陳 芳，李 麗

1.河南大學(xué)淮河醫(yī)院腎內(nèi)科，河南 開封 475001；2.河南大學(xué)護理學(xué)院，河南 開封 475001

膀胱移行細胞癌 （bladder transitional cell carcinoma，BTCC）是泌尿系常見的惡性腫瘤，其特點是易復(fù)發(fā)和易侵襲轉(zhuǎn)移。因此積極尋求膀胱腫瘤的特殊標志物成為膀胱癌無創(chuàng)檢查和治療的極有價值的方法。新近研究發(fā)現(xiàn)乙酰肝素酶（heparanase，HPA）也稱作乙酰肝素酶或類肝素酶，其能夠酶解基底膜（basement membrane，BM）和細胞外基質(zhì)（extracellular matrix，ECM）中的硫酸乙酰肝素蛋白聚糖成分，從而參與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移過程。因此，HPA成為近幾年腫瘤研究新熱點[1]。腫瘤細胞的浸潤轉(zhuǎn)移是一個復(fù)雜過程，其中最重要的一步是降解細胞外基質(zhì)及基底膜，這一步驟主要依賴于蛋白水解酶。MMPs（matrix metalloproteniase）就是這種鋅離子依賴性內(nèi)肽酶，它能降解細胞外基質(zhì)所有成分，MMP-9是MMPs中降解基底膜最重要的蛋白酶之一。MMP-9主要降解以Ⅳ型膠原為主的基底膜屏障，對于腫瘤形成是非常重要的[2]。本研究采用免疫組化法檢測膀胱移行細胞癌和正常膀胱組織中的HPA和MMP-9的表達情況，以探討二者在膀胱移行細胞癌中的表達和相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

病例取自2005～2010年我院膀胱移行細胞癌手術(shù)（經(jīng)開放性膀胱腫瘤全切或部分切除及經(jīng)尿道膀胱腫瘤電切患者）病例共92例，其中，男58例，女34例；年齡38～89歲，平均61.8歲。全部病例均經(jīng)組織病理學(xué)診斷為膀胱移行細胞癌。組織學(xué)分級：高分化腺癌45例，中分化腺癌36例，低分化腺癌11例；另外同期選取34例正常膀胱組織作為對照（因輸尿管癌或腎盂癌而行膀胱部分切除的正常膀胱組織，經(jīng)病理證實膀胱無腫瘤細胞）。組織均經(jīng)福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋。

1.2 方法

采用免疫組化鏈酶抗生物素蛋白-過氧化物酶（SP）法。兔抗人HPA單克隆抗體、兔抗人MMP-9單克隆抗體、均購自武漢博士德生物工程有限公司；兔抗SP試劑盒、DAB顯色試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。用已知的膀胱移行細胞癌陽性片作為陽性對照，以0.05 mol/L PBS液代替一抗作為陰性對照。HPA和MMP-9均以細胞胞漿中有清晰棕黃色或棕褐色顆粒為陽性。陽性結(jié)果判定標準：染色切片中計數(shù)每10個高倍視野陽性細胞百分率，陽性細胞率≥70%為強陽性（+++）病例，50%～69%為陽性（++）病例，30%～49%為弱陽性（+）病例，＜30%為陰性病例[3]。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 11.0統(tǒng)計軟件包處理，統(tǒng)計方法采用χ2檢驗、Pearson相關(guān)分析等處理。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HPA在正常膀胱和膀胱移行細胞癌中的表達

HPA蛋白呈棕黃色或棕褐色顆粒，團塊狀分布，主要位于腫瘤細胞胞漿內(nèi)。HPA在膀胱移行細胞癌組織陽性率為77.2%（71/92），多數(shù)為“+～++”表達（61/92）；10 例正常膀胱組織中均呈“-”表達（0/10）。HPA在膀胱移行細胞癌組織中表達陽性率明顯高于正常膀胱組織（P＜0.05）。

2.2 HPA蛋白表達與BTCC臨床病理學(xué)因素的相關(guān)性

HPA蛋白在BTCC中的表達與性別、年齡、組織學(xué)分級及1年存活率無關(guān)，而與患者周圍臟器浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05）。 見表 1。

2.3 MMP-9蛋白在正常膀胱和BTCC中的表達

MMP-9蛋白呈棕黃色或棕褐色顆粒，陽性細胞主要位于腫瘤細胞胞漿內(nèi)。MMP-9在BTCC中表達陽性率為70.7%（65/92），多數(shù)為“+～++”表達（46/92）；10 例正常膀胱組織中有2例呈“+”表達（2/10）。HPA在BTCC中表達陽性率明顯高于正常膀胱組織（P＜0.05）。

2.4 BTCC組織中MMP-9的表達和臨床病理指標的關(guān)系

MMP-9在BTCC中的表達與性別、年齡、組織學(xué)分級及1年存活率無關(guān)，而與患者周圍臟器浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05）。 見表 2。

2.5 HPA和MMP-9的相關(guān)性

HPA表達陽性率高的患者其MMP-9的表達也顯著升高，經(jīng)Spearman等級相關(guān)性檢驗分析，在BTCC中HPA和MMP-9 常常聯(lián)合表達，兩者具有相關(guān)性（r=0.729，P＜0.05）。

3 討論

膀胱移行細胞癌90%具有浸潤性生長、容易復(fù)發(fā)、易侵襲轉(zhuǎn)移等生物學(xué)特性[4]。膀胱癌治療關(guān)鍵仍然是早期診斷?？傊R床需要有良好的判斷指標和合理的治療靶點。腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移是一個多步驟的、序貫的復(fù)雜過程。MMP-9和HPA均參與惡性腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移，是其惡性生物學(xué)潛能的主要調(diào)節(jié)蛋白[5]。HPA能特異性破壞細胞外基質(zhì)和基底屏障，從而促進惡性腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移。目前國內(nèi)外有關(guān)研究報道顯示，乙酰肝素酶可能成為腫瘤治療的一個新靶點[6]。且其可通過降解硫酸乙酰肝素糖蛋白，改變細胞外基質(zhì)和基底膜結(jié)構(gòu)，促進腫瘤細胞侵襲轉(zhuǎn)移。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)HPA在有周圍臟器浸潤及有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的BTCC患者中明顯高于無浸潤無轉(zhuǎn)移者。MMPs目前已發(fā)現(xiàn)了至少26個成員，其中MMP-9主要降解明膠從而導(dǎo)致腫瘤細胞向周圍組織浸潤轉(zhuǎn)移。有資料顯示MMP-9不僅參與ECM的降解，而且還對腫瘤細胞的黏附能力有影響[7]。通常MMP-9以酶原形式在細胞內(nèi)合成并最終被分泌到細胞外，改變分子構(gòu)型后被激活，能降解多種細胞外基質(zhì)成分，其中對ECM的降解和破壞是其中最關(guān)鍵的一步。大量研究表明，MMP-9在多種惡性腫瘤中呈現(xiàn)過度表達，在惡性腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移過程中扮演著重要角色。本文顯示MMP-9在BTCC中的表達與腫瘤侵犯周圍臟器、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系[8-9]。本文說明MMP-9在BTCC的發(fā)生發(fā)展過程中起重要作用，且MMP-9陽性表達可作為BTCC浸潤轉(zhuǎn)移的重要分子標志之一[10]。目前關(guān)于HPA與MMP-9關(guān)系的研究尚不統(tǒng)一[11]。本研究同時證實HPA與MMP-9在BTCC浸潤轉(zhuǎn)移過程中有明顯協(xié)同作用。因此，聯(lián)合檢測二者表達不僅可以作為早期發(fā)現(xiàn)和判斷膀胱移行細胞癌的有效方法，同時還可作為評價膀胱移行細胞癌預(yù)后的重要指標?？傊?，HPA和MMP-9在膀胱移行細胞癌組織中共同表達增高，并均與腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移過程相關(guān)，表明其可作為預(yù)測膀胱移行細胞癌的臨床聯(lián)合檢測指標。

表1 BTCC中HPA的表達與臨床病理學(xué)因素的相關(guān)性

表2 膀胱移行細胞癌組織中MMP-9的表達與臨床病理特征的關(guān)系

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