姜繼軍

江蘇省泰州市人民醫(yī)院感染科，江蘇 泰州 225300

糖尿病和結(jié)核病均屬臨床的常見病和多發(fā)病，近年隨著人們生活水平的提高，糖尿病的發(fā)生率增加，由于糖尿病的存在及糖尿病病程的加重，使結(jié)核惡化或使已治愈的結(jié)核復(fù)發(fā)[1-2]。結(jié)核患者常發(fā)生胸腔積液，胸腔積液是常見的臨床體征，是指液體不正常地積聚在胸膜腔內(nèi)，常壓迫周圍肺組織，影響患者的呼吸功能。糖尿病合并結(jié)核性胸腔積液時常互相影響，使血糖控制及胸腔積液的吸收難度均增加。近年來有研究顯示腫瘤壞死因子-α（TNF-α）和超敏C反應(yīng)蛋白（hs-CRP）在糖尿病患者血清中明顯增高，對促進糖尿病的進展有一定意義[3]。而對糖尿病伴有結(jié)核患者胸腔積液中TNF-α和hs-CRP的表達特點，目前尚未見報道。本實驗關(guān)注糖尿病合并肺結(jié)核患者胸腔積液中TNF-α和hs-CRP的表達，初步探討二者的關(guān)系及臨床意義，旨在為臨床工作提供理論支持。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本組糖尿病合并肺結(jié)核并發(fā)胸腔積液的患者均為我院2009年6月～2011年1月收治的患者，臨床隨訪資料完整。排除標(biāo)準：①有其他嚴重的內(nèi)臟器官疾病的患者；②伴有風(fēng)濕免疫系統(tǒng)疾病的患者；③伴有惡性腫瘤的患者。觀察組共88例，其中，男49例，女39例，患者年齡35～86歲，平均54.5歲。選取結(jié)核性胸腔積液50例作為對照組，其中，男26例，女24例，患者年齡35～85歲，平均53.5歲。兩組一般臨床特征比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 檢測方法

兩組均抽取胸腔積液，離心后分離上清液，置于-20℃的冰箱中凍存，標(biāo)本均于1周內(nèi)集中檢測。TNF-α的檢測應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附實驗，嚴格按照說明書操作，全部由同一檢驗醫(yī)師進行。具體方法：加入50 μL的標(biāo)準品或樣品于所設(shè)定的孔中；在每孔中加入100μL一抗，輕輕搖動微孔板混勻1min；室溫避光孵育30 min；洗板3次，每次加入250 μL洗液，最后一次盡量甩干并在吸水紙上吸干；每孔加入150 μL二抗（避免陽光直射和工作臺溫度過低，孵育時適當(dāng)覆蓋微孔板）；室溫避光孵育 30 min；洗板 3次，每次加入 250 μL洗液，最后一次盡量甩干并在吸水紙上吸干；加入100 μL的TMB底物（底物本身無色，出現(xiàn)顏色變化不能使用）；室溫避光孵育孵育10～15 min，加入100 μL的終止液終止反應(yīng)，在450 nm下讀OD值(讀數(shù)前使用無絨布擦拭微孔底部水分和指模)，均由同一技師操作，嚴格質(zhì)控。hs-CRP的檢測應(yīng)用免疫比濁法進行檢測，操作均由同一技師完成，努力減少誤差，嚴格質(zhì)控。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

所有實驗數(shù)據(jù)應(yīng)用SAS 6.12進行統(tǒng)計分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準差（）表示，兩組間比較采用t檢驗，同時對數(shù)據(jù)進行線性相關(guān)分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 TNF-α和hs-CRP在觀察組與對照組中的表達

觀察組中TNF-α和hs-CRP的表達量明顯高于對照組。見表1。

表1 觀察組與對照組中TNF-α和hs-CRP的表達比較（，mg/L）

表1 觀察組與對照組中TNF-α和hs-CRP的表達比較（，mg/L）

組別 例數(shù) TNF-α hs-CRP觀察組對照組88 50 t值 P值231.93±36.53 125.41±23.19 11.20 0.008 2 12.03±3.28 5.42±1.29 8.75 0.012 5

2.2 觀察組中是否伴有糖尿病腎病患者胸腔積液中TNF-α和hs-CRP的表達差別

觀察組中伴有糖尿病腎病患者胸腔積液中TNF-α和hs-CRP的表達量明顯高于不伴有糖尿病腎病的患者（均P<0.05）。 見表 2。

表2 觀察組中是否伴有糖尿病腎病患者胸腔積液中TNF-α和 hs-CRP 的表達比較（，mg/L）

表2 觀察組中是否伴有糖尿病腎病患者胸腔積液中TNF-α和 hs-CRP 的表達比較（，mg/L）

項目 例數(shù) TNF-α hs-CRP不伴有糖尿病腎病伴有糖尿病腎病50 38 t值 P值181.43±37.46 309.87±28.54 13.42 0.005 6 10.46±3.58 15.42±3.49 5.67 0.023 1

2.3 TNF-α和hs-CRP在觀察組中表達的相關(guān)性

對觀察組中TNF-α和hs-CRP的表達進行線性分析，結(jié)果顯示 TNF-α和 hs-CRP的表達呈正相關(guān)（r=0.43，P<0.05）。

3 討論

隨著細胞生物學(xué)與分子生物學(xué)的進展，胸腔積液的免疫學(xué)檢查受到關(guān)注，在鑒別其性質(zhì)中有重要意義。hs-CRP是人體肝臟中合成的一種典型急性期反應(yīng)蛋白，在人體內(nèi)分布廣泛，正常情況下存在于血清或血漿中。損傷性疾病和炎性疾病時，患者血清中hs-CRP濃度可顯著升高。有研究顯示糖尿病發(fā)生時，機體微環(huán)境中可出現(xiàn)hs-CRP的表達升高，而且其與糖尿病的病情程度相關(guān)，其機制可能與損傷過程中激活炎性反應(yīng)有關(guān)[4-5]。TNF-α是一種主要由單核巨噬細胞產(chǎn)生的細胞因子，具有復(fù)雜的生物學(xué)活性[6]，包括抗腫瘤、抗病毒、免疫調(diào)節(jié)和誘發(fā)炎癥反應(yīng)等。TNF-α作為一種促炎因子，既可介導(dǎo)細胞的凋亡過程，又可促進細胞的再生過程。TNF-α常與其他細胞因子共同參與機體的生長發(fā)育和維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，同時又介導(dǎo)感染、創(chuàng)傷及免疫應(yīng)答反應(yīng)[7]。

筆者的實驗結(jié)果顯示TNF-α和hs-CRP在觀察組中的表達量明顯高于對照組，提示TNF-α和hs-CRP在糖尿病合并肺結(jié)核患者的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用。患者發(fā)病后可刺激單核巨噬細胞系統(tǒng)和血管內(nèi)皮細胞不斷產(chǎn)生TNF-α等因子，通過直接啟動炎癥反應(yīng)或通過刺激其他炎癥介質(zhì)的釋放，觸發(fā)級聯(lián)反應(yīng)，導(dǎo)致患者機體內(nèi)環(huán)境中TNF-α的水平明顯升高。TNF-α作為免疫病理損傷中的重要介質(zhì)與病情的嚴重程度密切相關(guān)，在一定程度上可反映機體炎癥的程度，對疾病的病情監(jiān)測可能具有一定意義。TNF-α可刺激單核-巨噬細胞分泌IL-1，進一步誘導(dǎo)內(nèi)皮細胞釋放IL-1和IL-6和趨化因子，促進疾病的進展。hs-CRP參與糖尿病的發(fā)展，也能參與結(jié)核性胸腔積液的發(fā)展。在糖尿病和結(jié)核的發(fā)展過程中，機體內(nèi)白細胞介素家族和腫瘤壞死因子家族過表達，誘導(dǎo)相關(guān)細胞合成較多的hs-CRP等急性時相蛋白，大量hs-CRP激活后，直接或間接使血管內(nèi)皮細胞受損，引起糖尿病的血管病變發(fā)生。本組相關(guān)分析顯示觀察組中TNF-α和hs-CRP的表達呈正相關(guān)性，提示TNF-α和hs-CRP可能具有正向協(xié)同作用，即二者可能是炎癥發(fā)展中級聯(lián)反應(yīng)中的重要介質(zhì)。

總之，TNF-α和hs-CRP在糖尿病合并肺結(jié)核患者胸腔積液的表達明顯升高，在疾病進展中可能具有重要價值。

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