吉林省長(zhǎng)春市水產(chǎn)研究院 孫 麗 郭貴良

吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院 韓宇田 蘆洪梅

吉林省東遼縣安西水庫(kù) 安長(zhǎng)春

維生素C又名抗壞血酸，具有參與體內(nèi)氧化還原反應(yīng)，在細(xì)胞抗氧化、膠原蛋白形成、機(jī)體免疫調(diào)節(jié)、鐵離子的吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)等方面起著重要作用。作為脯氨酸和賴(lài)氨酸羥化酶的輔酶參與膠原蛋白形成，對(duì)結(jié)締組織、創(chuàng)傷愈合時(shí)組織和骨骼的形成有重要作用，同時(shí)它能促進(jìn)養(yǎng)殖動(dòng)物快速生長(zhǎng)、緩解應(yīng)激、增強(qiáng)機(jī)體抗感染能力 （Wali等，2003；Merchie等，1996）。除少數(shù)魚(yú)類(lèi)如鱘類(lèi)、鯊魚(yú)和鰻等魚(yú)類(lèi)具有合成維生素C的能力，但大多數(shù)魚(yú)類(lèi)因體內(nèi)缺乏L-古酪糖酸內(nèi)酯氧化酶活性而不具備合成維生素C的能力，這些魚(yú)類(lèi)必須從飼料中獲得維生素C才能滿(mǎn)足需要 （Dabrowski和Cierezko，2001）。歐亞鱸（Perca fluviatilis）屬鱸形目、鱸科、鱸屬、又稱(chēng)河鱸、五道黑、五彩斑魚(yú)和赤鱸等。為肉食性?xún)疵汪~(yú)類(lèi)，廣泛分布于歐洲及亞洲北部冷溫帶，在我國(guó)僅產(chǎn)于新疆的額爾齊斯河、烏倫古河水域和博斯騰湖，是一種名貴的冷溫帶淡水名優(yōu)土著品種。該魚(yú)肉質(zhì)鮮嫩，爽滑少刺，富含人體必需氨基酸，富含蛋白質(zhì)，脂肪含量較低，是淡水魚(yú)類(lèi)中的珍品，深受消費(fèi)者青睞。具有廣鹽性和廣溫性、生長(zhǎng)速度快，尤其適應(yīng)常年水溫較低的水庫(kù)養(yǎng)殖和抗病力強(qiáng)等特點(diǎn)。歐亞鱸營(yíng)養(yǎng)需要研究才剛起步，對(duì)其蛋白質(zhì)和蛋能比等營(yíng)養(yǎng)需求有些報(bào)道 （Mathis等，2003；Fiogb 和 kestemontay，1996）。然而迄今為止未見(jiàn)其飼料中維生素C適宜含量的報(bào)道。本研究旨在了解歐亞鱸幼魚(yú)配合飼料中維生素C的適宜含量，為開(kāi)發(fā)高效的配合飼料提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)用魚(yú) 試驗(yàn)用歐亞鱸初始體重 （7.46±0.29）g，體質(zhì)健康，規(guī)格一致，購(gòu)于河北石家莊特種養(yǎng)殖場(chǎng)。先放入暫養(yǎng)池中，挑選規(guī)格整齊、體質(zhì)健康的魚(yú)900尾，用食鹽水溶液消毒后，放養(yǎng)于室內(nèi)玻璃缸中。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與試驗(yàn)飼料 在基礎(chǔ)飼料中分別添加維生素 C 0、50、100、200、400、800 mg/kg，以微晶纖維素為填充劑，使各試驗(yàn)組飼料其他營(yíng)養(yǎng)水平保持一致，不添加維生素C的基礎(chǔ)飼料飼喂組為對(duì)照組，共6個(gè)處理組，每個(gè)處理組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)30尾魚(yú)。試驗(yàn)用維生素C源為維生素C多聚磷酸酯 （羅氏公司，維生素C含量為35.0%）?；A(chǔ)飼料配方及主要營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)見(jiàn)表1。主要飼料原料均粉碎使其能全部通過(guò)0.45 mm的分析篩，再按比例混合和攪拌均勻后擠壓成直徑約為1.0 mm的顆粒，風(fēng)干后置于-4℃冷柜中保存、備用。

1.3 飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)開(kāi)始前用基礎(chǔ)飼料馴養(yǎng)15 d，以適應(yīng)環(huán)境和試驗(yàn)飼料。養(yǎng)殖試驗(yàn)于2011年4月9日至6月4日在室內(nèi)玻璃缸 （80 cm×60 cm×50cm），每缸放養(yǎng)60尾。試驗(yàn)開(kāi)始后，每日于09∶00和17∶00投喂2次，投飼量為魚(yú)體質(zhì)量的2.5% ～4.0%，并根據(jù)生長(zhǎng)、攝食情況作適當(dāng)調(diào)整，養(yǎng)殖期間24 h不間斷充氣，試驗(yàn)期間水溫為23～30℃，pH為7.1±0.1，溶解氧大于5.0 mg/L，氨氮小于0.5 mg/L，養(yǎng)殖時(shí)間為56 d。

表1 基礎(chǔ)飼料及營(yíng)養(yǎng)水平

1.4 測(cè)定指標(biāo)與方法

1.4.1 生長(zhǎng)指標(biāo) 養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束，饑餓24 h后，稱(chēng)每缸魚(yú)的總質(zhì)量，計(jì)算增重率、蛋白質(zhì)效率和成活率。

式中，I為攝入飼料的干質(zhì)量，g；W0和 Wt為初末魚(yú)體的總質(zhì)量，g；Wd為死魚(yú)的總質(zhì)量，g；CP為飼料蛋白質(zhì)的含量，%。

1.4.2 肝組織中維生素C的測(cè)定 從每個(gè)重復(fù)中取3尾歐亞鱸，解剖取得魚(yú)體的肝臟，用聯(lián)菲羅啉測(cè)定法測(cè)定肝臟中維生素C含量，整個(gè)操作過(guò)程均在冰盤(pán)上進(jìn)行。

1.4.3 歐亞鱸擁擠脅迫前后血糖的測(cè)定 養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，將各組魚(yú)轉(zhuǎn)移到直徑為50 cm的塑料桶中，每桶加入10 L水，使其密度為110 g/L，試驗(yàn)魚(yú)在擁擠和限制的環(huán)境中脅迫1 h，然后放回到原來(lái)的養(yǎng)殖系統(tǒng)中，同樣做3個(gè)重復(fù)，分別在脅迫開(kāi)始前（對(duì)照）和脅迫后 0、3、12、24、48 h 取樣，每個(gè)時(shí)間段每組取5尾魚(yú)，采樣前，隨機(jī)快速撈取幼魚(yú)，立即投入濃度為200 mg/L的MS-222中作快速深度麻醉，用一次性醫(yī)用注射器從尾靜脈取血，4℃靜置 24 h后，2500 r/min離心 10 min，分離血清，-20℃保存?zhèn)溆?。?yīng)激期間不投餌，應(yīng)激結(jié)束恢復(fù)期間正常投餌。采用葡萄糖氧化酶—過(guò)氧化物酶法測(cè)定血糖含量。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析 采用SPSS 10.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，用Duncan’s多重比較分析組間差異顯著性程度，顯著性水平為P＜0.05。

2 結(jié)果

2.1 飼料中不同水平的維生素C對(duì)歐亞鱸生長(zhǎng)性能的影響 攝食添加不同含量維生素C的試驗(yàn)飼料8周后，試驗(yàn)魚(yú)的成活率、魚(yú)體增重、飼料系數(shù)、蛋白質(zhì)效率見(jiàn)表2。維生素C添加組的成活率都顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）；飼料中維生素C添加量從0.0升高到100 mg/kg時(shí)，魚(yú)體增重呈現(xiàn)出上升趨勢(shì)，添加量為100 mg/kg時(shí)，顯著高于未添加組（P＜0.05），但添加量繼續(xù)增大，魚(yú)體增重率無(wú)顯著變化（P＞0.05），不同維生素C水平對(duì)河鱸魚(yú)種生長(zhǎng)性能的影響擬合成兩條直線，Y1=0.5582X1+150.63，Y2=-0.0011X2+202.97 二者的交點(diǎn)對(duì)應(yīng)的維生素C的含量為93.58 mg/kg，經(jīng)折線模型分析表明，歐亞鱸幼魚(yú)達(dá)到最大生長(zhǎng)時(shí)，飼料中的維生素C的最低添加量93.58 mg/kg。飼料中維生素C添加量為100 mg/kg時(shí)，飼料系數(shù)最低，添加量繼續(xù)增大，則不再顯著，并維持在同一水平上；飼料中維生素C添加量高于50 mg/kg時(shí)，蛋白質(zhì)效率則顯著升高（P＜0.05）。

2.2 飼料中不同水平的維生素C對(duì)歐亞鱸肝臟中維生素C含量的影響 由表2可見(jiàn)，歐亞鱸肝臟中維生素C含量隨飼料中維生素C添加量（0～200 mg/kg）的增大而不斷上升，但添加量繼續(xù)升高，則肝臟中維生素C不再有顯著變化，達(dá)到飽和狀態(tài)，不同維生素C水平對(duì)歐亞鱸肝臟維生素C的影響擬合成兩條直線，Y1=0.0076X1+2.642，Y2=-0.002X2+4.075二者的交點(diǎn)對(duì)應(yīng)的維生素C的含量為149.27 mg/kg。經(jīng)折線分析表明，肝臟中維生素C達(dá)到飽和時(shí)，飼料中的維生素C的最低添加量149.27 mg/kg。

表2 不同維生素C水平對(duì)歐亞鱸魚(yú)種生長(zhǎng)性能的影響

2.3 不同維生素C水平對(duì)歐亞鱸魚(yú)種擁擠脅迫前后血糖的影響 見(jiàn)表3。急性脅迫前，各組血糖之間無(wú)顯著差異（P＞0.05），脅迫后，各組在0～24 h間的變化趨勢(shì)相類(lèi)似，都是脅迫后3 h達(dá)到高峰，然后開(kāi)始下降，但到脅迫后24 h還沒(méi)有完全恢復(fù)到脅迫前的水平。血糖受到飼料中添加維生素C的顯著影響（P＜0.05），血糖升高峰值最低的和血糖恢復(fù)接近脅迫前的水平的都是飼料中維生素C為400～800 mg/kg組。

3 討論

關(guān)于魚(yú)類(lèi)對(duì)維生素C的需要量的確定，多采用生長(zhǎng)、組織維生素C的沉積和免疫需要量等指標(biāo)來(lái)評(píng)定（陳建明等，2007；Foumier等，2000；秦啟偉等，2000）。具體評(píng)定時(shí)，由于維生素C的來(lái)源、試驗(yàn)動(dòng)物、試驗(yàn)條件、養(yǎng)殖時(shí)間和評(píng)定指標(biāo)的差異變化很大 （陳建明等，2007； 王吉橋等，2005；Ai等，2004；Foumier等，2000；秦啟偉等，2000）。以增重率為指標(biāo)，多數(shù)養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)對(duì)維生素C的最適生長(zhǎng)需要量為50～100 mg/kg，本試驗(yàn)以魚(yú)體平均增重率為指標(biāo)，得到河鱸魚(yú)種達(dá)到最大生長(zhǎng)時(shí)，飼料中的維生素C的最低添加量93.58 mg/kg。而有研究表明，軍曹魚(yú)（趙紅霞等，2008）和翹嘴舶魚(yú)種（陳建明等，2007）對(duì)維生素C的最適需要量分別為70 mg/kg和53 mg/kg。魚(yú)類(lèi)肝臟是維生素C的主要代謝場(chǎng)所，也是維生素積累和發(fā)揮作用的主要器官。對(duì)雜交羅非魚(yú)（Shiau和 Hsu，1999）、點(diǎn)帶石斑魚(yú)（周歧存等，2005）和中華鱘（高強(qiáng)等，2006）等的研究表明，肝臟中維生素C積累量則隨飼料維生素C添加水平提高而顯著上升。周歧存等（2005）和 Foumier等（2000）用肝臟維生素 C 飽和濃度估算魚(yú)類(lèi)對(duì)維生素C需要量。本試驗(yàn)中通過(guò)折線模型得出肝臟中維生素C達(dá)到飽和時(shí)的飼料中的維生素C的最低添加量149.27 mg/kg。肝臟達(dá)到飽和時(shí)維生素C需要量要高于以生長(zhǎng)速度作為評(píng)價(jià)指標(biāo)的數(shù)值。這與Gouillou等（1998）和陳建明等（2007）報(bào)道一致。

表3 不同維生素C水平對(duì)歐亞鱸魚(yú)種擁擠脅迫前后血糖的影響

魚(yú)類(lèi)在應(yīng)激和病害侵襲條件下需要更多的維生素C來(lái)維持其生理功能和抗病力，以免疫學(xué)指標(biāo)來(lái)確定需要量時(shí)，需要量往往高于通過(guò)生長(zhǎng)指標(biāo)確定的值（王吉橋等，2005；Ai等，2004；秦啟偉等，2000）。以血清皮質(zhì)醇含量、溶菌酶活力和補(bǔ)體活性為指標(biāo)時(shí)，金頭鯛維生素C的適宜含量為250 mg/kg，以抗病力為指標(biāo)時(shí)，金頭鯛維生素C的適宜含量為 300 ～ 500 mg/kg（Alexis等，1999）。本試驗(yàn)中，從抗擁擠脅迫等判據(jù)來(lái)看，急性脅迫前，各組血葡萄糖之間無(wú)顯著差異，脅迫后，血糖升高峰值最低的和血糖恢復(fù)接近脅迫前的水平最快的都是飼料中維生素C為400～800 mg/kg，表明歐亞鱸幼魚(yú)在抗擁擠脅迫過(guò)程中需要較高水平的維生素C來(lái)完成。綜上所述，歐亞鱸幼魚(yú)生長(zhǎng)性能最佳的飼料維生素C需要量是93.58 mg/kg，獲得肝臟維生素C飽和沉積的維生素C的需要量是149.27 mg/kg，需要400～800 mg/kg水平的維生素C來(lái)抵抗擁擠脅迫。

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