馬 捷 李 峰 王 軍 劉 燕 馬麗晶 渠曉麗

1.北京中醫(yī)藥大學(xué) 國家中醫(yī)藥管理局中醫(yī)科研三級實驗室，北京 100029；2.首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京同仁醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科 耳鼻咽喉頭頸外科學(xué)教育部重點實驗室，北京 100730；3.武警后勤學(xué)院附屬醫(yī)院，天津 300162

喉乳頭狀瘤（laryngeal papilloma，LP）是一種非浸潤性的良性上皮瘤，其臨床可分為成人型（adult-onset laryngeal papilloma，ALP）及兒童型（juvenile-onset laryngeal papilloma，JLP）兩類。幼兒型以多發(fā)性居多，且發(fā)病年齡多在7歲之前。由于本病易造成呼吸道梗阻，且易復(fù)發(fā)，常需多次手術(shù)，故給患者及其家庭造成了沉重的經(jīng)濟與心理負擔(dān)。隨著近年來性病和傳染性疾病的增多，兒童復(fù)發(fā)性呼吸道乳頭狀瘤病（juvenile onset recurrent respiratory papillomatosis，JORRP） 也有明顯增多的趨勢。目前，現(xiàn)在國內(nèi)外治療本病，以手術(shù)切除術(shù)為主，在術(shù)后應(yīng)用免疫抑制劑，防止其復(fù)發(fā)，但療效不甚理想，所以有必要從祖國醫(yī)學(xué)中尋找有效的治療途徑，本研究結(jié)合中醫(yī)喉科與兒科的特殊理論，針對本病“邪毒瘀滯，痰濕阻喉”的核心病機，立“化痰祛濕，扶正解毒”為法，擬“兒童喉乳頭狀瘤方”（蒲公英、連翹、半夏、薏艸以仁、浙貝母、白花蛇舌草、青果、地膚子、土茯苓、生甘草、西洋參、陳皮、三七、劉寄奴）。其方在臨床中應(yīng)用多年，具有顯著效果。為了明確本方的毒副作用及安全性，進一步指導(dǎo)臨床用藥，故進行急性毒理學(xué)實驗研究。

1 儀器與試藥

1.1 實驗動物

昆明種（KM）小白鼠 40 只，清潔級，體重為（20±2）g，2 個月齡，均由北京中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗中心提供 [許可證號：SYXK（京）2006-0012]。隨機將其分為兩組，對照組和中藥組，每組20只，雌雄各半。兩組動物飼料及消毒墊料一致。

1.2 受試藥物

兒童喉乳頭狀瘤方由蒲公英、連翹、半夏、浙貝母、白花蛇舌草、青果、土茯苓、生甘草等藥組成。藥物飲片由北京中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院藥劑科提供，藥材來源于北京康仁堂藥業(yè)有限公司（批號：110401，生產(chǎn)日期：2011年4月16日）。

1.3 實驗條件

實驗小鼠按雌雄分籠，每籠5只。室溫：15～25℃，濕度：60%～70%。給藥前后，以全價顆粒飼料喂養(yǎng)，自由飲水。

1.4 主要器材

灌胃器、燒杯、量筒、電子天平等。

2 方法與結(jié)果

2.1 方法

2.1.1 急性毒理實驗

2.1.1.1 預(yù)實驗 按急性毒理實驗方法[1-2]，選用KM小鼠40只，禁食、不禁水12 h。把中藥配制成最大濃度的混懸液，含生藥2.633 g/mL（以不堵塞灌胃器為限度）。每只小鼠每次灌胃約為0.8 mL/20 g（體重），24 h內(nèi)灌胃3次，間隔4 h。然后按常規(guī)飼養(yǎng)，并觀察小鼠的毒性反應(yīng)情況（外觀、活動、呼吸、分泌物、排便、死亡等），且連續(xù)稱重7 d。因以最大給藥濃度、最大給藥容量，均未測出半數(shù)致死量（LD50），故做最大給藥量實驗。

2.1.1.2 最大給藥量實驗 在預(yù)試驗的基礎(chǔ)上，采用最大給藥量法，選用昆明種小白鼠20只，雌雄各半，體重（20±2）g。 給藥前均禁食、不禁水12 h。并按預(yù)實驗方法配藥，以每只小鼠給予最大生藥濃度2.633 g/mL，最大體積0.8 mL/20 g的藥液灌胃，以觀察14 d內(nèi)小鼠的外觀、飲食、活動、排泄、死亡等情況。14 d后以頸椎脫臼法處死小鼠，解剖后觀察其重要臟器（心、肝、脾、肺、腎、胃、腸等）的變化。

2.1.2 統(tǒng)計學(xué)方法

采用Epidata 2.0建立數(shù)據(jù)庫，并進行雙人雙錄入核對；數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)處理。各項指標(biāo)中，計量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，采用t檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.2 結(jié)果

2.2.1 一般表現(xiàn)

給藥后14 d內(nèi)，實驗組小鼠飲食正常，皮毛光滑，活動自如，大小便正常，無異常分泌物，其呼吸系統(tǒng)（呼吸平穩(wěn)）、神經(jīng)系統(tǒng)（未見廝打及嗜睡情況）、消化系統(tǒng)（排便正常，給藥當(dāng)天為棕褐色便，2～3 d后均恢復(fù)正常，未見腹瀉）與泌尿系統(tǒng)（尿量及顏色正常）均未見異常，小鼠全部存活。其每天最大給藥量為290.666 g/kg，相當(dāng)于臨床兒童用藥量的206倍。

2.2.2 體重變化情況

給藥后14 d內(nèi)，兩組小鼠體重均增加，通過分析給藥后7、14 d兩個時間內(nèi)中藥組與對照組的體重變化，發(fā)現(xiàn)兩組體重差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），兩組小鼠體重均隨時間呈現(xiàn)遞增的趨勢，且雄性體重均高于雌性。14 d內(nèi)中藥組雄性小鼠體重增長（8.02±1.16）g，對照組雄性小鼠體重增長（8.21±1.03）g，兩組體重增長差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。14 d內(nèi)中藥組雌性小鼠體重增長（3.14±1.35）g，對照組雌性小鼠體重增長（3.04±1.17）g，兩組體重增長差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。兩組小鼠體重變化均在生理范圍之內(nèi)。見表1。

2.2.3 主要臟器觀察

對兩組小鼠進行斷頸處死后，進行實體解剖，對心、肝、脾、肺、腎、腸道進行觀察，均未見臟器腫大、萎縮、壞死等異?，F(xiàn)象，主要臟器外形完整，無任何不良病變。提示本藥無毒，其臨床用藥量是一個安全的劑量，臨床用藥安全。

3 討論

本方對術(shù)后患兒的治療有顯著的意義。方以“二陳湯”為基礎(chǔ)進行化裁?！岸悳睘樗未短交菝窈蟿┚址健匪d。其中，半夏，燥濕化痰；陳皮，理氣燥濕，順氣消痰；甘草，可潤肺和中，而本方用生者，取其“用氣平而瀉火”之意[3]。據(jù)研究發(fā)現(xiàn)，本病多以“痰濕阻喉”證為主，《醫(yī)方集解》曾言：“治痰通用二陳”[4]，故用本方頗為妥當(dāng)。同時，方中又加入薏苡仁，甘淡利濕，而兼顧小兒脾胃；浙貝母，體堅味苦，以祛風(fēng)痰；蒲公英、連翹、白花蛇舌草，三者可清熱解毒，消腫散結(jié)，且白花蛇舌草一味，可專治咽喉腫痛；三七、劉寄奴祛瘀生新；青果，解毒利咽；地膚子、土茯苓，利濕消腫；西洋參，以顧護小兒氣陰之不足。全方共湊“化痰祛瘀，扶正解毒”之效。

表1 最大給藥量實驗體重變化表（，g）

表1 最大給藥量實驗體重變化表（，g）

通過對相關(guān)單味藥文獻分析，本方中諸藥藥性有抗炎、抗腫瘤、抗癌的功效。其中，連翹、浙貝母、生甘草尚有抗病毒的效用。另外，本病與尖銳濕疣同屬一種病毒感染，所以，在條目中又列“治疣”一項，并發(fā)現(xiàn)本方中有四味藥有此特效。據(jù)現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，白花蛇舌草中含多糖類物質(zhì)，對淋巴細胞具有刺激作用，可顯著增強機體免疫活性，具有抑制腫瘤細胞增殖的功效，而且，據(jù)研究其在體內(nèi)能刺激網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)增生，促進抗體形成，使網(wǎng)狀細胞、白細胞的吞噬能力增強，從而達到抗病毒、抗炎的作用。同時，土茯苓中的總皂苷成分，具有抗腫瘤作用，而總黃酮成分可以抗脂質(zhì)過氧化并且可以增加機體免疫能力[5]。另據(jù)體內(nèi)和體外實驗研究證明：西洋參中的單體化合物游離色氨酸、游離脂肪酸和多糖類物質(zhì)均具有抗腫瘤活性[6-7]，臨床應(yīng)用獲得滿意的療效。青果中含有黃酮類物質(zhì)及沒食子酸，是其抑菌防腐的主要藥效成分，有較好的抗炎、鎮(zhèn)痛和抑菌作用，據(jù)臨床報道，其對慢性咽喉腫痛亦有佳效[8-9]。佐藥甘草中含有甘草甜素，可發(fā)揮類激素作用，對多種病毒有明顯的抑制效果，并可有效提高機體的免疫功能。

本研究在預(yù)實驗中未測出半數(shù)致死量（LD50），故進行最大給藥量實驗。結(jié)果提示，小鼠每天最大給藥量為290.666 g/kg，相當(dāng)于臨床兒童用藥量的206倍，14 d后模型小鼠在全身體征，內(nèi)臟狀況觀察均為出現(xiàn)異常情況。并隔日測量體重，分析兩組小鼠體重變化，提示兩組體重?zé)o顯著性差異，中藥組體重隨時間呈遞增趨勢，雄性高于雌性。與正常組相吻合。同時，本研究還發(fā)現(xiàn)，在給藥期間，小鼠精神狀態(tài)較穩(wěn)定，未見撕咬等情況，提示本藥未見精神毒性作用。通過上述分析，本方對于喉乳頭狀瘤病兒童的臨床應(yīng)用，較為安全。

[1]衛(wèi)生部藥政局.中藥新藥研究指南[S].北京:人民衛(wèi)生出版社，1992：203-207.

[2]胡雷.藥物非臨床研究與臨床試驗質(zhì)量管理務(wù)實全書[M].北京：當(dāng)代中國音像出版社，2003：683.

[3]丁甘仁.藥性輯錄[M].福州：福建科技出版社，2007：23.

[4]汪昂.醫(yī)方集解[M].上海：上?？萍汲霭嫔?，1959：245.

[5]郭淑云，張薇，張琰，等.土茯苓水提物對高尿酸血癥模型小鼠血清尿酸和甘油三酯、膽固醇的影響[J].中國藥房，2011，22（47）：4439-4440.

[6]吳華彰，趙云利，費鴻君，等.西洋參皂甙的抗氧化功能及其對小鼠遺傳損傷的保護作用[J].中國生物制品學(xué)雜志，2012，25（1）：61-64.

[7]李冀，付雪艷，郝嫻，等.西洋參多糖類物質(zhì)研究進展[J].中醫(yī)藥信息，2006，23（4）：14-15.

[8]王恒，宋良科，湯昊，等.不同種質(zhì)青果清熱利咽化學(xué)組分的研究[J].中國中藥雜志，2010，35（6）：669-672.

[9]何穎，楊桂林，胡祥宇，等.青果總黃酮的抗炎作用研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（5）：2632-2650.