郭艷萍，楊廣英，王建君，孫 麗，李 軍

(鄭州人民醫(yī)院 病理科 河南鄭州 450002)

腫瘤的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)多步驟的過(guò)程，是多種癌基因的激活和抑癌基因的失活或缺失、細(xì)胞凋亡基因表達(dá)的紊亂導(dǎo)致的。子宮頸癌是常見(jiàn)的婦科惡性腫瘤，其發(fā)生發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移是多因素共同作用的復(fù)雜的病理過(guò)程。PTEN 又稱(chēng)為(MMAC1/TEP1)基因［1］，是至今為止發(fā)現(xiàn)的第一個(gè)具有磷酸酶活性的抑癌基因，在調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)及細(xì)胞調(diào)亡過(guò)程中發(fā)揮重要作用，并與腫瘤細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移能力密切相關(guān)。C-myc基因是發(fā)現(xiàn)較早的原癌基因之一。其編碼蛋白具有轉(zhuǎn)錄因子活性，有促進(jìn)細(xì)胞增殖、調(diào)節(jié)細(xì)胞周期、抑制細(xì)胞分化、參與細(xì)胞凋亡的作用。P27為一種抑癌基因，其表達(dá)產(chǎn)物P27蛋白參與調(diào)控細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡，為細(xì)胞周期負(fù)性調(diào)控因子［2］。本研究采用免疫組化SP法檢測(cè)PTEN蛋白、C-myc蛋白和P27蛋白在正常宮頸黏膜上皮、宮頸上皮內(nèi)瘤變(CINⅡ-Ⅲ)及宮頸鱗癌中的表達(dá)，進(jìn)而探討其與宮頸鱗癌發(fā)生發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系，以及三者的相關(guān)性，為宮頸癌診斷和治療提供更為有效的判斷指標(biāo)。

1 材料與方法

1.1 材料 收集鄭州人民醫(yī)院2007年至2010年經(jīng)活檢或手術(shù)病理檢查的存檔蠟塊標(biāo)本，其中正常宮頸黏膜上皮標(biāo)本40例、CINⅡ-Ⅲ標(biāo)本40例和宮頸鱗癌標(biāo)本40例，年齡(41.0±0.5)歲，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移標(biāo)本18例、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移標(biāo)本22例，組織學(xué)分級(jí)高分化17例、低分化23例;浸潤(rùn)深度＜1/2肌層28例，＞1/2肌層12例。全部標(biāo)本由有經(jīng)驗(yàn)的病理醫(yī)師確診，采集前未治療。

1.2 試劑和方法 實(shí)驗(yàn)用兔抗人PTEN多克隆抗體、P27單克隆抗體均購(gòu)自北京中山生物公司。生物素-鏈霉菌抗生物素SP免疫組化試劑盒、鼠抗人C-myc單克隆抗體及DAB顯色劑均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)有限公司。免疫組化(SP法)組織蠟塊做4μm連續(xù)切片，烤片后脫蠟和水化，3%H2O2孵育10 min，滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，高壓抗原修復(fù)20 min。SP三步法進(jìn)行染色，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，脫水，透明，中性樹(shù)膠封固。

1.3 結(jié)果判斷 PTEN蛋白染色陽(yáng)性在細(xì)胞膜或胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)黃色顆粒，C-myc蛋白陽(yáng)性表達(dá)主要定位于細(xì)胞核，以胞核或胞質(zhì)出現(xiàn)明顯的黃色或棕黃色顆粒視為陽(yáng)性著色;P27以細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色染色為陽(yáng)性細(xì)胞。每張切片檢測(cè)10～20個(gè)視野(倍數(shù)×400)，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)腫瘤細(xì)胞，共計(jì)1 000個(gè)細(xì)胞，計(jì)算出每張切片的陽(yáng)性百分?jǐn)?shù)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行處理，陽(yáng)性率之間的比較采用χ2檢驗(yàn)(包括校正)，兩變量之間的相關(guān)性檢驗(yàn)采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析，以P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 PTEN、C-myc和P27在不同宮頸病變組織中的表達(dá) PTEN和P27正常宮頸黏膜上皮、宮頸上皮內(nèi)瘤變(CINⅡ-Ⅲ)及宮頸鱗癌中的表達(dá)逐漸降低，及C-myc表達(dá)的逐漸增高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);PTEN、C-myc和P27在有、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸鱗癌患者癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率，比較差別有顯著性意義(P＜0.05);在浸潤(rùn)深度＜1/2肌層、＞1/2肌層中宮頸鱗癌組織中PTEN、C-myc和P27陽(yáng)性表達(dá)率間的差別也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見(jiàn)表1。

表1 PTEN、C-myc和P27在不同病變宮頸組織中的表達(dá)

2.2 PTEN、C-myc和 P27之間的相關(guān)性結(jié)果PTEN和P27的表達(dá)具有相關(guān)性(P＜0.01)，二者與C-myc無(wú)相關(guān)性。

表2 PTEN和P27的相關(guān)性

3 討論

3.1 宮頸癌組織中PTEN蛋白表達(dá)及意義 PTEN是迄今為止發(fā)現(xiàn)的第1個(gè)具有雙特異性磷酸激酶活性的抑癌基因。PTEN基因定位于染色體 10q23.3。PTEN具有脂質(zhì)磷酸酶活性，使磷脂酰肌醇(3，4，5)-三磷酸(PIP3)去磷酸化，負(fù)性調(diào)節(jié)PI3K途徑，使細(xì)胞凋亡和(或)抑制細(xì)胞周期進(jìn)程，并誘導(dǎo)其停止G。期，從而抑制細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖［3］。PTEN還具有蛋白磷酸酶活性，可抑制有絲分裂原激活蛋白激酶(MAPK)途徑。MAPK具有酪氨酸蛋白激酶活性，PTEN通過(guò)拮抗促生長(zhǎng)的蛋白酪氨酸激酶而抑制腫瘤的生長(zhǎng)和增殖［4］。PTEN還能使聚集粘連激酶(FAK)去磷酸，抑制其活性，負(fù)性調(diào)節(jié)細(xì)胞的粘連、轉(zhuǎn)移和浸潤(rùn)［5］。由此可見(jiàn)PTEN主要通過(guò)其雙重底物特異性磷酸酶活性，經(jīng)由PI3K信號(hào)系統(tǒng)和MAPK信號(hào)級(jí)聯(lián)途徑發(fā)揮腫瘤抑制作用，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)、凋亡、增殖及黏附產(chǎn)生影響?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)在多種原性惡性腫瘤和腫瘤細(xì)胞系中均有PTEN的基因改變［6］。近年研究發(fā)現(xiàn)，在子宮內(nèi)膜癌、黑色素瘤、頭頸部鱗狀細(xì)胞癌、前列腺癌、肺癌及胃癌等多種腫瘤中存在PTEN基因的缺失或(和)突變。但是其與宮頸癌的關(guān)系研究較少，且結(jié)論不甚一致。張晨麗［7］等研究發(fā)現(xiàn)PTEN在子宮頸鱗癌中陽(yáng)性表達(dá)率為34.5%，在正常子宮頸組織中陽(yáng)性表達(dá)率為88.2%，兩者差異有顯著性(P＜0.01)。PTEN在淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移組中陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于淋巴轉(zhuǎn)移組(P＜0.01)。PTEN表達(dá)與臨床分期呈負(fù)相關(guān)，而與患者年齡、病理分級(jí)無(wú)相關(guān)性(P均＞0.05)。舒寬勇［8］等研究發(fā)現(xiàn)宮頸癌組PTEN蛋白表達(dá)率明顯高于慢性宮頸炎組，與有關(guān)宮頸癌PTEN基因突變編碼蛋白表達(dá)下調(diào)的報(bào)道不相符，本研究發(fā)現(xiàn)PTEN蛋白在宮頸癌組織中陽(yáng)性表達(dá)(32.10%)明顯低于宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN Ⅱ-Ⅲ)(50.00%)、正 常 宮 頸 黏 膜 上 皮(87.50%)，且與宮頸癌組織的分化程度、浸潤(rùn)深度和有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈明顯相關(guān)性，分化程度越低、浸潤(rùn)越深、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移時(shí)PTEN蛋白表達(dá)明顯降低，表明PTEN蛋白表達(dá)水平下調(diào)或缺失在一定程度上促進(jìn)了細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化和腫瘤的形成。

3.2 宮頸癌組織中P27蛋白表達(dá)及意義 P27是周期依賴性蛋白激酶抑制劑家族(cyciin dependentkinase inhibitors，CDKIs)的成員之一，其表達(dá)產(chǎn)物P27蛋白在人體多種惡性腫瘤細(xì)胞增殖和分化的調(diào)控中起著非常重要的作用，它的過(guò)度表達(dá)可使細(xì)胞周期停止在G1中期［9］。Palmqvist等［10］采用免疫組織化學(xué)方法研究了89例結(jié)直腸癌組織中的P27表達(dá)，發(fā)現(xiàn)P27蛋白低水平表達(dá)很普遍。本研究發(fā)現(xiàn)P27蛋白在宮頸癌組織中明顯低表達(dá)，僅為12.50%，且在低分化和有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及浸潤(rùn)深層的腫瘤細(xì)胞中表達(dá)缺失更加明顯，隨著腫瘤分化程度降低，P27表達(dá)也降低，提示P27基因在宮頸癌進(jìn)展中逐漸失去細(xì)胞周期負(fù)調(diào)控能力，使癌細(xì)胞具有更高的惡性程度，這提示P27與腫瘤的預(yù)后及生物學(xué)行為有關(guān)。在無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組P27蛋白陽(yáng)性率(50.00%)明顯高于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(27.27%)，表明P27蛋白在宮頸癌的進(jìn)展及轉(zhuǎn)移過(guò)程中逐漸喪失了作為細(xì)胞周期負(fù)調(diào)控因子的抑癌作用，使得癌細(xì)胞具有更高的惡性程度和侵襲力。另外P27蛋白缺乏還可導(dǎo)致細(xì)胞間粘附力下降，使腫瘤容易轉(zhuǎn)移。

3.3 C-myc基因是發(fā)現(xiàn)較早的原癌基因之一 其編碼蛋白具有轉(zhuǎn)錄因子活性，有促進(jìn)細(xì)胞增殖、調(diào)節(jié)細(xì)胞周期、抑制細(xì)胞分化、參與細(xì)胞凋亡的作用。國(guó)外報(bào)道在女性乳腺癌中C-myc基因擴(kuò)增率在15.7%～25.0%不等，過(guò)度表達(dá)的陽(yáng)性率為22%～45%［11］。Rao［12］等認(rèn)為C-myc在良性增生、非典型增生、乳腺癌中的基因擴(kuò)增是逐漸遞增的。C-myc基因擴(kuò)增在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中具有重要的作用。有研究認(rèn)為，在乳腺癌中標(biāo)記腫瘤內(nèi)部異質(zhì)性的是C-myc和Cyclin D1的擴(kuò)增，而不是CerBb-2的擴(kuò)增［13］。這從側(cè)面證明，C-myc基因擴(kuò)增在乳腺癌的發(fā)展中起著重要作用。趙云霞等研究顯示，C-myc的表達(dá)與乳腺癌分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理類(lèi)型相關(guān)。組織學(xué)分級(jí)高低、淋巴結(jié)有無(wú)轉(zhuǎn)移、臨床病理類(lèi)型相關(guān)。本研究顯示，C-myc的表達(dá)與宮頸癌組織的分化程度、浸潤(rùn)深度和有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈明顯相關(guān)性，分化程度越低、浸潤(rùn)越深、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移時(shí)C-myc蛋白的表達(dá)越高，表明C-myc蛋白表達(dá)水平增高在一定程度上促進(jìn)了細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化和腫瘤的形成。

3.4 PTEN、C-myc和P27蛋白在宮頸癌組織中表達(dá)的相關(guān)性 作為PTEN的下游靶分子之一，P27起著PTEN和底物間的橋梁作用。Bruni等［10］研究甲狀腺癌發(fā)現(xiàn)P27的表達(dá)在癌組織中下降，PTEN的表達(dá)與之平行，二者之間存在著密切的關(guān)聯(lián)。An等［14］報(bào)道在子宮內(nèi)膜癌病例中PTEN和P27蛋白表達(dá)存在相關(guān)性。本研究發(fā)現(xiàn)宮頸癌組織中PTEN和P27蛋白表達(dá)具有相關(guān)性(P＜0.05)，提示PTEN可能通過(guò)上調(diào)P27的表達(dá)來(lái)抑制細(xì)胞周期，達(dá)到抑制腫瘤發(fā)展的作用。C-myc與二者的關(guān)系有待研究。

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