛血清白蛋白（BSA）的相互作用[J].光譜實(shí)驗(yàn)室，2009，26（6）：1638-1642.

[9]房婷婷，沙鷗.Fe2+-鄰菲羅啉分光光度法測(cè)定針劑中頭孢他啶[J].光譜實(shí)驗(yàn)室，2010，27（2）：630-632.

[10]沙鷗，孫梅，顧葉華，等.Fe2+-2，2′-聯(lián)吡啶分光光度法測(cè)定針劑中頭孢他啶含量[J].淮海工學(xué)院學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2010，19（4）：37-39.

[11]沙鷗，房婷婷.Fe（Ⅲ）-磺基水楊酸分光光度法測(cè)定針劑中頭孢他啶含量[J].分析化學(xué)，2009，37（1）：215.