黃志軍， 朱立彬， 翟 莉， 李崇明

(湖北省暨武漢市中藥現(xiàn)代化工程技術(shù)研究中心，湖北武漢430052)

開郁寧片是中藥5類制劑，處方由貫葉金絲桃總黃酮［1］加適宜輔料制成。本品為抗抑郁藥，用于治療輕、中度抑郁癥。目前臨床試用的抗抑郁癥藥主要為化學(xué)藥，這些化學(xué)藥雖然有較明顯的療效，但往往有明顯的副作用，一般不能長期服用，而中藥目前尚無上市的抗抑郁藥。貫葉金絲桃在歐洲作為民間草藥用于治療創(chuàng)傷和抗抑郁藥物已有較長歷史［2］，Linde等［3］報道，治療輕度和中度抑郁癥患者時，含有金絲桃素類成分的貫葉金絲桃提取物效果明顯優(yōu)于安慰劑，與標準抗抑郁藥物 (三環(huán)類)相比，療效相同而副作用小。溶出度測定是利用體外試驗方法對藥物在體內(nèi)生物利用度進行研究和評價的有效的評價方法，是今后口服固體制劑的研究方向［12］，文獻對中藥溶出度的報道較少，本實驗以總黃酮為指標，對開郁寧片進行了溶出度試驗的研究。

1 儀器與試劑

ZRS-8G智能溶出試驗儀 (天津市天大天發(fā)科技有限公司);Agilent 8453紫外-可見分光光度計;蘆丁對照品 (供定量測定用，批號:10080-200306，購自中國藥品生物制品檢定所);開郁寧片 (武漢健民藥業(yè)集團股份有限公司提供);試劑均為分析純。

2 溶出度檢查中總黃酮的測定方法［4-5］

2.1 對照品溶液的制備 取蘆丁對照品25 mg，精密稱定，置50 mL棕色量瓶中，加乙醇適量，超聲處理使溶解，放冷，加乙醇至刻度，搖勻。精密吸取20 mL，置50 mL棕色量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得 (每1 mL含蘆丁0.20 mg)。

2.2 標準曲線的制備 精密量取上述對照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL，分別置25 mL量瓶中，各加水至6.0 mL，加5%亞硝酸鈉溶液1 mL，搖勻，放置6 min，加10%硝酸鋁溶液1 mL，混勻，放置6 min，加1 mol/L氫氧化鈉試液10 mL，再加水至刻度，搖勻，放置15 min，以相應(yīng)的試劑為空白，照紫外-可見分光光度法(《中國藥典》2010年版一部附錄ⅤA)，在500 nm波長處測定吸收值，以吸光度為縱坐標，質(zhì)量濃度為橫坐標，繪制標準曲線。

2.3 測定法 取本品，照溶出度測定法(《中國藥典》2010年版二部附錄XC溶出度測定法第二法)，以2%聚山梨酯80溶液600 mL為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為100 r/min，依法操作。經(jīng)60 min，取溶液15 mL，濾過，精密量取續(xù)濾液5 mL，置25 mL量瓶中，照標準曲線制備項下的方法，自“加水至6.0 mL”起，依法測定吸光度，得吸光度A1，再精密量取續(xù)濾液5 mL，以1 mL水代替10%硝酸鋁，按上述方法制備供試品溶液，依法測定吸光度，得吸光度A2。按下式計算供試品溶液得吸光度A，從標準曲線上讀出供試品溶液中蘆丁的質(zhì)量濃度，計算每片的溶出量，限度為含有量的70%，應(yīng)符合規(guī)定。

供試品溶液的吸光度A=A1－A2

3 溶出度的測定方法及其方法學(xué)研究

3.1 溶出度測定方法 中藥制劑大多采用漿法［6-7］，經(jīng)試驗，本品如采用轉(zhuǎn)籃法，藥片會黏在籃上，對溶出有較大影響，故本品的溶出度測定亦采用槳法。具體測定方法見2.3項。

3.2 溶出介質(zhì)的選擇 參照2010年版《中國藥典》二部，分別選擇水、9‰鹽酸溶液、磷酸鹽緩沖液 (pH6.8)［8］346、5%乙醇、10%乙醇、磷酸鹽緩沖液 (pH7.8～8.0)0.2%十二烷基硫酸鈉溶液作為溶出介質(zhì)［8］259，343，皆不能得到滿意的溶出度結(jié)果。經(jīng)咨詢有關(guān)專家，采用聚山梨酯80溶液作為考察溶劑。

對0.5%聚山梨酯80溶液、1.0%聚山梨酯80溶液、1.5%聚山梨酯80溶液、2%聚山梨酯80溶液、2.5%聚山梨酯80溶液分別進行了考察，通過考察，選擇2%聚山梨酯80溶液作為溶出介質(zhì)。

3.3 溶出介質(zhì)對樣品顯色后的吸收波長的影響 取本品，以2%聚山梨酯80溶液600 mL為溶出介質(zhì)，制備供試品溶液并顯色 (溶液①);然后以水為溶劑 (溶液②)，采用超聲法制備供試品溶液并顯色，比較這兩種溶液在可見光區(qū)的吸收曲線，見圖1、圖2，由曲線可知以2%聚山梨酯80溶液作為溶出介質(zhì)對本品吸收無干擾。

圖1 溶液①可見光區(qū)吸收曲線

圖2 溶液②可見光區(qū)吸收曲線

3.4 轉(zhuǎn)速的考察 取本品，以2%聚山梨酯80溶液600 mL為溶出介質(zhì)，分別以 50 r/min，100 r/min，150 r/min進行試驗，經(jīng)60 min時取樣，對同一批樣品 (批號:20070601)進行測定。結(jié)果表明樣品在100 r/min的溶出良好。

3.5 線性關(guān)系試驗 按照2.1項制備對照品溶液(0.2013 mg/mL)，精密量取上述對照品溶液1、2、3、4、5、6mL，分別置25 mL量瓶中，各加水至6.0 mL，加5%亞硝酸鈉溶液1 mL，混勻，放置6 min，加10%硝酸鋁溶液1 mL，搖勻，放置6 min，加1 mol/L氫氧化鈉試液10 mL，再加水至刻度，搖勻，放置15 min，以相應(yīng)的試劑為空白，照紫外-可見分光光度法(《中國藥典》2010年版一部附錄ⅤA)，在500 nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，質(zhì)量濃度為橫坐標，得回歸方程Y=12.835X－0.0082，r=0.9998，說明以本法測定總黃酮含有量，總黃酮質(zhì)量濃度在8.052～48.312 μg/mL之內(nèi)，吸光度與質(zhì)量濃度線性關(guān)系良好。

3.6 溶出曲線的測定 取本品 (批號:20070601)，以2%聚山梨酯80溶液為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速100 r/min，按上述溶出度檢查方法試驗，分別在 15、30、45、60、75、90 min時取溶液適量 (每次取樣后立即補足溶出介質(zhì))，測定總黃酮的含有量，以各時間點的溶出量對時間繪制曲線，溶出曲線見圖3。根據(jù)結(jié)果綜合分析，本品的取樣時間為60 min時較為合適。

圖3 溶出曲線

3.7 專屬性試驗 取開郁寧片陰性對照品，照上述方法測定，計算每片的溶出量，結(jié)果吸收值幾乎為零，說明樣品中其它成分和溶出介質(zhì)不影響本品的溶出度測定。

3.8 回收率試驗 取開郁寧片陰性對照品6片，照溶出度測定的方法操作，所得陰性對照溶液待用。另取蘆丁對照品適量，精密稱定，置50 mL量瓶中，加陰性對照溶液適量，超聲處理使溶解，放冷，加陰性對照溶液至刻度，搖勻。分別精密量取3、3.5、4 mL，置25 mL量瓶中，依法測定含有量，計算回收率。每個質(zhì)量濃度平行試驗3次，結(jié)果見表1，平均回收率為97.12%，RSD為1.33%。由結(jié)果可見，采用本方法進行溶出度檢查，回收率良好。

表1 回收率試驗結(jié)果

3.9 精密度試驗 照溶出度檢查方法制備溶出溶液，對同一溶出杯內(nèi)溶出溶液制備6份供試品溶液，依法測定，計算溶出量，由試驗結(jié)果 (見表2)可見，本試驗精密度較好。

表2 精密度試驗結(jié)果

3.10 溶液穩(wěn)定性試驗 取溶出度測定項下的對照品溶液與供試品溶液于室溫下放置，分別于 0、10、20、30、40 min時測定其吸光度，由試驗結(jié)果可見，本品溶出溶液顯色后在室溫下避光放置40 min，溶液基本穩(wěn)定。

4 樣品溶出度檢查及溶出度限度的制定

用上述所建立的溶出度測定方法對3批樣品進行測定，結(jié)果均符合規(guī)定。結(jié)果見表3。

表3 樣品溶出度測定結(jié)果

根據(jù)中試3批樣品溶出度測定結(jié)果，結(jié)合中藥的實際情況，暫定本品總黃酮的溶出度限度為70%。

5 討論

5.1 中藥溶出度的研究尚處于摸索階段，主要由于中藥成分復(fù)雜，有效成分不明確，有效成分和無效成分之間互相干擾，使藥物的溶出不規(guī)律。溶出介質(zhì)的選擇必須以接近消化道內(nèi)體液環(huán)境為原則，消化道內(nèi)體液環(huán)境通常采用以下幾種溶出介質(zhì)來涵蓋［9］:(1)pH值1～3的鹽酸溶液;(2)不同濃度的醋酸鹽或磷酸鹽緩沖溶液;(3)水。而中藥制劑 (有效成分為堿性的除外)，很難在接近消化道內(nèi)體液的環(huán)境中得到合理的溶出量，這時可以考慮加入一定量的表面活性劑來改善溶出，主要依據(jù)是人體內(nèi)胃腸道表面存在一定濃度的天然表面活性劑。

5.2 口服固體制劑的核心就是生物利用度，評價生物利用度最直接的手段是直接抽取人體血樣，測定血藥濃度，實際生活研究中很難實現(xiàn)，而溶出度試驗已成為證明藥物體內(nèi)釋放特性的一種簡單、廉價而不失嚴謹?shù)膶嶒炇覚z測方法。中藥成分復(fù)雜，與西藥純度較高的單體成分不同，溶出機制復(fù)雜，其他成分對主要有效成分的溶出有較大的影響。而溶出度是反映藥品質(zhì)量的關(guān)鍵指標，隨著我國醫(yī)藥事業(yè)的發(fā)展，溶出度的研究必定會越來越深入，甚至有專家［10］提出“多條溶出曲線就是一個固體制劑的指紋圖譜”!由此觀之，中藥未來的溶出度研究“任重而道遠”!另外本文成文時還參考了相關(guān)文獻 ［11-14］。

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