王 妍 鄭吉春 岳 穎 李德昌 任 力

(河北北方學(xué)院，河北 張家口 075000)

淋巴道轉(zhuǎn)移乳腺癌轉(zhuǎn)移的最主要途徑。隨著淋巴管生長(zhǎng)因子和淋巴管內(nèi)皮特異標(biāo)記物的發(fā)現(xiàn)，腫瘤及腫瘤周圍組織是否存在新生的淋巴管及其與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的機(jī)制一直是研究熱點(diǎn)。本文采用免疫組織化學(xué)技術(shù)，檢測(cè)乳腺癌中D2-40標(biāo)記的淋巴管密度，探討腫瘤淋巴管形成與淋巴道轉(zhuǎn)移的相關(guān)性，作為評(píng)估乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的一項(xiàng)輔助指標(biāo)，為判斷乳腺癌患者預(yù)后提供實(shí)驗(yàn)和理論依據(jù)〔1〕。

1 材料與方法

1.1 材料 收集空軍總醫(yī)院病理科2003年1月至2011年5月經(jīng)病理證實(shí)為乳腺癌的標(biāo)本62例，5例正常乳腺組織為對(duì)照。所有病例均為女性，年齡20～81歲，中位年齡54歲，絕經(jīng)前25例，絕經(jīng)后37例。腫塊最大直徑≤2 cm 21例，2～5 cm 36例，＞5 cm 5例。所有病例術(shù)前均未進(jìn)行放化療治療。按2003年WHO乳腺腫瘤組織學(xué)分類，均為浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌，腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移25例，無(wú)腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移37例。

1.2 方法 免疫組化SP法D2-40染色標(biāo)記腫瘤淋巴管。CD31，CD34染色標(biāo)記腫瘤微血管。乳腺癌組織石蠟標(biāo)本4μm厚連續(xù)切片，SP免疫組織化學(xué)染色，以PBS液代替一抗為陰性對(duì)照，已知陽(yáng)性結(jié)腸癌組織為陽(yáng)性對(duì)照(隨試劑附帶)。鼠抗人D2-40單克隆抗體(編號(hào)ZM-0465，即用型)，PV-9000二步法免疫組化檢測(cè)試劑盒。以上試劑均購(gòu)自北京中山金橋生物公司。

1.3 結(jié)果判斷 淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞特異性標(biāo)志物D2-40免疫組織化學(xué)染色，可見淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞膜和(或)胞漿呈棕黃色顆粒，直觀顯示淋巴管壁薄、形態(tài)不規(guī)則、管腔較大，內(nèi)皮細(xì)胞核相對(duì)較稀疏或呈疊狀。血管內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志物CD31，CD34免疫組織化學(xué)染色陽(yáng)性表達(dá)，內(nèi)皮細(xì)胞與基膜均著色者判定為微血管，光鏡下難以區(qū)分者暫判為微血管。先在光鏡低倍(10×4)視野下尋找癌周組織淋巴管最密集區(qū)域即熱點(diǎn)，然后在200倍視野下觀察染色成棕黃色的管腔、單個(gè)細(xì)胞或成群無(wú)管腔的染色細(xì)胞及細(xì)胞叢并以此作為一個(gè)微淋巴管，計(jì)數(shù)時(shí)距離癌主質(zhì)邊緣超過(guò)100μm的微脈管不計(jì)入癌周微淋巴管數(shù)，管腔直徑＞50μm或管壁含有肌層者不作為微淋巴管。單位面積的微淋巴管數(shù)即微淋巴管密度。觀察5個(gè)200倍視野內(nèi)(0.74 mm2/視野)的淋巴管數(shù)，取其平均值為微淋巴管數(shù)。計(jì)算LMVDpt的均數(shù)，大于均數(shù)的歸為高LMVDpt組，低于或等于該均數(shù)的歸為低LMVDpt組。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)或方差分析法。

2 結(jié)果

2.1 LMVD的分布形態(tài)和分布特點(diǎn) 微淋巴管的“熱點(diǎn)”區(qū)域絕大多數(shù)位于癌巢周邊部組織內(nèi)，腫瘤內(nèi)部間質(zhì)中分布較少，在癌巢內(nèi)的分布極少，本組62例乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌癌巢組織內(nèi)均未見微淋巴管。與乳腺纖維腺瘤組織相比，乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌癌周組織淋巴管數(shù)量增多，形態(tài)不規(guī)則，管腔變薄，部分呈閉塞狀態(tài)，部分?jǐn)U張明顯，呈條索狀或叢狀，圍繞癌組織成環(huán)狀分布，部分癌周淋巴管內(nèi)可見瘤栓。見圖1。

2.2 轉(zhuǎn)移與未轉(zhuǎn)移組LMVD比較 乳腺癌轉(zhuǎn)移者與未轉(zhuǎn)移者LMVD比較，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。有腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌LMVD pt為(16.97±4.79)，無(wú)腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌的LMVDpt值(11.47±3.96)，有腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組明顯高于無(wú)腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.004 4)。

圖1 癌周淋巴管病理學(xué)改變(×100)

3 討論

目前許多研究表明腫瘤的微血管密度與腫瘤惡性程度、血道轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)及預(yù)后密切相關(guān)〔3〕。淋巴管和血管伴行生長(zhǎng)，但在結(jié)構(gòu)和功能方面存在著明顯的差別。腫瘤組織的LMVD可從一個(gè)側(cè)面反映出腫瘤組織和腫瘤細(xì)胞的微環(huán)境狀態(tài)，對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖、生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移起著至關(guān)重要的作用。國(guó)外學(xué)者報(bào)道腫瘤內(nèi)淋巴管數(shù)除與淋巴道轉(zhuǎn)移有關(guān)外，與腫瘤惡性程度、血道轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)及預(yù)后密切相關(guān)，淋巴管數(shù)是評(píng)估惡性腫瘤預(yù)后獨(dú)立預(yù)測(cè)因子，其意義可等同于微血管計(jì)數(shù)〔4，5〕。

光鏡下觀察淋巴管形態(tài)，癌巢內(nèi)未發(fā)現(xiàn)明顯的成形淋巴管，偶爾見到少數(shù)發(fā)育較差的淋巴管樣結(jié)構(gòu)，癌巢周圍間質(zhì)內(nèi)淋巴管數(shù)目明顯減少。癌巢邊緣間質(zhì)組織中可見到較豐富得發(fā)育不佳的淋巴管樣結(jié)構(gòu)，管腔大而扁，管壁較薄，有的部位出現(xiàn)較多皺褶部分，呈閉塞狀態(tài)，部分?jǐn)U張明顯，呈條索狀或叢狀，圍繞癌組織成環(huán)狀分布，部分癌周淋巴管內(nèi)可見瘤栓。和目前大部分研究結(jié)論較一致，認(rèn)為原發(fā)性乳腺癌腫瘤淋巴管主要存在于腫瘤間質(zhì)組織中，不同區(qū)域腫瘤間質(zhì)內(nèi)淋巴管的密度、管腔形狀大小均不一致〔6〕。

本文提示在腫瘤發(fā)生區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的過(guò)程中，瘤周淋巴管發(fā)揮了明顯的作用〔7〕。文獻(xiàn)報(bào)道LMVDpt與腫瘤最大直徑、腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目和 pTNM分期之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián)〔8〕。

腫瘤誘導(dǎo)的淋巴管生成是腫瘤淋巴道轉(zhuǎn)移的重要步驟。目前大多數(shù)觀點(diǎn)認(rèn)為是腫瘤組織在生長(zhǎng)過(guò)程中能誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子系列 (包括VEGF-C和 VEGF-D)及其受體(VEGFR-2、VEGFR-3)的表達(dá)，在促進(jìn)血管形成的同時(shí)還促進(jìn)淋巴管的形成〔9〕。新生的淋巴管僅由單層細(xì)胞組成，無(wú)基底層，細(xì)胞間緊密連接較少，有許多潛在腔隙等，這些因素都有利于腫瘤細(xì)胞進(jìn)入淋巴管〔9〕。腫瘤淋巴管生成造成淋巴管密度增加，淋巴管數(shù)目的增多使腫瘤細(xì)胞有更多的機(jī)會(huì)侵入毛細(xì)淋巴管促進(jìn)乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，形成淋巴道轉(zhuǎn)移，影響患者預(yù)后。LMVDpt在乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌的擴(kuò)散轉(zhuǎn)移中起重要作用，可作為選擇乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌治療方式及預(yù)測(cè)其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)后的重要指標(biāo)。

1 Arigami T，Natsugoe S，Venosono Y，et al.Lymphaticinvasion using D2-40 monoclonal antibody and its relaionship to lymph node micrometastasis in pNO gastric cancer〔J〕.Br JCancer，2005;186(3):688-93.

2 Weidner N，F(xiàn)olkman J，Pozza F，et al.Tumor angiogenesis:significant and independent prognostic indicator in early stage breast carcinoma〔J〕.J Nati Cancer Inst，1992;84(24):1875-87.

3 Zotota V，Gerokosta A，Melachrinou M，et al.Microvessel density，proliferating activity，p53 and bcl-2 expression insituductal carcinoma of the breast〔J〕.Anticancer Res，1999;19(4):3269.

4 Kaiserling E.Immunohistochemical identification of lymph vessels，with D2-40 in diagnostic pathology〔J〕.Pathology，2004;25(5):362-74.

5 van den Eynden GG，Van Der Auwera I，Van Laeres J，et al.Distinguishing blood and lymph vessel invasion inbreast cancer.A prospective immunohistochemical study〔J〕.Br J Cancer，2006;94(11):1643-9.

6 Leu AJ，Berk DA，Lymboussaki A，et al.Absence of functional lymphatics within a murine sarcoma:a molecular and functional evaluation〔J〕.Cancer Res，2000;60(16-18):4324-79.

7 Padera TP，Kadambi A，di Tomaso E，et al.Lymphatic metastasis in the absence of functional intratumor lymphatics〔J〕.Science(Wash DC)，2002;296:1883-6.

8 車國(guó)衛(wèi)，周清華，張尚福，等.檢測(cè)肺癌中的微血管密度及其臨床意義〔J〕.中國(guó)肺癌雜志，2000;3(4):284-6.

9 Stacker SA，Caesar C，Baldwin ME，et al.VEGF-D promotes the metastatic spread of tumor cells via the lymphatics〔J〕.Nat Med，2001;7(2):186-91.