陳 明， 陳志武， 龍子江， 張衍讓， 王雅娟， 高華武， 任晨晨

(1.安徽中醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)教研室，安徽合肥230038;2.安徽醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，安徽合肥230031;3.安徽省化工研究院，安徽合肥230041)

無患子皂苷 (sapindus saponin)是從無患子科植物無患子樹的種子無患子假種皮中提取的有效部位。有關(guān)無患子的藥用在《本草拾遺》、《本草綱目》中均有記載，性味苦平，具有清熱、解毒、祛痰等功效。本實驗以此作為研究的出發(fā)點，通過檢測原發(fā)性高血壓大鼠的尾動脈收縮壓等指標(biāo)考察無患子皂苷的降壓效果;通過檢測血清IL-1、IL-6、TNF-α水平及血管內(nèi)皮ICAM-1等炎癥因子的表達(dá)，考察其對內(nèi)皮損傷及血管重構(gòu)的保護(hù)機(jī)制，為進(jìn)一步深入研究該類藥物的作用機(jī)制、完善中醫(yī)治療理論提供一定的科學(xué)依據(jù)。

1 實驗材料

1.1 實驗藥物 無患子的成熟果實，水洗、晾干、去籽、粉碎，加12倍量水煎煮3次，每次1 h。提取液過濾、濃縮，上大孔吸附樹脂柱，依次用水、20%乙醇和70%乙醇洗脫，收集70%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇后以混合溶劑萃取，即得淡棕色粉末，為無患子總皂苷。以常春藤皂苷元為對照品，紫外分光光度法測定，無患子總皂苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)為95.6%，由安徽省化工研究院提供。

1.2 陽性對照藥物 卡托普利片 (Captopril Tablets)，25 mg/片，上海普康藥業(yè)有限公司產(chǎn)品，批號:101003。

1.3 實驗試劑 白細(xì)胞介素1β(IL-1β)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)放免試劑盒，均購于北京華英生物技術(shù)研究所，批號:20110328;ICAM-1兔抗鼠多克隆抗體，購于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，批號:14520a。

1.5 實驗動物 14周齡自發(fā)性高血壓大鼠32只，雌雄各半，體質(zhì)量 (200～250)g，由北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司提供，實驗動物生產(chǎn)許可證號:SCXK(京)2007-001;相同周齡健康Wistar大鼠8只，雌雄各半，體質(zhì)量 (200～250)g，由南京醫(yī)科大學(xué)動物中心提供，實驗動物生產(chǎn)許可證號:SCXK(蘇)2008-0004。

1.6 實驗設(shè)施 安徽醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心，SPF級，實驗動物使用許可證號:SYXK(皖)2011-007。

2 實驗方法

2.1 動物分組及給藥 取自發(fā)性高血壓大鼠32只，雌雄各半 (雌性未孕)，體質(zhì)量200～250 g，適應(yīng)實驗室5 d，每天測血壓1次，以使大鼠適應(yīng)環(huán)境和檢測刺激。然后稱質(zhì)量、編號，隨機(jī)均分為4組，每組8只，即自發(fā)性高血壓大鼠模型對照組、陽性對照組 (卡托普利，27 mg/kg)、無患子皂苷低 (27 mg/kg)、高劑量組 (108 mg/kg)。另取8只健康Wistar大鼠作為正常對照組。各藥物組大鼠分別按照上述劑量灌胃給藥，給藥容積為1 mL/100g體質(zhì)量，正常對照組和自發(fā)性高血壓大鼠模型對照組大鼠灌胃等容量蒸餾水，給藥時間持續(xù)8周。

2.2 一般狀態(tài)觀察 期間，觀察大鼠的精神、飲水、攝食、排便、毛色、體質(zhì)量、活動度等情況。大鼠易激惹程度分為Ⅲ級:Ⅰ級指捉持大鼠頸部時無明顯反應(yīng);Ⅱ級指捉持大鼠頸部時尖叫、驚跳;Ⅲ級指捉持大鼠頸部時咬人或同籠大鼠頻繁打斗。

2.3 血壓測定 用Bp-6無創(chuàng)血壓測量系統(tǒng)測定大鼠尾動脈收縮壓。在大鼠安靜狀態(tài)下，連續(xù)測收縮壓3次，取平均值作為測壓結(jié)果。觀察指標(biāo):①單次給藥降壓效果，測給藥前大鼠血壓、首次藥后30、60、90、120、240 min的血壓情況;②連續(xù)給藥降壓情況，分別測定1、4、7、10、13、16、19、22、25、28、35、42、49、56 d 藥后 30 min血壓 (由單次給藥結(jié)果可知，無患子皂苷高劑量組在藥后30 min開始起效)，每天重復(fù)測量3次，取所得平均值作為最終的血壓值。

2.4 血清及血管內(nèi)皮炎癥因子水平測定 末次藥后待血壓測定完成后，用20%烏拉坦腹腔麻醉，腹主動脈取血4 mL，靜置、分離血清，放免法檢測血清 IL-1、IL-6、TNF-α水平，實驗方法嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。取腹主動脈血管置入福爾馬林中固定、脫水透明、包埋切片，免疫組化法檢測血管內(nèi)皮ICAM-1的表達(dá)水平，以光鏡下觀察到內(nèi)皮細(xì)胞胞漿及間質(zhì)內(nèi)黃色、棕黃色或棕褐色顆粒狀物質(zhì)為陽性表達(dá)，按陽性染色細(xì)胞所占比例分為3級:陽性染色細(xì)胞占15%～35%為弱陽性反應(yīng) (+);陽性染色細(xì)胞占36%～75%為陽性反應(yīng) (++);陽性染色細(xì)胞占75%以上為強陽性反應(yīng) (+++)。并用JEDR801D形態(tài)學(xué)圖像分析系統(tǒng)Version6.0進(jìn)行圖像半定量拍照并分析，每張切片隨機(jī)選取不重疊的5個視野，測定其積分光密度值，取其平均值代表達(dá)水平，結(jié)果以陽性率和吸光度值表示。

2.5 主動脈血管HE及Masson膠原染色 取胸主動脈血管置入福爾馬林中固定，脫水透明、包埋切片。HE染色于×200高倍鏡下觀察組織形態(tài)學(xué)變化，并攝片，用Leica光學(xué)顯微鏡采圖，并用BI2000圖像分析系統(tǒng)對HE染色圖片進(jìn)行圖像分析，依次測定血管中膜厚度 (media thickness，MT)及腔徑 (luminal diameter，ID)、中膜面積 (medial area，MA)及管腔面積 (luminal area，LA)，并計算中膜厚度與腔徑比 (MT/LD)、中膜面積與管腔面積比 (MA/LA);Masson膠原染色，用于觀察血管平滑肌膠原沉積情況。

設(shè)兩天線間距滿足對消條件D=Tv，其中T為SAR信號脈沖重復(fù)周期，v為SAR平臺運行速度.假設(shè)場景任意點目標(biāo)Z和散射區(qū)域內(nèi)的任意散射點S，An、Bn分別表示兩天線在第n個脈沖時刻的位置，在經(jīng)歷了一個脈沖重復(fù)周期T后，a天線到達(dá)b天線的n時刻位置，此時兩天線在第n+1個脈沖時刻的位置分別為An+1、Bn+1.記b天線在第n+1個脈沖時刻接收的點目標(biāo)Z回波信號和點S散射波干擾信號分別為sbz(n)、sbj(n)，a天線在第n+1個脈沖時刻接收的目標(biāo)回波信號和干擾信號分別為saz(n+1)、saj(n+1)，則兩天線分別在saz(n+1)和n+1時刻接收的信號為

3 實驗結(jié)果

3.1 對自發(fā)性高血壓大鼠一般狀態(tài)的影響 正常對照組大鼠進(jìn)食、飲水、活動情況均正常，反應(yīng)靈敏，毛色健康有光澤，精神狀態(tài)良好，未見任何異樣反應(yīng);自發(fā)性高血壓大鼠模型組大鼠逐漸表現(xiàn)出被毛蓬松成簇?zé)o光澤，食量減少，體質(zhì)量下降，精神萎靡且易怒，在給藥及血壓檢測過程中，易出現(xiàn)劇烈抵抗、攻擊等行為，易激惹程度大部分由Ⅰ級轉(zhuǎn)變?yōu)棰?、Ⅲ?無患子皂苷單次給藥后，各組大鼠行為學(xué)一般狀態(tài)觀察與模型對照組無明顯差別。連續(xù)給藥2周治療后，則精神狀態(tài)明顯好轉(zhuǎn)，情緒相對穩(wěn)定，進(jìn)食量明顯增多，體質(zhì)量增長較快。每周稱取各組大鼠攝食量及體質(zhì)量一次，自發(fā)性高血壓大鼠進(jìn)食量明顯減少、體質(zhì)量減輕，與正常對照組比較有顯著性差異 (P＜0.05或P＜0.01);無患子皂苷低、高劑量組可顯著增加自發(fā)性高血壓大鼠進(jìn)食量及體質(zhì)量，與自發(fā)性高血壓大鼠對照組比較有顯著性差異 (P＜0.05或P＜0.01);見圖1、2。

圖1 對自發(fā)性高血壓大鼠每周進(jìn)食量的影響

圖2 對自發(fā)性高血壓大鼠體質(zhì)量的影響

3.2 對自發(fā)性高血壓大鼠的降壓效果

3.2.1 單次給藥對自發(fā)性高血壓大鼠尾動脈收縮壓的影響實驗結(jié)果顯示:自發(fā)性高血壓大鼠尾動脈壓明顯高于正常對照組，與之比較有高度顯著性差異 (P＜0.01);無患子皂苷各劑量組單次給藥30 min后，即對自發(fā)性高血壓大鼠有明顯的降壓作用，在藥后各時間點，收縮壓有明顯降低趨勢，與自發(fā)性高血壓大鼠模型組比較有顯著性差異(P＜0.05或P＜0.01)，降壓作用可持續(xù)到藥后240 min，與藥前血壓比較，在藥后30、60、90、120、240 min等時間點亦有顯著性差異(P＜0.05或P＜0.01)。見表1，圖3。

表1 無患子皂苷單次用藥對自發(fā)性高血壓大鼠尾動脈收縮壓的影響(±s，n=8)

表1 無患子皂苷單次用藥對自發(fā)性高血壓大鼠尾動脈收縮壓的影響(±s，n=8)

注:模型對照組與正常對照組比較，＊＊P＜0.01;各藥物組與模型對照組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01;與給藥前比較，#P＜0.05，##P＜0.01。

30 m i n 60 m i n 90 m i n 120 m i n 240 m i n組 別 劑量/(m g·k g－1)收縮壓/m m H g(1 m m H g=0.133322 k P a)藥前正常對照組 － 125.21±4.46 126.33±4.37 125.32±4.89 124.75 ±5.71 125.29 ±5.14 125.02 ±4.55模型對照組 / 165.06 ±6.92＊＊ 163.33 ±5.73＊＊ 163.84 ±6.39＊＊ 164.78 ±6.17＊＊ 164.42 ±4.94 ＊＊ 164.58 ±6.23 ＊＊陽性對照組 27 161.11 ±11.03 149.59 ±8.90▲▲#140.68 ±9.50▲▲##139.56 ±6.04▲▲##134.81±8.91▲▲## 135.71 ±12.94▲▲##無患子皂苷低劑量組 27 168.48 ±12.28 160.22±9.76 153.15±12.01▲# 155.16±11.57# 159.17 ±11.88 152.21±11.01▲▲##無患子皂苷高劑量組 108 167.39 ±13.09 151.95±16.67# 157.23±17.97 160.05±16.15 152.21 ±18.37 148.84±14.16▲#

圖3 無患子皂苷單次用藥對自發(fā)性高血壓大鼠尾動脈收縮壓的影響

3.2.2 連續(xù)給藥對自發(fā)性高血壓大鼠尾動脈收縮壓的影響實驗結(jié)果顯示:自發(fā)性高血壓大鼠隨著年齡的增長，血壓逐漸升高，與正常對照組比較有高度顯著性差異 (P＜0.01)，在實驗第7天～第56天，與實驗前比較有顯著性差異 (P＜0.05或P＜0.01);無患子皂苷可顯著抑制自發(fā)性高血壓大鼠血壓升高的病理進(jìn)展，連續(xù)用藥后，在不同時間段收縮壓及舒張壓均有所降低，無患子皂苷低劑量組降壓過程出現(xiàn)一定的波動，但高劑量組則表現(xiàn)出較為平穩(wěn)的降壓效果，與模型組比較及用藥前比較均有顯著性差異(P＜0.05或P＜0.01)。見表2，圖4。

表2 無患子皂苷連續(xù)用藥8周對自發(fā)性高血壓大鼠尾動脈收縮壓的影響 (±s，n=8)

表2 無患子皂苷連續(xù)用藥8周對自發(fā)性高血壓大鼠尾動脈收縮壓的影響 (±s，n=8)

注:模型對照組與正常對照組比較，＊＊P＜0.01;各藥物組與模型對照組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01;與給藥前比較，#P＜0.05，##P ＜0.01。

1 d 4 d 7 d 10 d正常對照組 － 125.21±4.46 126.33±4.37 124.56±5.26 124.4組 別 劑量/(mg·kg－1)收縮壓/mmHg(1 mmHg=0.133322 kPa)藥前6±5.59 125.49±4.68模型對照組 － 165.06±6.92＊＊ 163.33±5.73＊＊ 169.60±5.11＊＊ 171.68±4.67＊＊# 173.38±8.74＊＊#陽性對照組 27 161.11±11.03 149.59±8.90▲▲# 128.73±11.71▲▲##142.10±5.85▲▲## 130.03±13.33▲▲##無患子皂苷低劑量組 27 168.48±12.28 160.22±9.76 141.47±11.65▲▲##163.40±5.87▲▲# 149.28±12.41▲▲##無患子皂苷高劑量組 108 167.39±13.09 151.95±16.67# 151.22±12.23▲▲# 149.97±7.06▲▲## 138.80±4.83▲▲##組 別 劑量/(mg·kg－1)收縮壓/mmHg 13 d 16 d 19 d 22 d 25 d正常對照組 － 124.59±3.31 124.93±4.81 125.64±5.62 124.59±4.85 124.35±3.89模型對照組 － 165.94±4.24＊＊ 170.81±11.78＊＊ 172.52±7.88＊＊# 162.00±14.67＊＊ 170.68±5.67＊＊陽性對照組 27 140.90±11.87▲▲##139.73±6.68▲▲## 139.86±8.35▲▲## 138.41±8.77▲▲## 145.12±5.37▲▲##無患子皂苷低劑量組 27 166.11±9.53 157.17±10.08▲ 146.30±3.39▲▲# 164.91±13.31 155.47±13.70▲無患子皂苷高劑量組 108 153.15±10.81▲▲# 141.22±11.10▲▲##145.98±13.30▲▲##150.75±6.11## 149.83±13.31▲▲#組 別 劑量/(mg·kg－1)收縮壓/mmHg 28 d 35 d 42 d 49 d 56 d正常對照組 － 125.79±3.59 125.14±2.06 128.89±4.47 126.74±3.51 125.42±3.38模型對照組 － 172.91 ±5.12＊＊# 179.31 ±5.14＊＊## 181.02 ±5.35＊＊## 185.07 ±6.08＊＊## 187.82 ±5.79＊＊##陽性對照組 27 137.52±7.63▲▲## 133.56±5.92▲▲## 132.68±4.86▲▲## 131.49±4.23▲▲## 129.72±3.02▲▲##無患子皂苷低劑量組 27 157.18±9.78▲▲ 156.18±8.43▲▲＊＊ 156.59±7.57▲▲＊＊ 157.41±10.33▲▲＊＊ 154.60±8.29▲▲＊＊無患子皂苷高劑量組 108 155.39±9.77▲▲ 134.93±3.27▲▲## 136.26±3.56▲▲## 134.16±5.64▲▲## 133.29±3.86▲▲##

圖4 無患子皂苷連續(xù)用藥8周對自發(fā)性高血壓大鼠尾動脈收縮壓的影響

3.3 對自發(fā)性高血壓大鼠血清IL-1、IL-6、TNF-α水平的影響 自發(fā)性高血壓大鼠模型對照組大鼠血清炎癥因子IL-1、IL-6、TNF-α水平顯著高于正常對照組，與之比較有顯著性差異 (P＜0.05或P＜0.01)，連續(xù)用藥8周后，無患子皂苷可顯著降低自發(fā)性高血壓大鼠炎癥因子的血清水平，與模型對照組比較有顯著性差異 (P＜0.05或P＜0.01)。見表3。

3.4 對自發(fā)性高血壓大鼠腹主動脈內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)ICAM-1表達(dá)的影響 免疫組化法檢查結(jié)果可見，光鏡下觀察ICAM-1陽性染色呈棕褐色顆粒狀，主要分布在血管內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞漿及間質(zhì)內(nèi)。正常對照組大鼠內(nèi)皮細(xì)胞胞漿及間質(zhì)內(nèi)僅可見很少量的散在的棕褐色顆粒，呈陰性或者弱陽性表達(dá);自發(fā)性高血壓大鼠模型組大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞胞漿及間質(zhì)內(nèi)分布大量的棕褐色顆粒狀物質(zhì)，表達(dá)呈強陽性反應(yīng);Sap低劑量組和陽性對照組大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞胞漿及間質(zhì)內(nèi)可見一些散在的棕黃色顆粒物質(zhì)，表達(dá)呈陽性反應(yīng);Sap高劑量組大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞胞漿及間質(zhì)內(nèi)可見少量散在的棕黃色物質(zhì)，表達(dá)呈弱陽性反應(yīng)。見表4、圖5。

表3 對自發(fā)性高血壓大鼠IL-1、IL-6、TNF-α血清水平影響 (±s)

表3 對自發(fā)性高血壓大鼠IL-1、IL-6、TNF-α血清水平影響 (±s)

注:模型對照組與正常對照組比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01;各藥物組與模型對照組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01。

組 別 劑量/(mg·kg－1)動物數(shù)/只IL-1/(ng·mL－1)IL-6/(ng·mL－1)TNF-α/(ng·mL－1)0.14±0.03 1.22±0.19 1.35±0.12模型對照組 － 8 0.18±0.04* 1.6±0.31＊＊ 1.68±0.13＊＊陽性對照組 27 8 0.13±0.02▲▲ 1.01±0.21▲▲ 1.45±0.20▲無患子皂苷低劑量組 27 8 0.16±0.01 1.15±0.09▲▲ 1.37±0.09▲▲無患子皂苷高劑量組 108 8 0.13±0.01▲▲ 0.89±0.09▲▲ 1.31±0.05正常對照組 －8▲▲

表4 對自發(fā)性高血壓大鼠腹主動脈內(nèi)皮ICAM-1表達(dá)的影響 (±s)

表4 對自發(fā)性高血壓大鼠腹主動脈內(nèi)皮ICAM-1表達(dá)的影響 (±s)

注:模型對照組與正常對照組比較，＊＊P＜0.01;各藥物組與模型對照組比較，▲▲P＜0.01。

吸光度值正常對照組組 別 劑量/(mg·kg－1) 動物數(shù)/只 陽性率/%25.375±6.726 0.0500±0.0199模型對照組 － 8 86.000±7.071＊＊ 0.1666±0.0348＊＊陽性對照組 27 8 60.875±9.949▲▲ 0.0690±0.0137▲▲無患子皂苷低劑量組 27 8 56.875±9.448▲▲ 0.0821±0.0193▲▲無患子皂苷高劑量組 108 8 30.875±8.509▲▲ 0.0667±0.0216－8▲▲

圖5 主動脈血管內(nèi)皮ICAM-1的蛋白表達(dá)免疫組化法 (×400)

3.5 對自發(fā)性高血壓大鼠內(nèi)皮損傷及血管重構(gòu)的影響HE染色，鏡下觀察結(jié)果顯示:正常對照組大鼠內(nèi)膜細(xì)胞完整，無血栓形成，未見血液及血小板附壁，中膜平滑肌細(xì)胞呈縱行規(guī)則地排列，未見明顯增殖;自發(fā)性高血壓大鼠模型大鼠內(nèi)膜細(xì)胞損傷明顯，可見血液或血小板附壁，血栓形成，有的甚至穿越內(nèi)皮插入血管壁，中膜平滑肌增殖、肌層增厚明顯，且細(xì)胞排列紊亂不規(guī)則，部分平滑肌細(xì)胞核與內(nèi)膜垂直排列并且有向內(nèi)膜遷移的趨勢;無患子皂苷各劑量組及陽性對照組可不同程度地改善內(nèi)膜損傷的病理狀態(tài)，內(nèi)膜細(xì)胞可見輕度損傷，少量血液或血小板附壁，中膜平滑肌增殖不明顯，細(xì)胞排列輕度紊亂不規(guī)則，低、高劑量組改善更為明顯。見表6，圖6。

表6 對主動脈血管中膜平滑肌增殖情況的影響(±s，n=8)

表6 對主動脈血管中膜平滑肌增殖情況的影響(±s，n=8)

注:模型對照組與正常對照組比較，＊＊P＜0.01;各藥物組與模型對照組比較;▲P＜0.05，▲▲P＜0.01。

組 別 劑量/(mg·kg －1)MT/μm LD/μm MT/LD/%MA/(×105μm2)LA/(×105μm2)MA/LA/%正常對照組 － 110.25±8.30 741.13±27.98 14.88±4.05 5.28±0.41 23.76±1.82 22.43±2.97模型對照組 － 152.63±12.01＊＊ 660.25±27.79＊＊ 23.15±2.04＊＊ 7.61±0.81＊＊ 19.34±1.28＊＊ 39.56±5.28＊＊陽性對照組 27 135.88±7.24▲▲ 688.75±15.65▲ 19.74±1.13▲▲ 6.51±0.33▲▲ 20.66±1.08▲ 31.56±2.00▲▲無患子皂苷低劑量組 27 131.50±6.39▲▲ 704.25±9.35▲▲ 18.68±0.99▲▲ 6.45±0.45▲▲ 21.01±1.09▲ 30.81±3.34▲▲無患子皂苷高劑量組 108 121.75±5.15▲▲ 721.88±16.63▲▲ 16.87±0.75▲▲ 5.73±0.30▲▲ 21.88±0.68▲▲ 26.21±1.64▲▲

圖6 主動脈血管內(nèi)皮損傷及中膜平滑肌增殖HE染色 (×200)

Masson染色結(jié)果顯示:血管中膜平滑肌細(xì)胞漿和肌纖維被染成紅色，細(xì)胞核呈黑藍(lán)色，膠原纖維被染成藍(lán)色。與正常對照組相比，自發(fā)性高血壓大鼠模型組主動脈血管中膜平滑肌膠原纖維量明顯增多，且細(xì)胞排列紊亂;無患子皂苷各劑量組及陽性對照組可顯著抑制動脈血管平滑肌膠原纖維的異常增殖情況。見圖7。

圖7 主動脈血管內(nèi)皮損傷及中膜平滑肌膠原沉積 Masson染色 (×400)

4 討論

自發(fā)性高血壓大鼠屬于遺傳性高血壓動物模型。自發(fā)性高血壓大鼠出生后血壓隨鼠齡不斷升高，幼年自發(fā)性高血壓大鼠交感活性增高，4周齡時雖然血壓正常但已出現(xiàn)心臟質(zhì)量增加，3～4個月時為高血壓確立期，6個月時血壓達(dá)到最高水平，隨后隨血壓升高進(jìn)一步出現(xiàn)心血管并發(fā)癥［3］。因此，目前自發(fā)性高血壓大鼠模型是應(yīng)用最為廣泛的高血壓動物模型，其病理生理機(jī)制與人類高血壓疾病相似，普遍用于研究高血壓疾病病理生理機(jī)制及篩選治療高血壓藥物。

腫瘤壞死因子 (tumor necrosis factor，TNF)是能夠引起腫瘤組織出血壞死、并具有多方面功能的細(xì)胞因子。TNF不僅參與免疫調(diào)節(jié)和炎癥反應(yīng)，而且對心血管系統(tǒng)也產(chǎn)生一定的影響，故其在高血壓的病理進(jìn)程中起到重要的作用［4］。高血壓病患者血液循環(huán)中TNF濃度［5］以及在體外培養(yǎng)的淋巴細(xì)胞TNF誘生水平［6］均顯著高于正常人，而水平較高的TNF可通過下列途徑影響高血壓病的病理進(jìn)程:TNF通過引起血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能障礙及代謝損傷，進(jìn)而導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡［7］;還可促進(jìn)內(nèi)皮素 (ET)的表達(dá)，而增加的ET即可引起血管的強烈收縮，又可通過促進(jìn)c-fos和c-myc等原癌基因表達(dá)，調(diào)控的細(xì)胞生長，使得血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖，血管壁增厚、管腔變得狹窄［8］，從而進(jìn)一步引起外周阻力增大，血壓持續(xù)升高。

細(xì)胞間黏附分子-1(ICAM-1)屬于免疫球蛋白超家族的成員。有研究發(fā)現(xiàn)，ICAM-l的異常表達(dá)涉及到多種心血管疾病［9］。有報道稱機(jī)械拉力可使血管內(nèi)皮細(xì)胞的ICAM-l表達(dá)增多，從而致使與之連接的粒細(xì)胞和單核細(xì)胞被激活，因而進(jìn)一步導(dǎo)致血管病變的發(fā)生。ICAM-1表達(dá)的增強與內(nèi)皮的損害、內(nèi)皮細(xì)胞功能的紊亂、高脂血癥、腎素-血管緊張素系統(tǒng)的激活、細(xì)胞因子的作用、胰島素抵抗等均有相關(guān)性［10］。

有研究表明，某些細(xì)胞因子如IL-1、IL-6等可由血管內(nèi)皮細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞分泌，與心血管疾病的發(fā)生、發(fā)展有一定的聯(lián)系，其不僅在血管內(nèi)的炎癥反應(yīng)及免疫應(yīng)答中起著重要的介導(dǎo)作用，而且能促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞DNA的合成及增殖，進(jìn)而與原發(fā)性高血壓的發(fā)生有著密切的關(guān)系［11］。

因此，在本實驗中以自發(fā)性高血壓大鼠作為研究對象，研究結(jié)果顯示自發(fā)性高血壓大鼠血壓顯著高于正常對照組大鼠，并且隨著鼠齡的增長，血壓有逐漸升高的趨勢，符合人類原發(fā)性高血壓疾病的特點;自發(fā)性高血壓大鼠炎癥因子IL-1、IL-6、TNF-α的血清水平及血管內(nèi)皮ICAM-1表達(dá)顯著高于正常對照組大鼠，進(jìn)一步研究結(jié)果顯示自發(fā)性高血壓大鼠血管內(nèi)皮損傷、中膜平滑肌顯著增厚，導(dǎo)致了動脈血管的重構(gòu)，因此證實了慢性炎癥狀態(tài)與主動脈內(nèi)皮損傷及血管重構(gòu)的相關(guān)性。實驗受試藥物無患子皂苷低(27 mg/kg)、高 (108 mg/kg)劑量組單次及連續(xù)給藥均可顯著降低自發(fā)性高血壓大鼠血壓值，對抗自發(fā)性高血壓大鼠血壓逐漸升高的病理進(jìn)程，抑制循環(huán)血液及血管內(nèi)皮內(nèi)炎癥因子的表達(dá)水平，從而對高血壓內(nèi)皮損傷及血管重構(gòu)的病理狀態(tài)有較好的改善作用。

無患子皂苷對自發(fā)性高血壓大鼠有顯著的降壓作用，并對主動脈內(nèi)皮損傷及血管重構(gòu)具有顯著的改善作用，其機(jī)制可能與其抑制炎癥因子IL-1、IL-6、TNF-α及ICAM-1的表達(dá)，改善自發(fā)性高血壓大鼠血管內(nèi)皮慢性炎癥狀態(tài)有關(guān)。

［1］World Health Organization，Internationl Society of Hypertension Writing Group.2003 World Health Organization(WHO)/International Society of Hypertension(ISH)statement on management of hypertension［J］.J Hypertens，2003，21(11):1983-1992.

［2］Badr K，Wainwright C L.Inflammation in the cardiovascular system:here，there and everywhere［J］.Curr Opin Pharmacol，2004，4(2):107-109.

［3］徐叔云.藥理實驗方法學(xué)［M］.3版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2002:953.

［4］Ferrei N R，Zhao Y J，Takazawa H，et al.Tumor necrosis factor angiotension interaction and regulation of blood press［J］.Hypertens，1997，15(12):1481-1485.

［5］于 欣，楊 震，徐方芳，等.高血壓腎損害患者TNF-α水平的變化研究［J］.新醫(yī)學(xué)，2010，41(12):783-785.

［6］蔣波勇，任曉華.原發(fā)性高血壓患者外周血單個核細(xì)胞炎癥因子水平的變化［J］.中國衛(wèi)生檢驗雜志，2010，20(12):3358-3360.

［7］金惠銘，劉清行，張國平，等.TNF引起的微血管內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙及其分子機(jī)制［J］.中國病理生理雜志，2000，16(10):940-943.

［8］陳昕琳，顧仁樾，章怡祎.丹參多酚酸B對動脈粥樣硬化大鼠炎癥細(xì)胞因子的影響［J］.上海中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2011，25(1):63-65.

［9］Kiarash A，Pagano P J，Taveh M，et al.Upregulated expression of rat heart intercellular adhesion molecule-1 in angiolensinⅡbut not phenylephrine-induce hypertension［J］.Hypertension，2001，37(1):58-65.

［10］Blacher J，Guerin A P，Pannier B.Impact of aortic stiffness on survival in end stage renal disease［J］.Circulation，2005，99(18):2434-2439.

［11］Gojova A，Brun V，Esposito B，et al.Specific abrogation of transforming growth factor-beta signaling in T cells alters atherosclerotic lesionsize and composition in mice［J］.Blood，2007，102(12):4052-4058.