唐武平

湖南省邵陽市中醫(yī)醫(yī)院，湖南邵陽 422000

大腸癌是最常見的惡性腫瘤之一，全世界大約每年有近100萬的新發(fā)病例，至少有1/2以上的患者因其而死亡。目前，大腸癌的靶向治療已經(jīng)成為臨床研究的熱點和爭論較多的問題。近年來，臨床研究發(fā)現(xiàn)Survivin與腫瘤細胞的凋亡障礙密切相關。Survivin是凋亡抑制蛋白家族的重要成員，既往的研究證實Survivin在大腸癌中上調(diào)表達，過度表達則預后不良，提示該基因在大腸癌發(fā)生發(fā)展中起重要作用[1]。因而，該研究篩選自2006年5月—2008年10月Survivin基因的siRNA以蔓病毒為載體，在大腸癌細胞導入Survivin的siRNA，期望靶向抑制Survivin活性，誘導腫瘤細胞凋亡并促進CPT-11等化療的敏感性，探討大腸癌基因治療與化療相結(jié)合的新方法。

1 資料與方法

1.1 一般資料

前期試驗中構(gòu)建表達并擴增純化的蔓病毒載體pSIHl一H1.copGFP shRNA Vector(7.2 kbp)購于 SBI公司，Survivin siRNALentivirus重組體購自SBI公司，人大腸癌細胞株LOVO購自中國科學院北京細胞研究所。

1.2 方法

1.2.1 腫瘤細胞的培養(yǎng) 將人大腸癌細胞株LOVO細胞培養(yǎng)于10%胎牛血清及1×105U/L青鏈霉素的RPMI1640培養(yǎng)液中，置于37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

1.2.2 伊立替康 (CPT-11)的配置 將CPT-11均勻溶解于DMSO中，置于-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 細胞分組 腫瘤細胞對照組、Survivin siRNA-Lentivirus重組體組、CPT-11組、Survivin siRNA-Lentivirus重組體聯(lián)合CPT-11組。

1.3 統(tǒng)計方法

采用SPSS16.0統(tǒng)計學分析軟件進行統(tǒng)計處理。計量資料用（±s）表示，行 t檢驗。

2 結(jié)果

2.1 人大腸癌細胞株LOVO細胞抑制情況分析

人大腸癌細胞株LOVO細胞培養(yǎng)組細胞未受到抑制，而加入Survivin siRNA-Lentivirus重組體培養(yǎng)后，細胞抑制率為（11.42±2.15）%，加入 CPT-11 后抑制率為（13.51±2.06）%，重組體聯(lián)合CPT-11培養(yǎng)后，細胞抑制率為（47.62±3.17）%，經(jīng)統(tǒng)計學分析，重組體聯(lián)合CPT-11組抑制率顯著高于重組體組及CPT-11組,差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。 結(jié)果見表1。

表1 人大腸癌細胞株LOVO細胞抑制情況分析（%）

2.2 各組腫瘤細胞凋亡率比較分析

對照組腫瘤細胞無凋亡，重組體組腫瘤細胞凋亡率為（3.21±2.13）%，CPT-11 組腫瘤細胞凋亡率為（3.27±2.05）%，重組體聯(lián)合CPT-11組腫瘤細胞凋亡率為（62.34±3.56）%，聯(lián)合組細胞凋亡率明顯高于其他組，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。結(jié)果見表2。

表2 各組腫瘤細胞凋亡率比較分析（%）

3 討論

目前，大腸癌在全球的發(fā)病率呈逐年上升趨勢，提高治療效果、延長生存時間是目前亟待解決的問題。隨著腫瘤分子生物學和基因工程技術的發(fā)展，腫瘤的治療，已不再僅僅局限于傳統(tǒng)的手術、放射及化學治療。目前靶向治療為大腸癌1種治療的新手段，靶向治療藥物能夠特異性地作用于腫瘤發(fā)生，它為大腸癌的治療提供了新的手段。靶向治療是21世紀抗腫瘤治療的重大進展方向。雖然分子靶向藥物本身有一些療效的局限性和毒性反應，但與傳統(tǒng)的細胞毒藥物相比，靶向性好、毒性低、特異性強。隨著腫瘤分子生物學研究的不斷深入，藥物作用機制將會進一步闡明，靶向藥物在大腸癌未來的綜合治療中將會扮演更加重要的角色。

Survivin是凋亡抑制蛋白家族的重要成員，與腫瘤細胞的凋亡障礙密切相關。目前，survivin已成為靶向治療惡性腫瘤的研究的新熱點[2]。國際癌癥組織在篩選抗腫瘤藥物程序中，研究了survivin在體外培養(yǎng)細胞中的表達作用，結(jié)果顯示：人類腫瘤細胞株中均有survivin蛋白的表達，從而說明survivin與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展以及腫瘤的預后不良密切相關。既往的研究也證實Survivin在大腸癌表達上調(diào)，過度表達則預后不良，提示該基因在大腸癌發(fā)生發(fā)展中起重要作用[3]。

該研究結(jié)果顯示，加入Survivin siRNA-Lentivirus重組體和CPT-11培養(yǎng)后，腫瘤細胞均受到抑制，而加入兩者聯(lián)合重組體聯(lián)合CPT-11培養(yǎng)后，細胞抑制率為明顯提高；重組體聯(lián)合CPT-11組腫瘤細胞凋亡率為明顯高于重組體組和CPT-11組；說明Survivin siRNA-Lentivirus重組體和CPT-11均能抑制細胞增殖、促進其凋亡，而Survivin siRNA-Lentivirus重組體可增強腫瘤細胞對化療藥物CPT-11的敏感性。

[1]Kappler M,Rot S,Taubert H,et al.The effects of knockdown of wildtype survivin,survivin-2B or survivin-delta3 on the radiosensitization in a soft tissue sarcoma cells in vitro under different oxygen conditions[J].Cancer Gene Ther,2007,14(12):994-1001.

[2]呂元景,苗素生,賈深汕,等.重組survivin腺病毒對喉癌細胞抗凋亡作用的體外實驗[J].腫瘤防治研究,2011,38(6):615-616.

[3]Xi RC,Biao WS,Gang ZZ.Significant elevation of sur-vivin and livin expression in human colorectal cancer:in-verse correlation between expression and overall survival[J].Onkologie,2011,34(8/9):428-432.