李 彬

山東泰安市中醫(yī)醫(yī)院外科 泰安 271000

環(huán)氧合酶(COX)是PGS(前列腺素類)生物合成的限速酶。近年來發(fā)現(xiàn)COX－2在腫瘤發(fā)生、發(fā)展、分化、轉(zhuǎn)移和預(yù)后等方面可能有重要作用，本文就COX－2蛋白在食管癌中的表達(dá)及在食管癌發(fā)生、發(fā)展中的作用進(jìn)行研究。

1 材料和方法

1.1 標(biāo)本 取自山東省泰安市中醫(yī)醫(yī)院2008－06－2010－06食管癌患者的活檢組織和術(shù)后標(biāo)本，正常食管黏膜鱗狀上皮6例，單純增生8例，輕、中、重度不典型增生分別6、4、4例，食管鱗狀細(xì)胞癌43例。

1.2 試劑 鼠抗人環(huán)氧化物酶2單克隆抗體工作液與SPStrepavidin/Peroxidase Kit均購自北京中山生物技術(shù)有限公司。

1.3 方法 辣根過氧化酶標(biāo)記的SP法:(1)石蠟切片，常規(guī)脫蠟至水。(2)3%過氧化氫孵育5～10 min。(3)蒸餾水沖洗，PBS(pH 7.2)浸泡5 min。(4)置枸酸鹽緩沖液(pH 6)中，微波爐抗原修復(fù)5～10 min，冷卻至室溫。(5)滴加正常山羊血清工作液，室溫孵育10～15 min。(6)滴加一抗，37℃孵育1～2 h。(7)PBS沖洗，3 min×3次。(8)滴加二抗，37℃孵育10～15 min。(9)PBS沖洗，3 min×3次。(10)辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液，37℃孵育10～15 min。(11)PBS沖洗，3 min×3次。(12)DAB顯色。(13)自來水充分水洗，蘇木素復(fù)雜，脫水，透明，封片。

2 結(jié)果

COX－2蛋白表達(dá)定位于細(xì)胞漿，＞10%病變細(xì)胞的細(xì)胞漿出現(xiàn)棕黃色的顆粒者判定為陽性(+)，25% ～50%判定為陽性(++)，＞50%判定為陽性(+++)。不同病變食管組織COX－2蛋白免疫組化染色結(jié)果及統(tǒng)計分析見表1。

正常組和單純增生組為對照組。對照組中未發(fā)現(xiàn)COX－2蛋白表達(dá);50%(1/4)中度不典型增生有COX－2蛋白表達(dá)，食管鱗狀細(xì)胞癌組為74%(32/43)。COX－2蛋白表達(dá)與淋巴轉(zhuǎn)移、浸潤深度、腫物大小及臨床分期關(guān)系見表2。

經(jīng)x2檢驗，COX－2蛋白表達(dá)，在食管癌臨床分期I～I(xiàn)I期和III～I(xiàn)V期間，二者差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。COX－2蛋白表達(dá)，與淋巴轉(zhuǎn)移、浸潤深度、腫物大小無關(guān)。

表1 不同病變食管組織中COX－2蛋白免疫組化染色結(jié)果

表2 COX－2蛋白表達(dá)與淋巴轉(zhuǎn)移、浸潤深度、腫物大小及臨床分期關(guān)系 ［n(%)］

3 討論

環(huán)氧合酶(cyclooxgease，COX)又名前列腺素過氧化物合成酶，通過COX活性催化花生四稀酸(AA)轉(zhuǎn)化為前列腺素G2(PGG2)，通過過氧化酶活性催化PGG2轉(zhuǎn)化成PGH2。PGH2被單個的合成酶或還原酶作用才能轉(zhuǎn)化成具有活性的終產(chǎn)物如PGE2、PGF2等。COX－2 mRNA及蛋白質(zhì)在組織中表達(dá)水平增高很可能是腫瘤發(fā)生的早期標(biāo)志。許多實驗者在活體腫瘤標(biāo)本中發(fā)現(xiàn)有COX－2的表達(dá)。Zimmerman等［1］檢測了食管癌中COX－2表達(dá)，發(fā)現(xiàn)91%(n=172)的食管鱗狀細(xì)胞瘤、78%的食管腺癌中COX－2免疫組化染色陽性。Uefuji等［2］檢測了23例胃腺癌標(biāo)本，其中19例有COX－2蛋白表達(dá)，占83%。諸多結(jié)果提示，COX－2過度表達(dá)在消化系腫瘤中起重要作用。

免疫組化染色COX－2的蛋白質(zhì)發(fā)現(xiàn)絕大多數(shù)腺癌和幾乎全部鱗癌均為陽性，并且腺癌的染色密度強于鱗癌。Tsujii等［6］用COX－2表達(dá)載體永久性轉(zhuǎn)移鼠腸上皮細(xì)胞(RIE)發(fā)現(xiàn)COX－2過表達(dá)，細(xì)胞對基質(zhì)黏附性增加，E－鈣粘連素水平下降，有證據(jù)支持后者可能是侵襲抑制因素。增加的黏附性、下調(diào)的E－鈣粘連素與瘤細(xì)胞的局部浸潤有關(guān)。Murata等［7］發(fā)現(xiàn)在人的食管癌組織中，COX－2過表達(dá)與食管壁淋巴管浸潤、區(qū)域淋巴轉(zhuǎn)移程度明顯相關(guān)，與病理參數(shù)如解剖部位、原位腫瘤浸潤深度、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、組織病理分級或食管壁靜脈浸潤無關(guān)。以上實驗均提示COX－2過表達(dá)在增加腫瘤發(fā)生的同時，也增加其轉(zhuǎn)移的潛能。因此，COX－2蛋白的表達(dá)與食管癌的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切，是食管癌發(fā)生發(fā)展中的一個重要指標(biāo)，可作為食管癌可疑病例定期隨訪的指標(biāo)之一。

［1］Zimmermann KC，Sarbia M，WeberAA，et al.COX － 2 espression in human esophageal carcinoma.Cancer pancreatic cancer［J］.Res，1999，59(1):198.

［2］Uefuji K，Ickikura T，Mochizuki H，et al.Expression of COX －2 protein in gastric adenocarcninma［J］.J Surg Oncol，1998，69(3);168.

［3］Tsujii M，DuBois RN，Alterations is cellulaiadhesion and apoptos is in epithelial cells overexpression COX － 2［J］.Cell，1995，83:493.

［4］Murata H，Kawano S，Tsuji S，et al.Cyclooxygenase －2over esprission enhanxes lymphatic lymphatic invasion and metastas is in human gastric carcinoma［J］.Am J Gastroenterology，1999，4(2):451.