徐 巍 韓媛媛 王金艷 于海榮

(河北省唐山市中醫(yī)醫(yī)院普外科，河北 唐山 063000)

乳結(jié)散的急性及慢性毒理實(shí)驗研究※

徐 巍 韓媛媛 王金艷1于海榮2

(河北省唐山市中醫(yī)醫(yī)院普外科，河北 唐山 063000)

動物，實(shí)驗;毒理學(xué);毒性試驗;中藥，毒性

乳腺增生病是當(dāng)代女性的常見疾病，其發(fā)病率逐年增高，且復(fù)發(fā)率高，臨床治療尚無規(guī)范的方案，中醫(yī)中藥治療有其獨(dú)到的療效。我們自1999年以來應(yīng)用中藥乳結(jié)散治療乳腺增生病取得了良好的臨床療效［1］，為確保乳結(jié)散臨床應(yīng)用的安全性，我們進(jìn)行了乳結(jié)散的實(shí)驗研究，以期為臨床進(jìn)一步推廣應(yīng)用提供毒理學(xué)證據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗動物 清潔級健康SD雌性大鼠40只，體質(zhì)量(200±10)g，用作慢性毒理實(shí)驗;清潔級健康昆明雌性小白鼠30只，體質(zhì)量(20±2)g，用作急性毒理實(shí)驗。均由河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗動物中心提供，動物合格證編號:SCXK(冀)904038。在河北聯(lián)合大學(xué)動物實(shí)驗室喂養(yǎng)，喂以普通飼料(由河北聯(lián)合大學(xué)動物實(shí)驗室按標(biāo)準(zhǔn)配制)，普通飲水。室溫控制在(24±3)℃，濕度(50±10)%，自然光照。

1.1.2 實(shí)驗藥物 乳結(jié)散由河北省唐山市中醫(yī)醫(yī)院制劑室提供，藥物組成:柴胡15 g，丹參 15 g，香附 15 g，白術(shù)15 g，白芍藥 15 g，茯苓 15 g，當(dāng)歸 12 g，海藻 12 g，夏枯草12 g，昆布 12 g，生牡蠣 12 g，川芎 9 g，青皮 9 g，穿山甲珠9 g，三棱9 g，莪術(shù) 9 g，瓜蔞 9 g，桃仁 6 g。濃縮醇提為10 g/袋，相當(dāng)于生藥量210 g。

1.1.3 實(shí)驗儀器 高速臺式離心機(jī)GT16－3(原LG16－3)(北京時代北利離心機(jī)有限公司)，日本Carton光學(xué)顯微鏡(南京高輝機(jī)電貿(mào)易有限公司)，邁瑞B(yǎng)C－5500全自動血細(xì)胞分析儀(深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司)，全自動生化分析儀(濟(jì)南漢方醫(yī)療器械有限公司)。

1.2 實(shí)驗方法

1.2.1 急性毒理實(shí)驗 根據(jù)《中藥、天然藥物研究注冊工作手冊》［2］，選用清潔級健康昆明雌性小白鼠30只，隨機(jī)分為2組，中藥組和空白對照組各15只。中藥組按正常成人口服10 g/d(相當(dāng)于生藥210 g)折算成小白鼠的劑量，每日灌服中藥1次，給藥容積為1 mL/20 g體質(zhì)量，小鼠用藥量相當(dāng)于生藥量1.037 g?？瞻讓φ战M予1 mL/20 g體質(zhì)量0.9%氯化鈉注射液灌服。

1.2.2 慢性毒理實(shí)驗 清潔級健康SD雌性大鼠40只，隨機(jī)分為4組，正常對照組及乳結(jié)散小、中、大劑量組各10只。正常對照組予1 mL/20 g體質(zhì)量0.9%氯化鈉注射液，乳結(jié)散小、中、大劑量組藥物劑量是成人正常用量的5、15、50 倍，即 0.17 g、0.51 g、1.70 g。均為灌胃給藥，每日1次，實(shí)驗周期為3個月。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 急性毒理實(shí)驗 觀察并記錄給藥7 d內(nèi)小白鼠的活動、攝食、排泄及死亡等情況，7 d后處死小白鼠，解剖觀察小白鼠各臟器有無異常變化，計算小白鼠的最大耐受倍數(shù)。最大耐受倍數(shù)=(小白鼠的耐受量×成人平均體質(zhì)量)/(小白鼠平均體質(zhì)量×成人每日用量)［3］。

1.3.2 慢性毒理實(shí)驗 ①一般性指標(biāo):觀察并記錄大鼠的外觀、毛色，社會行為(躁動、冷漠、探究活動)，刺激性(好斗)等和對周圍環(huán)境、食物、水的興趣等，體質(zhì)量變化。記錄有無中途死亡。②給藥結(jié)束次日，頸動脈采血，分析各血液細(xì)胞學(xué)指標(biāo)［白細(xì)胞計數(shù)(WBC)、紅細(xì)胞計數(shù)(RBC)、血紅蛋白(Hgb)、血小板計數(shù)(PLT)］及血液生化學(xué)指標(biāo)［丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、總蛋白(TP)、白蛋白(Alb)、血清尿素氮(BUN)、血清肌酐(Cr)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL－C)、肌酸激酶(CK)］。③處死大鼠后測量心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、腦的臟器系數(shù)(臟器濕質(zhì)量/體質(zhì)量×100%)④病理學(xué)檢查:重要臟器進(jìn)行病理切片，光學(xué)顯微鏡下40倍觀察。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用 SPSS 11.5統(tǒng)計軟件包進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示，采用t檢驗。

2 結(jié)果

2.1 急性毒理實(shí)驗 小白鼠在給藥7 d內(nèi)無死亡，給藥后觀察小鼠外觀、毛色、光澤正常，社會行為、反應(yīng)均正常，攝食、排泄正常。7 d后人工處死解剖，觀察其心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、腦、卵巢、子宮均未見異常。病理學(xué)檢查:蘇木精－伊紅(HE)染色，中藥組臟器表面光滑，組織結(jié)構(gòu)排列有序，細(xì)胞大小、形態(tài)正常，胞漿、胞核染色清晰，與空白對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。計算結(jié)果顯示小白鼠對乳結(jié)散的最大耐受倍數(shù)為成人的250倍。

2.2 慢性毒理實(shí)驗

2.2.1 一般性指標(biāo) 乳結(jié)散小、中、大劑量組和正常對照組大鼠的外觀、毛色，社會行為、刺激性等和對周圍環(huán)境、食物、水的興趣等比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。4組大鼠實(shí)驗后體質(zhì)量均較本組實(shí)驗前增加(P＜0.05)，但4組實(shí)驗后體質(zhì)量比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

2.2.2 4組大鼠實(shí)驗后血液細(xì)胞學(xué)指標(biāo)比較 見表1。

表1 4組大鼠實(shí)驗后血液細(xì)胞學(xué)指標(biāo)比較±s

表1 4組大鼠實(shí)驗后血液細(xì)胞學(xué)指標(biāo)比較±s

組 別 n WBC(×109/L) RBC(×1012/L) Hgb(g/L) PLT(×109/L)正常對照組 10 7.32 ±1.12 6.65 ±0.67 143.21 ±10.65 446.45 ±51.27乳結(jié)散小劑量組 10 7.54 ±1.45 6.89 ±0.59 149.54 ±11.27 412.57 ±63.12乳結(jié)散中劑量組 10 7.44 ±1.29 6.39 ±0.72 146.86 ±12.26 462.88 ±47.83乳結(jié)散大劑量組 10 7.92 ±1.18 6.19 ±0.83 143.35 ±10.17 471.89 ±39.21

由表1可見，4組大鼠實(shí)驗后血液細(xì)胞學(xué)指標(biāo)比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

2.2.3 4組大鼠實(shí)驗后血液生化學(xué)指標(biāo)比較 見表2。

表2 4組大鼠實(shí)驗后血液生化學(xué)指標(biāo)比較±s

表2 4組大鼠實(shí)驗后血液生化學(xué)指標(biāo)比較±s

組 別 n ALT(U/L) AST(U/L) TP(g/L) Alb(g/L)BUN(mmol/L)Cr(μmol/L)LDL－C(U/L) CK(U/L)正常對照組 10 67.32 ±8.12 146.65 ±41.27 60.53 ±8.56 39.36 ±2.56 5.32 ±1.02 60.36 ±9.34 1546.43 ±421.32 2054.68 ±648.12乳結(jié)散小劑量組 10 61.18 ±9.45 163.45 ±47.52 64.31 ±6.45 40.53 ±1.54 6.11 ±1.34 64.75 ±11.62 1288.62 ±358.82 2446.51 ±721.32乳結(jié)散中劑量組 10 60.22 ±8.83 159.61 ±29.25 67.92 ±7.16 38.78 ±1.92 5.48 ±1.21 57.12 ±12.19 1473.71 ±371.68 2246.68 ±558.94乳結(jié)散大劑量組 10 65.58 ±5.68 171.14 ±56.78 67.82 ±3.98 38.28 ±2.16 6.46 ±1.52 59.79 ±10.27 1593.57 ±415.182347.95 ±681.57

由表2可見，4組大鼠實(shí)驗后血液生化學(xué)指標(biāo)比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

2.2.4 4組大鼠實(shí)驗后各重要臟器系數(shù)比較 見表3。

表3 4組大鼠實(shí)驗后各重要臟器系數(shù)比較%，±s

表3 4組大鼠實(shí)驗后各重要臟器系數(shù)比較%，±s

組 別 n 心臟 肝臟 脾臟 肺臟 腎臟 腦正常對照組 10 1.32 ±0.12 10.65 ±1.27 0.56 ±0.06 1.46 ±0.162.32 ±0.11 2.01 ±0.07乳結(jié)散小劑量組 10 1.18 ±0.45 10.45 ±1.24 0.61 ±0.05 1.53 ±0.11 2.11 ±0.09 2.12 ±0.03乳結(jié)散中劑量組 10 1.22 ±0.36 9.61 ±1.12 0.62 ±0.06 1.78 ±0.09 2.24 ±0.12 2.09 ±0.05乳結(jié)散大劑量組 10 1.17 ±0.31 10.11 ±1.09 0.67 ±0.08 1.56 ±0.122.46 ±0.12 2.05 ±0.06

由表3可見，4組大鼠實(shí)驗后各重要臟器系數(shù)比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

2.2.5 4組大鼠實(shí)驗后病理學(xué)檢查 4組大鼠處死后重要臟器行病理切片染色檢查，HE染色。乳結(jié)散組大鼠臟器組織結(jié)構(gòu)排列有序，細(xì)胞大小、形態(tài)正常，胞漿、胞核染色清晰，與正常對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

3 討論

疏肝健脾、活血散結(jié)中藥乳結(jié)散是我們臨床總結(jié)的方劑，此方集“疏肝解郁、散結(jié)祛瘀消癥、活血行氣止痛”為一體，行散結(jié)合共奏療效，臨床觀察對乳腺增生有良好的治療效果［4］，為了對該方劑的安全性進(jìn)行驗證，我們進(jìn)行了急性和慢性毒理學(xué)研究。急性毒理實(shí)驗研究證實(shí)了小白鼠對乳結(jié)散的最大耐受劑量是成人常用量的250倍，慢性毒理實(shí)驗研究證實(shí)了大鼠在接受正常成人乳結(jié)散用量5、15、50倍的給藥劑量下，各血液細(xì)胞學(xué)指標(biāo)、血液生化學(xué)指標(biāo)與正常對照組比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義，證實(shí)了乳結(jié)散藥物的安全性。從急性毒理實(shí)驗來看，2組小白鼠均無1例死亡和中毒，小白鼠的最大耐受量為成人劑量的250倍，一般認(rèn)為小鼠最大耐受量相當(dāng)于成人的臨床常用量的100倍以上即為安全［5］，本實(shí)驗表明乳結(jié)散對小白鼠無急性毒性作用。慢性毒理實(shí)驗研究表明，連續(xù)3個月的給藥，4組大鼠均健康成長，體質(zhì)量增加，毛色光滑，飲食良好，活動自如，對外界環(huán)境反應(yīng)良好。在對實(shí)驗大鼠的體質(zhì)量的觀察中，4組大鼠實(shí)驗后體質(zhì)量均較本組實(shí)驗前增加(P＜0.05)，但4組實(shí)驗后體質(zhì)量比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，表明乳結(jié)散對大鼠的成長無明顯影響。4組大鼠實(shí)驗后血液細(xì)胞學(xué)指標(biāo)和生化學(xué)指標(biāo)比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，各臟器系數(shù)比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，表明乳結(jié)散對實(shí)驗大鼠成長期重要臟器無明顯影響。同時，病理學(xué)檢查未見乳結(jié)散組顯示出明顯的病理形態(tài)學(xué)改變，也證實(shí)了乳結(jié)散的安全性。本實(shí)驗結(jié)果表明，乳結(jié)散口服安全性大，無明顯的急、慢性毒副作用，可以在臨床進(jìn)一步推廣使用。

［1］李霞.乳結(jié)散治療乳腺增生病65例［J］.河北中醫(yī)，2001，23(10):754.

［2］張淑秀，華玉琴.中藥、天然藥物研究注冊工作手冊［M］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:117.

［3］張喜平，程琪輝，張宇.黃芩苷膠囊小鼠急性毒性試驗［J］.醫(yī)學(xué)研究雜志，2006，35(9):16－19.

［4］徐巍，竇淑榮，陳永平，等.乳痛消乳結(jié)散治療乳腺增生106例［J］.陜西中醫(yī)，2006，27(4):438－439.

［5］錢海兵，吳毅偉，韓媛媛，等.滋腎填精益髓類中藥的毒理實(shí)驗研究［J］.陜西中醫(yī)，2010，31(7):918－920.

R－331;R－332;R259.95;R287

A

1002－2619(2012)11－1707－03

※項目來源:河北省中醫(yī)藥管理局2009年度中醫(yī)藥、中西醫(yī)結(jié)合科研計劃課題(編號:2009214)

1 唐山開灤總醫(yī)院趙各莊醫(yī)院內(nèi)三科，河北 唐山 063000

2 河北省灤縣榛子鎮(zhèn)中心衛(wèi)生院，河北 灤縣 063000

徐巍(1975—)，男，副主任醫(yī)師，碩士。從事普外科臨床工作。

2012－05－31)