馬曉莉， 王 淼， 韓 波， 曹松云， 張新穎， 曲 萌

(河北大學(xué)中醫(yī)學(xué)院，河北保定071000)

腸梗阻是外科常見的急腹癥之一，不僅可以引起消化道局部損傷、全身性生理紊亂，嚴(yán)重的可導(dǎo)致毒血癥、休克、死亡。中西醫(yī)結(jié)合治療一般是在西醫(yī)保守治療的基礎(chǔ)上，加用中藥內(nèi)治或針灸等方法，取得良好的療效，作用機(jī)制的研究已比較深入［1-3］。大蒜硝黃膏方源自《中醫(yī)天灸療法》，藥物組成為大蒜、芒硝、生大黃，用陳醋適量制成膏，敷于神厥穴治療腸梗阻［4］。穴位貼敷治療腸梗阻的優(yōu)勢在于可以早期介入，減少并發(fā)癥的發(fā)生，縮短病程。本實(shí)驗(yàn)通過觀察大蒜硝黃膏穴位貼敷對不完全性腸梗阻模型大鼠的影響，探討其作用機(jī)理，為臨床應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料

1.1 動(dòng)物 SD大鼠48只，雌性，體質(zhì)量(230±50)g，清潔級(jí)，購自河北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，合格證編號(hào):1103189。

1.2 藥物與試劑

1.2.1 大蒜硝黃膏的制備 先將大黃30 g研為細(xì)粉，再與大蒜120 g、芒硝30 g共搗融，調(diào)醋60 mL為糊，分別按7.5 g、5 g、2.5 g制成直徑5.5 cm、3.5 cm、2.5 cm的高、中、低劑量的圓形藥餅，作為備用 (膏-1)。另將大黃60 g研為細(xì)粉，加醋適量調(diào)成大黃糊，再分別按7.5 g、5 g、2.5 g制成直徑5.5 cm、3.5 cm、2.5 cm的高、中、低劑量的圓形藥餅，作為備用 (膏-2)。

1.2.2 主要試劑 NO檢測試劑盒，南京建成生物工程研究所，批號(hào):20110106;SOD試劑盒，南京建成生物工程研究所，批號(hào):20110107;MDA試劑盒，南京建成生物工程研究所，批號(hào):20110106。

1.3 儀器 Stat Fax-2100酶標(biāo)儀，美國Awareness公司;KD-2258輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)，浙江省金華市科迪儀器設(shè)備有限公司;BS224S電子天平，賽多利斯科學(xué)儀器 (北京)有限公司;SHA-BA雙功能水浴恒溫振蕩器，金壇市杰瑞爾電器有限公司;Polytron PT 2100標(biāo)準(zhǔn)臺(tái)式勻漿機(jī)，瑞士Kine-matica公司;MVIS-2015全自動(dòng)血液流變分析儀，重慶天海醫(yī)療商務(wù)有限公司。

2 方法

2.1 不完全性腸梗阻模型制備 依據(jù)參考文獻(xiàn)［5］調(diào)整施行。將大鼠禁食12 h、禁水4 h，用10%水合氯醛 (350 mg/kg)麻醉，備皮后碘伏消毒，于左側(cè)腹壁開腹，暴露回盲部，用中心靜脈導(dǎo)管與回腸腸管并排放置，在距回盲部2 cm處用圓針帶絲線穿透腸系膜繞過回腸腸管和中心靜脈導(dǎo)管一并結(jié)扎，最后抽出中心靜脈導(dǎo)管，造成不完全性腸梗阻，然后將腹壁逐層縫合，術(shù)后常規(guī)喂養(yǎng)。

2.2 分組與給藥 將大鼠隨機(jī)分為正常對照組、手術(shù)模型組、陽性對照組、大蒜硝黃膏高、中、低劑量組，每組8只，喂飼普通飼料。由于目前臨床上沒有療效確切的治療腸梗阻的外用中成藥，因此選取大承氣湯口服作為陽性對照。除正常對照組外各組大鼠均于手術(shù)造模蘇醒后給藥。陽性對照組灌胃大承氣湯10 mL/kg，(每1 mL含生藥1 g)，連續(xù)喂3 d。大蒜硝黃膏高、中、低劑量組分別將膏-1貼敷于大鼠的神闕穴，膠布固定，2 h后去掉膏-1，用溫開水洗凈局部皮膚，然后再將膏-2敷于神闕穴，膠布固定，貼敷6 h，連續(xù)貼敷3 d。正常組、手術(shù)模型組僅貼敷膠布，給予相同刺激。大鼠神闕穴依據(jù)《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》［6］中大鼠針灸穴位分布圖及定位方法進(jìn)行定位。

2.3 標(biāo)本處理 造模72 h后下腔靜脈取血，一部分用于血液流變學(xué)檢測，一部分置于含3.8%的枸櫞酸鈉真空管中3000 r/min離心10 min，取血漿于－70℃冷存，用于NO、MDA和SOD的測定。取血后立即處死動(dòng)物，即刻剪取距回盲部2 cm處的小腸組織，以生理鹽水輕柔沖洗腸腔內(nèi)容物后，無菌濾紙吸干水分，一部分浸泡于10%甲醛中固定24～48h后用于常規(guī)HE染色，另一部分置于－70℃冰箱保存，用于NO、SOD、MDA的測定。

2.4 觀察指標(biāo)

2.4.1 一般情況 觀察造模前后大鼠的一般狀況和體質(zhì)量的變化。

2.4.2 小腸組織形態(tài)學(xué)觀察 將10%甲醛固定24～48 h后的小腸組織常規(guī)石蠟包埋切片，HE染色，光鏡下觀察其形態(tài)學(xué)改變。并根據(jù)Haglund等［7］方法評價(jià)腸黏膜損傷程度。標(biāo)準(zhǔn)如下:0分，絨毛和腺體正常;1分，部分絨毛頂部上皮輕度受損;2分，上皮下腺體輕度受損;3分，上皮下間隙擴(kuò)大，毛細(xì)血管充血;4分，上皮與固有層中度分離，腺體受損;5分，部分絨毛頂部脫落;6分，絨毛明顯脫落;7分，固有層絨毛脫落;8分，固有層開始消化分解;9分，出血、潰瘍生成。

2.4.3 血液流變學(xué)檢測 使用MVIS-2015全自動(dòng)血液流變分析儀檢測。

2.4.4 血漿與小腸組織NO、MDA、SOD的測定 采用黃嘌呤氧化酶法測定超氧化物歧化酶 (SOD);硝酸還原酶法測定NO;硫代巴比妥酸法 (TBA)測定MDA，具體操作過程詳見說明書。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS16.0軟件進(jìn)行處理，小腸黏膜損傷評分采用秩變換非參數(shù)檢驗(yàn)分析，均數(shù)間比較采用單因素方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 對不完全性腸梗阻大鼠一般情況的影響 模型組大鼠神態(tài)倦怠，反應(yīng)遲鈍，毛色黯淡無光，被毛雜亂，體質(zhì)量明顯下降;與模型組相比，大蒜硝黃膏組和陽性對照組大鼠一般狀態(tài)良好，體質(zhì)量下降程度明顯降低 (P＜0.01)，其中以大蒜硝黃膏高劑量組體質(zhì)量下降最少;大蒜硝黃膏高、中、低劑量組與陽性對照組相比，無顯著差異 (P＞0.05);大蒜硝黃膏高、中、低劑量組組間無顯著差異(P＞0.05)。表明大蒜硝黃膏穴位貼敷能改善梗阻大鼠的一般狀態(tài)。結(jié)果見表1。

表1 對不完全性腸梗阻大鼠實(shí)驗(yàn)前后體質(zhì)量差值的比較(±s)

表1 對不完全性腸梗阻大鼠實(shí)驗(yàn)前后體質(zhì)量差值的比較(±s)

注:與正常對照組比較，＊＊P ＜0.01;與模型組比較，##P ＜0.01。

/g正常對照組 8 239.46±7.18 244.46±5.62 5.00±3.31組 別 動(dòng)物數(shù)/只 實(shí)驗(yàn)前體質(zhì)量/g 實(shí)驗(yàn)后體質(zhì)量/g 體質(zhì)量差值##手術(shù)模型組 8 249.01±14.19 212.58±13.23 －36.74±4.50＊＊陽性對照組 8 253.65±13.39 231.88±12.87 －21.78±2.58＊＊##大蒜硝黃膏高劑量組 8 241.02±12.18 220.25±14.18 －20.78±3.75＊＊##大蒜硝黃膏中劑量組 8 240.24±7.47 218.00±7.90 －22.24±2.66＊＊##大蒜硝黃膏低劑量組 8 242.16±8.77 218.71±10.61 －23.45±4.42＊＊##

3.2 對不完全性腸梗阻大鼠小腸組織形態(tài)學(xué)的影響 光鏡下，HE染色發(fā)現(xiàn)模型組小腸黏膜上皮細(xì)胞腫脹，細(xì)胞界限不清，黏膜下層、肌層及漿膜層明顯瘀血，上皮細(xì)胞壞死、脫落，絨毛水腫、破損、脫落明顯，固有層血管充血;大蒜硝黃膏組和陽性對照組大鼠小腸上皮細(xì)胞充血、水腫減輕，壞死減少，炎細(xì)胞浸潤明顯減少，小腸絨毛破損程度減輕，見圖1。模型組小腸黏膜損傷評分增加，大蒜硝黃膏高、中、低劑量組小腸黏膜損傷評分顯著低于模型組，結(jié)果見表2。

圖1 對不完全性腸梗阻大鼠小腸組織形態(tài)學(xué)的影響 (×100)

表2 對不完全性腸梗阻大鼠小腸黏膜損傷評分的比較

3.3 對不完全性腸梗阻大鼠血液流變學(xué)的影響 模型組大鼠的全血低切、高切黏度、血漿黏度和紅細(xì)胞聚集指數(shù)明顯高于正常組 (P＜0.01);與模型組相比，大蒜硝黃膏高、中、低劑量組和陽性對照組大鼠全血低切、高切黏度、血漿黏度和紅細(xì)胞聚集指數(shù)均有顯著降低，其中高劑量組降低最多。大蒜硝黃膏高、中、低劑量組與陽性對照組相比，無顯著差異 (P＞0.05)，大蒜硝黃膏高、中、低劑量組組間無顯著差異 (P＞0.05)。提示大蒜硝黃膏可以改善梗阻時(shí)血液的高黏滯狀態(tài)，結(jié)果見表3。

表3 對不完全性腸梗阻大鼠血流變學(xué)指標(biāo)的比較 (±s)

表3 對不完全性腸梗阻大鼠血流變學(xué)指標(biāo)的比較 (±s)

注:與正常對照組比較，＊＊P＜0.01;與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01。

組 別 動(dòng)物數(shù)/只 全血黏度低切3s/(mPa·s)全血黏度高切200s/(mPa·s)血漿黏度/(mPa·s)紅細(xì)胞聚集指數(shù)(Arbc)正常對照組 8 11.19±0.86## 5.39±0.55## 1.18±0.06## 6.36±0.49##手術(shù)模型組 8 14.22±0.35＊＊ 7.30±0.46＊＊ 1.80±0.13＊＊ 8.95±0.78＊＊陽性對照組 8 13.55 ±0.38＊＊# 6.61 ±0.18＊＊## 1.63 ±0.08＊＊## 8.00 ±0.67＊＊##大蒜硝黃膏高劑量組 8 13.52 ±0.68＊＊# 6.60 ±0.40＊＊## 1.62 ±0.07＊＊## 8.05 ±0.53＊＊##大蒜硝黃膏中劑量組 8 13.56 ±0.54＊＊# 6.64 ±0.28＊＊## 1.64 ±0.08＊＊## 8.19 ±0.67＊＊#大蒜硝黃膏低劑量組 8 13.79±0.54＊＊ 6.66±0.29＊＊## 1.70±0.05＊＊# 8.37±0.60＊＊

3.4 對不完全性腸梗阻大鼠血漿及小腸組織NO、MDA、SOD水平的影響 模型組血漿和小腸組織NO、MDA水平明顯增高，SOD水平明顯降低 (P＜0.01);與模型組相比，大蒜硝黃膏組和陽性對照組血漿和小腸組織NO、MDA水平增高的程度降低，SOD水平有不同程度的升高 (P＜0.05)，其中以大蒜硝黃膏高劑量組效果最好。大蒜硝黃膏高、中、低劑量組與陽性對照組相比，無顯著差異 (P＞0.05)，大蒜硝黃膏高、中、低劑量組組間無顯著差異(P＞0.05)。表明大蒜硝黃膏可以明顯降低模型大鼠血漿和小腸組織的NO、MDA水平、升高SOD水平，具有清除氧自由基、拮抗脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的作用。結(jié)果見表4、5。

表4 對不完全性腸梗阻大鼠血漿NO、MDA、SOD的影響 (±s)

表4 對不完全性腸梗阻大鼠血漿NO、MDA、SOD的影響 (±s)

注:與正常對照組比較，＊＊P＜0.01;與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01。

組 別 動(dòng)物數(shù)/只 NO/(μnmoL·L－1) MDA/(nmoL·mL－1) SOD/(U·mL－1)正常對照組 8 30.22±0.83## 4.56±0.42## 213.36±8.49##手術(shù)模型組 8 45.09±1.33＊＊ 8.75±1.02＊＊ 158.30±4.96＊＊陽性對照組 8 39.12 ±1.35＊＊## 6.80 ±0.63＊＊## 170.49 ±8.72＊＊##大蒜硝黃膏高劑量組 8 38.99 ±1.48＊＊## 6.44 ±0.73＊＊## 172.10 ±7.11＊＊##大蒜硝黃膏中劑量組 8 39.86 ±1.30＊＊## 7.06 ±1.26＊＊## 169.23 ±6.97＊＊##大蒜硝黃膏低劑量組 8 40.42 ±2.11＊＊## 7.31 ±1.01＊＊## 167.03 ±5.34＊＊#

表5 對不完全性腸梗阻大鼠小腸組織NO、MDA、SOD的影響 (±s)

表5 對不完全性腸梗阻大鼠小腸組織NO、MDA、SOD的影響 (±s)

注:與正常對照組比較，＊＊P＜0.01;與模型組比較，##P＜0.01。

組 別 動(dòng)物數(shù)/只 NO/(μnmoL·gprot－1) MDA/(nmoL·mgprot－1) SOD/(U·mgprot－1)正常對照組 8 19.88±0.85## 3.69±1.02## 83.62±8.30##手術(shù)模型組 8 28.99±0.83＊＊ 7.59±0.65＊＊ 49.52±5.15＊＊陽性對照組 8 24.28 ±0.97＊＊## 5.99 ±0.96＊＊## 66.35 ±7.91＊＊##大蒜硝黃膏高劑量組 8 23.98 ±1.56＊＊## 5.88 ±0.83＊＊## 68.59 ±9.02＊＊##大蒜硝黃膏中劑量組 8 24.95 ±1.20＊＊## 6.02 ±0.69＊＊## 65.42 ±8.72＊＊##大蒜硝黃膏低劑量組 8 25.03 ±1.19＊＊## 6.19 ±1.06＊＊## 62.35 ±8.19＊＊##

4 討論

腸梗阻按梗阻程度不同分完全性腸梗阻和不完全性腸梗阻［8-9］，不完全性腸梗阻亦能演變?yōu)橥耆阅c梗阻，因此臨床上應(yīng)早診斷、早治療、避免拖延時(shí)間加重病情［10］。腸梗阻發(fā)生后，一系列理化因素作用于腸道組織，導(dǎo)致腸管缺血、水腫、微循環(huán)障礙，血液黏度增加，進(jìn)一步引起腸道的運(yùn)動(dòng)、吸收及分泌等功能代謝異常，導(dǎo)致大量相關(guān)介質(zhì)如NO大量釋放，產(chǎn)生氧自由基等有害物質(zhì)，氧自由基的分解產(chǎn)物之一MDA又可引起蛋白質(zhì)變性和交聯(lián)，使DNA損傷、酶及激素失活，隨著氧自由基的不斷增多，機(jī)體內(nèi)清除自由基的酶類如超氧化物歧化酶 (SOD)等活性不足或抗氧化劑不足時(shí)，則引起周圍組織的嚴(yán)重破壞性損傷，使炎癥和組織損傷之間形成惡性循環(huán)［11-12］。因此改善腸道微循環(huán)、降低NO、清除氧自由基，保護(hù)小腸黏膜組織是治療腸梗阻的重要機(jī)制。

有文獻(xiàn)報(bào)道，大蒜中所含大蒜素具有擴(kuò)血管、抗缺血、抗血小板聚集和清除氧自由基的作用，能提高機(jī)體免疫力［13］;外用芒硝可使胃竇、結(jié)腸近端肌間神經(jīng)叢SP的分布明顯增加，從而增強(qiáng)胃腸壁內(nèi)神經(jīng)元的興奮性，促進(jìn)胃腸活動(dòng)［14］;大黃能促進(jìn)胃腸平滑肌運(yùn)動(dòng)，不僅能降低血液黏度和紅細(xì)胞聚集，并且具有抗超氧陰離子、清除氧自由基的作用［15-16］，另外對MDA也有明顯抑制作用，且抑制作用有明顯的量效關(guān)系［17］。

探討大蒜硝黃膏穴位貼敷治療不完全性腸梗阻的作用機(jī)制，選取上述腸梗阻病理生理過程中比較有代表意義的血流變學(xué)和NO、MDA、SOD等作為檢測指標(biāo)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，大蒜硝黃膏穴位貼敷使模型大鼠血液黏滯程度、血漿和小腸組織的NO、MDA水平明顯降低，SOD水平明顯增高，使小腸組織損傷明顯減輕，保護(hù)腸黏膜結(jié)構(gòu)的完整性，具有腸屏障保護(hù)功能。

實(shí)驗(yàn)中大蒜硝黃膏貼敷方法按原文獻(xiàn)使用方法，即將方中膏-1貼敷2 h后，換膏-2繼續(xù)貼敷6 h。膏-1中的大蒜具有皮膚刺激性，不宜貼敷時(shí)間過長，以免損傷皮膚。

穴位貼敷法治療腸梗阻的優(yōu)勢在于簡單易行，可以早期介入，增強(qiáng)療效，減少并發(fā)癥的發(fā)生，縮短病程，值得臨床推廣應(yīng)用。

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