王 靚， 施 慧， 龍子江， 黃金玲， 卞 海

(安徽中醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)教研室，安徽合肥230038)

無(wú)患子皂苷是從落葉喬木無(wú)患子Sapindus mukorossi Gareth.的果實(shí)中提取的，它含有豐富的糖苷類(lèi)物質(zhì)，主要為三萜皂苷類(lèi)、倍半萜糖苷類(lèi)［1］。傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)認(rèn)為無(wú)患子的根、果可入藥，具有清熱，祛痰，消積，殺蟲(chóng)的功效。前期實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)［2］無(wú)患子皂苷能夠顯著降低高血壓模型動(dòng)物的血壓，并有效地干預(yù)高血壓誘導(dǎo)的心肌肥厚。而心肌肥厚是高血壓重要的合并癥，是誘發(fā)心血管系統(tǒng)疾病的重要危險(xiǎn)因素，現(xiàn)在前期研究基礎(chǔ)上，進(jìn)一步探討無(wú)患子皂苷干預(yù)心肌肥厚的作用機(jī)制，為其臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要藥品及儀器 無(wú)患子皂苷由安徽省醫(yī)學(xué)研究所化學(xué)室提供;纈沙坦膠囊由北京諾華制藥有限公司生產(chǎn)，國(guó)藥準(zhǔn)字H20040217;754紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)由上海精密科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn);GC-911型γ-放射免疫計(jì)數(shù)器由中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)科技實(shí)業(yè)總公司生產(chǎn);ALD、NO、NOS試劑盒由南京建成生物工程研究所提供;AngⅡ放免試劑盒由北京華英生物技術(shù)研究所提供。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物 SD大鼠由安徽醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào):SCXK(皖)2005-0001。

1.3 方法 選取體質(zhì)量180～220 g的雄性SD大鼠，隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組 (21.6 mg/kg)、無(wú)患子皂苷小劑量組 (54mg/kg)、中劑量組(162 mg/kg)、大劑量組 (486 mg/kg)，每組13只 (保證檢測(cè)指標(biāo)時(shí)每組剩余超過(guò)10只)。各組大鼠以3.5%水合氯醛10 mL/kg腹腔注射麻醉，打開(kāi)腹腔，分離兩腎動(dòng)脈之間的腹主動(dòng)脈，除假手術(shù)組外，各組沿腹主動(dòng)脈平行放置一直徑為0.7 mm的醫(yī)用針頭［3-4］，用手術(shù)線(xiàn)結(jié)扎后，抽出注射針頭，閉合腹腔并注射青霉素鈉4萬(wàn)單位/只，連續(xù)3 d抗感染，正常喂養(yǎng)4周，4周后假手術(shù)組、模型組以10 mL/kg蒸餾水灌胃，其余4組給予相應(yīng)劑量藥物，灌胃容積為10 mL/kg體質(zhì)量，1次/d，連續(xù)給藥4周。末次給藥后30 min，各組大鼠用20%烏拉坦麻醉，腹主動(dòng)脈取血離心后取血漿測(cè)AngⅡ、ALD、NO、NOS水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法 數(shù)據(jù)采用SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)軟件包，采用單因素方差分析，組間比較采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05、P＜0.01分別表示統(tǒng)計(jì)學(xué)意義顯著和非常顯著。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)心肌肥厚模型大鼠腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)的影響 結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 對(duì)心肌肥厚模型大鼠血漿AngⅡ和ALD水平的影響(±s，n=10)

表1 對(duì)心肌肥厚模型大鼠血漿AngⅡ和ALD水平的影響(±s，n=10)

注:與模型組比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01。

組 別 劑量/(mg·kg －1)AngⅡ/(ng·L －1)ALD/(ng·L －1)假手術(shù)組 － 84.51±8.46＊＊ 98.48±15.33＊＊模型對(duì)照組 － 151.28±13.54 176.57±19.75陽(yáng)性對(duì)照組 21.6 98.52 ±9.46＊＊ 114.66 ±16.34＊＊無(wú)患子皂苷小劑量組 54 134.45±15.24* 151.43±22.39*無(wú)患子皂苷中劑量組 162 124.84 ±8.54＊＊ 135.52 ±24.64＊＊無(wú)患子皂苷大劑量租 486 113.54 ±12.34＊＊ 127.51 ±20.13＊＊

由表1可見(jiàn)，行腹主動(dòng)脈縮窄術(shù)后，模型大鼠血漿AngⅡ和ALD水平顯著升高，與假手術(shù)組比有顯著性差異(P＜0.01)，說(shuō)明模型大鼠由于壓力超負(fù)荷刺激了RAAS，而給予無(wú)患子皂苷后，藥物組模型大鼠AngⅡ和ALD水平顯著降低，與模型組比有顯著性差異 (P＜0.01，P＜0.05)，說(shuō)明無(wú)患子皂苷能夠有效地抑制模型大鼠RAAS。

2.2 對(duì)心肌肥厚模型大鼠NO生成系統(tǒng)的影響 結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 對(duì)心肌肥厚模型大鼠NO和NOS水平的影響(x ±s，n=10)

由表2可見(jiàn)，行腹主動(dòng)脈縮窄術(shù)后，模型大鼠血漿NO和NOS水平顯著減少，與假手術(shù)組比有顯著性差異 (P＜0.01)，說(shuō)明模型大鼠由于壓力超負(fù)荷抑制了NO生成系統(tǒng)，而給予無(wú)患子皂苷后，藥物組模型大鼠NO和NOS水平顯著降低，與模型組比有顯著性差異 (P＜0.05)，說(shuō)明無(wú)患子皂苷能夠有效地激活模型大鼠NO生成系統(tǒng)。

3 討論

心肌肥厚是常見(jiàn)的心血管疾病臨床癥狀，主要表現(xiàn)為心肌細(xì)胞肥大和間質(zhì)成分的改變 (或稱(chēng)為心臟重構(gòu))，心臟的順應(yīng)性和循環(huán)泵功能降低［5］。關(guān)于心肌肥厚的發(fā)生機(jī)制，很多年來(lái)一直是心血管疾病研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)，但是至今還沒(méi)有一個(gè)明確的結(jié)論。大量研究認(rèn)為多種生長(zhǎng)因子、細(xì)胞因子、活性肽及激素等均可作為細(xì)胞外信號(hào)，通過(guò)與心臟內(nèi)相應(yīng)受體的結(jié)合及后續(xù)的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，引起心臟內(nèi)的多種細(xì)胞發(fā)生短效或長(zhǎng)效反應(yīng)，前者如心肌細(xì)胞的收縮、成纖維細(xì)胞分泌膠原等，后者包括心肌細(xì)胞的肥大，成纖維細(xì)胞的增殖等。而機(jī)械性壓力負(fù)荷升高可以刺激多種分泌因子，這些分泌因子在心肌肥厚發(fā)生中的作用多年來(lái)一直是研究的熱點(diǎn)，包括:RAAS、NO合成系統(tǒng)、兒茶酚胺類(lèi)、胰島素樣生長(zhǎng)因子 (IGF)等［6］。

AngⅡ具有強(qiáng)烈的正性變力作用和血管收縮作用，能介導(dǎo)心肌細(xì)胞增殖和凋亡、導(dǎo)致炎性反應(yīng)及氧化損傷，參與心肌肥厚、心肌纖維化、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)和膠原合成作用，在血管增生重構(gòu)、高血壓心肌肥厚等疾病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起著及其重要的作用［7］。NO是血管內(nèi)皮細(xì)胞合成和釋放的血管舒張因子，它是以L(fǎng)-精氨酸為底物，在NOS的催化下形成的。NO除引起冠狀血管舒張，調(diào)節(jié)冠脈供血等一系列效用外，可通過(guò)自分泌和 (或)旁分泌的途徑抑制細(xì)胞增生和膠原合成改善心肌纖維化，是一種重要的抗心肌纖維化因子8］。研究證實(shí)RAAS和NO合成系統(tǒng)之間并非孤立而是緊密相關(guān)的，血管緊張素轉(zhuǎn)化酶 (ACE)和緩激肽相互影響。ACE不僅決定著Ang的最終產(chǎn)生，同時(shí)通過(guò)失活緩激肽來(lái)調(diào)節(jié)NO的產(chǎn)生，因?yàn)榛罨木徏る目梢源碳OS的活性。Ang與 NO的作用正好相反，顯然它們之間的作用平衡將決定心肌細(xì)胞的收縮功能和能量消耗，這也是心肌肥厚發(fā)生的決定因素［9-10］。

中醫(yī)藥干預(yù)心肌肥厚的研究起步較晚，目前對(duì)心肌肥厚的病因病機(jī)研究多參照高血壓，認(rèn)為本病涉及到心、肝、膽、腎諸臟腑，多為本虛標(biāo)實(shí)之證，因心腎氣陽(yáng)兩虛而導(dǎo)致外邪侵襲，致使氣滯、血瘀、痰濁、寒凝、熱結(jié)閉塞心絡(luò)［11-14］。無(wú)患子皂苷是中藥無(wú)患子中提取的有效成分，其具有清熱、祛痰之功效，而前期的研究結(jié)果也顯示其對(duì)于心肌肥厚有顯著的抑制作用，故我們大膽推測(cè)，無(wú)患子皂苷可能通過(guò)清熱解毒、祛痰化濁干預(yù)心肌肥厚的病理變化。

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)行腹主動(dòng)脈縮窄術(shù)復(fù)制了壓力負(fù)荷型的心肌肥厚大鼠模型，通過(guò)對(duì)模型動(dòng)物給予無(wú)患子皂苷證實(shí)了，無(wú)患子皂苷對(duì)模型大鼠的RAAS和NO合成系統(tǒng)均有顯著的影響，能夠通過(guò)抑制RAAS和激活NO合成系統(tǒng)而發(fā)揮干預(yù)心肌肥厚的作用，為無(wú)患子皂苷的臨床應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。

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