黃麟杰，莊魯江，李 鵬，朱 軍* ，鄭 芳

卡絡(luò)磺鈉是臨床上常用的止血藥，具有四氫吲哚結(jié)構(gòu)，臨床上用于治療上呼吸道、泌尿系統(tǒng)等由于毛細(xì)管通透性增加引起的出血性疾?。?-2］。頭孢他啶屬于半合成的第三代頭孢菌素，具有抗菌譜廣、抗菌活性強(qiáng)的特性。臨床聯(lián)用兩藥預(yù)防和治療出血性感染的情況較為常見，但缺乏有關(guān)兩者聯(lián)用的穩(wěn)定性報(bào)道，因此，筆者參照臨床用藥濃度，應(yīng)用RP-HPLC 方法測定卡絡(luò)磺鈉與頭孢他啶配伍后在6 h 聯(lián)用的含量變化，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與藥品

1.1 儀器 日本島津AEU-210 電子天平，pHS-3D型酸度計(jì)(上海雷磁精密科學(xué)儀器有限公司);戴安UltiMate 3000 高效液相色譜儀(四元低壓梯度系統(tǒng)，DAD 檢測器，變色龍色譜信息管理軟件)，KQ-100DB 型超聲波清洗器(昆山超聲儀器有限公司)。

1.2 藥品與試劑 注射用卡絡(luò)磺鈉(重慶余慶堂制藥有限公司，批號:111201，規(guī)格:40 mg/支);注射用頭孢他啶(商品名:賽之訊，海南海靈化學(xué)有限公司，批號:1110134，規(guī)格:1 g/支);注射用頭孢他啶(商品名:金石，汕頭金石粉針劑有限公司，批號:1108201，規(guī)格:1 g/支);卡絡(luò)磺鈉對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號:100366-200702，規(guī)格:100 mg);頭孢他啶對照品(上海將來試劑公司，批號:1098173，規(guī)格:100 mg，含量99%);0.9%氯化鈉注射液(四川科倫藥業(yè)股份有限公司，批號:11120101-1);磷酸二氫鉀(上海市浦東化學(xué)試劑廠，分析純);磷酸氫二鈉(武漢市江北化學(xué)試劑有限責(zé)任公司，分析純);乙腈(天津市科密歐化學(xué)試劑有限責(zé)任公司，色譜純);水為單位自制純化。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱:phenomenex Prodigy 5u ODS3 C18(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:乙腈-磷酸緩沖鹽(8∶92，磷酸緩沖鹽的配制:無水磷酸二氫鉀27.22 g，磷酸氫二鈉42.59 g，溶于1 000 mL蒸餾水)［3］;流速:1.0 mL/min;檢測波長:254 nm(頭孢他啶)，363 nm(卡絡(luò)磺鈉);柱溫:25 ℃;進(jìn)樣量:20 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液 精密稱取頭孢他啶對照品與卡絡(luò)磺鈉對照品各適量，分別用流動相制成濃度為2.031 mg/mL 頭孢他啶對照品溶液、0.802 mg/mL卡絡(luò)磺鈉對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液 取兩個(gè)不同廠家的注射用頭孢他啶各1 支，分別溶解于100 mL 0.9%氯化鈉注射液中，混勻，即得;另取注射用卡絡(luò)磺鈉1支，溶解于100 mL 0.9%氯化鈉注射液中，混勻，即得。

2.2.3 配伍溶液 取兩個(gè)廠家同批號的注射用頭孢他啶各1 支，分別與同批號的注射用卡絡(luò)磺鈉平行注入兩個(gè)同批號的100 mL 0.9%氯化鈉溶液中，混勻，即得。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 取“2.2.1”項(xiàng)下對照品溶液，用流動相稀釋20 倍，按“2.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣，記錄色譜圖。在此條件下，頭孢他啶、卡絡(luò)磺鈉保留時(shí)間分別為3.87、5.26 min，其色譜峰理論塔板數(shù)均＞2 000，分離度＞1.5，主峰DAD 匹配度均不低于999.91，說明專屬性良好(見圖1)。

圖1 色譜圖

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密量取“2.2.1”項(xiàng)下卡絡(luò)磺鈉、頭孢他啶對照品溶液各1、2、5、8、10 mL，分別置于100 mL 容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻。在“2.1”項(xiàng)下進(jìn)樣，記錄色譜圖，以峰面積(Y)為縱坐標(biāo)、進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得卡絡(luò)磺鈉的標(biāo)準(zhǔn)曲線:Y卡= 1.57X卡+1.29 (r = 0.999 3，n = 5)，線性范圍:8 ～80 μg/mL;同法測得頭孢他啶的標(biāo)準(zhǔn)曲線:Y頭=1.21X頭+8.88 (r =0.999 3，n =5)，線性范圍:20.3 ～203 μg/mL?？ńj(luò)磺鈉與頭孢他啶均處于線性范圍內(nèi)。

2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取“2.2.1”項(xiàng)下對照品溶液，分別用流動相稀釋20 倍，得到101.5 μg/mL頭孢他啶對照品溶液、40.0 μg/mL 卡絡(luò)磺鈉對照品溶液。在“2.1”項(xiàng)下，重復(fù)進(jìn)樣6 次，測定峰面積，結(jié)果頭孢他啶與卡絡(luò)磺鈉峰面積的RSD 分別為0.53%、0.64%。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品，按“2.2.2”項(xiàng)供試液配制方法，平行制備6 份，分別用流動相稀釋100、10 倍進(jìn)樣，記錄峰面積，結(jié)果測得頭孢他啶含量的RSD 分別為0.56%、1.84%;卡絡(luò)磺鈉含量的RSD 為0.92%。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 配制兩個(gè)廠家的100 μg/mL頭孢他啶樣品溶液與40.0 μg/mL 卡絡(luò)磺鈉樣品溶液，置于25 ℃下，分別于0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 h 在“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，測定峰面積。結(jié)果頭孢他啶與卡絡(luò)磺鈉峰面積RSD 分別為1.63%、1.79%、1.27%。說明頭孢他啶與卡絡(luò)磺鈉樣品溶液在4 h 內(nèi)保持穩(wěn)定(n=6)。

2.8 加樣回收率試驗(yàn) 取已知含量的注射用頭孢他啶與注射用卡絡(luò)磺鈉配伍液適量，精密加入高、中、低3 種不同濃度的頭孢他啶與卡絡(luò)磺鈉對照品溶液適量，混勻，用流動相分別稀釋10 倍，在“2.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測定，記錄峰面積，并計(jì)算回收率，結(jié)果頭孢他啶與卡絡(luò)磺鈉的回收率分別為99.56%、99.61%，見表1。

2.9 配伍穩(wěn)定性試驗(yàn)

2.9.1 配伍液的制備 按“2.2.3”項(xiàng)操作，置于室溫條件下保存。

2.9.2 外觀與pH 值變化 取上述配伍溶液適量，室溫條件下，在0、1.0、2.0、3.0、4.0、6.0 h，用納氏比色管觀察顏色變化，測定溶液的pH 值。見表2。

2.9.3 相對百分含量變化 在上述時(shí)間間隔，取上述配伍液適量，用純化水分別稀釋100、10 倍，在“2.1”項(xiàng)色譜條件下測定，計(jì)算配伍液中不同廠家的頭孢他啶與卡絡(luò)磺鈉含量，以0 h 藥物含量為100%，計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)相對百分含量，結(jié)果見表2、表3。

3 討論

頭孢他啶具有很強(qiáng)的親水性，屬于強(qiáng)極性物質(zhì)，在色譜柱保留時(shí)間短，易被流動相洗脫;而卡絡(luò)磺鈉屬于中等極性物質(zhì)，與色譜柱固定相親和力較強(qiáng)，在柱中保留時(shí)間長，之后被洗脫。筆者在等度洗脫條件下同時(shí)測定兩者的含量，考慮兩者的極性以及與固定相親和力的大小，參考相關(guān)文獻(xiàn)［4-5］，使用不同比例、乙腈-磷酸緩沖鹽液進(jìn)行了方法學(xué)考察，最終確定在“2.1”項(xiàng)下色譜條件下，頭孢他啶與卡絡(luò)磺鈉峰形較好，理論塔板數(shù)較高，兩色譜峰獲得較好的分離，符合含量測定要求。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

表2 注射用頭孢他啶(賽之迅)與注射用卡絡(luò)磺鈉配伍后外觀、pH 值及含量變化

表3 注射用頭孢他啶(金石)與注射用卡絡(luò)磺鈉配伍后外觀、pH 值及含量變化

由于頭孢他啶(1 mg/mL)與卡絡(luò)磺鈉(0.4 mg/mL)的臨床配伍濃度差別大，兩種藥物各自在254 nm、363 nm 有最大吸收，且于最大吸收波長處相互無干擾，所以，筆者采用分別用純化水稀釋100、10 倍，并在其最大吸收處測定各自含量，同時(shí)平行比較不同廠家的頭孢他啶與同一卡絡(luò)磺鈉配伍時(shí)的含量變化。

注射用頭孢他啶與注射用卡絡(luò)磺鈉在0.9%氯化鈉注射液中配伍后，在25 ℃下，6 h 內(nèi)混合液黃色澄明，未見任何顏色改變、氣泡生成及肉眼可見的沉淀產(chǎn)生，pH 值變化范圍小，不明顯。采用HPLC 法同時(shí)測定配伍液中兩組分的含量，在6 h內(nèi)，卡絡(luò)磺鈉與頭孢他啶均無明顯變化。結(jié)果表明，注射用頭孢他啶與注射用卡絡(luò)磺鈉在0.9%氯化鈉注射液中配伍后，配伍溶液6 h 內(nèi)保持穩(wěn)定。

［1］ 耿書軍，劉建玲，馮玉英. 肺結(jié)核咯血內(nèi)科治療對比分析［J］.中國美容醫(yī)學(xué)，2011，20(2):29.

［2］ 周水根，劉放.反相高效液相色譜法測定注射用卡絡(luò)磺鈉注射液的含量和有關(guān)物質(zhì)［J］.海峽藥學(xué)，2007，19(10):34-36.

［3］ 國家藥典委員會.中國藥典(二部)［S］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2011.

［4］ 黃順旺，許龍，曹明成.HPLC 法測定卡絡(luò)磺鈉葡萄糖注射液中卡絡(luò)磺鈉的含量［J］.安徽醫(yī)藥，2008，12(2):120-121.

［5］ 姜紅梅，鄭芳，朱雪松.卡絡(luò)磺鈉注射液與注射用頭孢西丁鈉配伍的穩(wěn)定性［J］.醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2010，29(9):1227-1229.