王 鄭

重慶市開縣人民醫(yī)院外二科，重慶 405400

原發(fā)性肝癌作為一種惡性腫瘤，單純的肝切除手術(shù)治療不能達到滿意的效果。肝癌的發(fā)生、發(fā)展與機體免疫密切相關(guān)[1]。隨著免疫分子和細胞生物學(xué)的發(fā)展，樹突狀細胞（DC）與細胞因子誘導(dǎo)的殺傷細胞（CIK）聯(lián)合介導(dǎo)的過繼免疫細胞治療成為手術(shù)治療、化療、放療等的重要輔助手段[2-3]。原發(fā)性肝癌的治療手段由單純手術(shù)治療逐漸向多手段聯(lián)合治療發(fā)展，成為原發(fā)性肝癌治療發(fā)展的新方向。但目前對DC-CIK細胞治療聯(lián)合手術(shù)治療的臨床研究資料較少，其效果及可靠性尚待進一步研究。本文總結(jié)我院DC-CIK細胞治療聯(lián)合手術(shù)治療的原發(fā)性肝癌患者資料，探討DC-CIK細胞治療聯(lián)合手術(shù)治療原發(fā)性肝癌的可行性及適應(yīng)證。

1 資料與方法

1.1 一般資料

實驗組為2007年1月～2009年2月在我院住院治療的原發(fā)性肝癌患者76例，其中，男58例，女18例；平均年齡（48.9±14.7）歲；46例合并乙型肝炎后肝硬化，7例合并門靜脈高壓；根據(jù)肝功能Child-pugh標(biāo)準(zhǔn)分級，患者全部為Child-A 級；甲胎蛋白（AFP）<5 μg/mL 者 4例，AFP<400 μg/mL者39例；AFP≥400 μg/mL者 33例。所有患者或法定代理人知情并簽署《知情同意書》，通過醫(yī)院倫理委員會同意后接受DC-CIK細胞回輸治療。對照組為往年經(jīng)我院單純手術(shù)治療的原發(fā)性肝癌患者76例，其中，男60例，女16例；平均年齡（49.8±15.3）歲；48例合并乙型肝炎后肝硬化，5例合并門靜脈高壓；全部為Child-A級患者；AFP<5 μg/mL者5例，AFP<400 μg/mL 者 39例；AFP ≥ 400 μg/mL 者 32例。 對照組與實驗組嚴格按病情、年齡進行1∶1匹配，年齡相差2歲為宜，兩組不同病情所占相應(yīng)比例差異無統(tǒng)計學(xué)意義 （P>0.05），兩組具有可比性。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)

①肝內(nèi)多發(fā)腫瘤病灶≤3個；②主病灶≥5 cm，子病灶≤3 cm且與主病灶分屬不同肝段；③無門靜脈主干、下腔靜脈、肝靜脈、肝靜脈癌栓，排除肝外轉(zhuǎn)移。腫瘤的數(shù)目與位置通過B超和MRI共同定位。

1.3 方法

1.3.1 實驗組與對照組治療方法 實驗組患者采用聯(lián)合手術(shù)治療和自體DC-CIK細胞回輸方法治療，對照組只接受單純手術(shù)治療。

1.3.2 手術(shù)方法 患者病灶均進行右上腹“┙”形切口，按照肝癌切除“左規(guī)右不規(guī)”原則對主病灶先行切除，然后縫扎創(chuàng)面并止血。術(shù)后第3、7、14天定期復(fù)查肝功能、AFP，如發(fā)現(xiàn)并發(fā)癥及時對癥處理。術(shù)后每個月定期復(fù)查CT、肝功能和AFP，判斷患者與腫瘤的發(fā)展及轉(zhuǎn)歸情況，根據(jù)實際情況行肝動脈栓塞化療或其他補充治療。

1.3.3 自體DC-CIK細胞制備方法 DC細胞：采用血細胞分離機分離患者外周血單個核細胞，體積為0.3倍血容量。采用Ficoll淋巴細胞分離液從單個核細胞分離淋巴細胞，用培養(yǎng)液洗滌2次，BIN無血清培養(yǎng)基混懸于培養(yǎng)瓶中，置37℃5%CO2孵育箱中，2 h后將懸浮細胞移出，加入IL-4（500 U/L）、GM-CSF（1 000 U/mL）繼續(xù)培養(yǎng)，2～3 d換液 1次，第 6 天加入TNF-α（500 U/mL）。CIK細胞培養(yǎng)：分離后加入重組人IFN-γ（1 000 U/mL）和10%AB 型人血清的 RPMI 1640培養(yǎng)液，24 h后更換成含100 ng/mL小鼠抗人CD3單克隆抗體、1 000 U/mL IL-1和IL-2的RPMI 1640完全培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，2 d后換含IL-2的完全培養(yǎng)液隔日換液維持培養(yǎng)。DCCIK細胞培養(yǎng)：采集第7天的DC和CIK細胞，按1∶5混合培養(yǎng)，3 d 后開始應(yīng)用?？刂茦?biāo)準(zhǔn)：CD3+、CD56+、NKT≥50%，CD3+CD8+≥30%，細胞存活率≥95%，不含細菌和內(nèi)毒素。

1.3.4 DC-CIK細胞回輸方法 靜脈輸注DC-CIK細胞5×109/L，4次為1個療程，每例患者至少治療3個療程，最多治療8個療程。

1.4 療效評價

療效評價按照RECIST實體瘤近期療效評價標(biāo)準(zhǔn)進行，分為完全緩解（CR）、部分緩解（PR）、疾病穩(wěn)定（SD）和疾病進展（PD）。總有效=CR+PR+SD。同時隨訪觀察3年生存率。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 18.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 患者一般恢復(fù)情況比較

治療前，實驗組與對照組各方面差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。治療后，實驗組各方面恢復(fù)情況均優(yōu)于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。兩組患者一般情況均較治療前好轉(zhuǎn)，精神狀態(tài)、食欲、睡眠及生活質(zhì)量均有所提高，疼痛減輕患者增多，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

表1 兩組患者治療前后一般恢復(fù)情況比較[n（%）]

2.2 兩組臨床療效比較

實驗組療效評定：CR 0例，PR 43例，SD 22例，PD 11例，治療總有效率為85.5%；對照組療效評定：CR 0例，PR 24例，SD 7例，PD 39例，治療總有效率為40.8%。實驗組總有效率較對照組高，差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。見表2。

表2 兩組臨床療效比較（例）

2.3 兩組3年生存率比較

實驗組經(jīng)過手術(shù)治療聯(lián)合自體DC-CIK細胞回輸后，每隔6個月進行隨訪，生存36個月以上者7例，生存25～36個月者11例，生存13～24個月者19例，生存6～12個月者34例，少于6個月者5例（主要是肝硬化伴腹水病例），3年生存率為9.2%。對照組生存36個月以上者3例，生存25～36個月者3例，生存13～24個月者13例，生存6～12個月者26例，少于6個月者30例，3年生存率為3.9%。兩組比較，差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。見表3。

表3 兩組3年生存率比較[n（%）]

2.4 不良反應(yīng)情況

兩組均未見有明顯心、肝、腎等毒副作用。

3 討論

隨著社會經(jīng)濟水平的飛速發(fā)展，人們生活壓力加大，環(huán)境、飲食也不斷受到污染，種種原因?qū)е掳┌Y的發(fā)病率不斷升高，其中，原發(fā)性肝癌是一種常見的惡性腫瘤，其發(fā)生率逐年上升，成為嚴重危害人類身心健康的惡性疾病。我國是肝癌的高發(fā)國家之一，其對我國社會經(jīng)濟等造成的損失較為嚴重，已成為嚴重影響我國公民生命的危險之一[4]。由于原發(fā)性肝癌發(fā)病非常隱匿，發(fā)病初期患者無任何不適感并且極易忽視相關(guān)癥狀，當(dāng)患者察覺機體出現(xiàn)病癥和不適感時，大都進入晚期，此時再進行手術(shù)治療已經(jīng)無法阻止疾病的發(fā)展。手術(shù)時機是手術(shù)治療該病的關(guān)鍵。隨著現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，肝動脈栓塞化療、放療等新方法不斷產(chǎn)生，但尚無一種有效的治療方法，手術(shù)治療仍然是主導(dǎo)方法[5-6]，其他方法也僅僅作為輔助方法進行治療。

免疫分子和細胞生物學(xué)的發(fā)展越來越趨于成熟，DCCIK細胞介導(dǎo)的過繼免疫細胞治療成為手術(shù)治療、化療、放療等方法的重要輔助手段[7]。免疫細胞的回輸對術(shù)后肝癌患者的恢復(fù)起到明顯的促進作用，筆者研究發(fā)現(xiàn)，手術(shù)治療聯(lián)合DC-CIK細胞回輸后，患者的精神狀態(tài)、睡眠質(zhì)量，生活質(zhì)量等均有明顯提升，肝區(qū)疼痛率明顯降低。手術(shù)治療與腫瘤細胞免疫治療的聯(lián)合治療越來越受到重視。本研究發(fā)現(xiàn)，手術(shù)治療聯(lián)合自體DC-CIK細胞回輸治療，除了可以明顯提高患者的生活質(zhì)量外，而且對機體的心、肝、腎等組織基本無毒副作用，可以作為手術(shù)的輔助手段進行治療。經(jīng)RECIST實體瘤近期療效評價標(biāo)準(zhǔn)進行評定的結(jié)果顯示，手術(shù)治療與腫瘤細胞免疫治療的聯(lián)合治療可以明顯提高手術(shù)患者治療效果，緩解病情的效果較好，能有效使病情趨于穩(wěn)定，與單純進行手術(shù)治療相比，總體治療有效率明顯提高，分析可能與免疫細胞的增強可以通過分泌一些細胞因子發(fā)揮重要作用有關(guān)[8]。經(jīng)過3年的隨訪和對對照組患者資料的回顧，發(fā)現(xiàn)患者術(shù)后經(jīng)過DC-CIK細胞回輸治療可以使病情穩(wěn)定，生存率明顯提高，特別是1年以上生存率提高最明顯，說明手術(shù)聯(lián)合自體DC-CIK細胞回輸治療可以大大提高患者生存率，治療效果較單純手術(shù)治療好。可能機制為 CIK在體內(nèi)可以黏附并穿過內(nèi)皮細胞準(zhǔn)確定位到血管外的腫瘤組織，進而殺傷腫瘤細胞，改造機體的內(nèi)免疫環(huán)境，在DC細胞的存在下體液免疫也被活化進而可以起到協(xié)同作用[9-10]，從而起到促進康復(fù)、遏制腫瘤的作用。

隨著人們對生命質(zhì)量的重視，疾病治療勢必向高效、無毒副作用的方向發(fā)展，單純的手術(shù)治療已經(jīng)不能滿足患者的需求，但目前尚無方法代替手術(shù)治療，因此，積極尋求術(shù)后有效的輔助治療方法勢在必行。筆者對該方面進行了研究，以期尋找較好較可靠的輔助治療手段。經(jīng)過筆者的臨床研究證實，手術(shù)治療聯(lián)合自體DC-CIK細胞回輸療法對原發(fā)性肝癌的療效值得肯定，治療有效率和生存率均有較大提高，但尚有不足之處，有待進一步完善。

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