李羅清

辛蒼鼻舒膠囊的處方是我院五官科醫(yī)生結(jié)合多年臨床實踐研制而成的，由細辛、烏梅、川芎、蒼耳子、辛夷等中藥組方，具有疏風散寒、芳香通鼻、補肺益氣、活血消腫的功效，用于治療急慢性鼻炎、副鼻竇炎、過敏性鼻炎、鼻息肉，療效確切。為了保證該制劑療效穩(wěn)定，現(xiàn)對其進行質(zhì)量標準研究，采用薄層色譜法對方中川芎、蒼耳子、辛夷進行定性鑒別，用毛細管氣相色譜法測定揮發(fā)油中α－蒎烯、β－蒎烯、桉油精的含量[1]，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent7820型氣相色譜儀(安捷倫科技有限公司);HPCORE色譜工作站;氫火焰離子化檢測器;FC204型電子天平(上海天平儀器廠);HS6510D型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);RE－2000型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)。蒼耳子對照藥材(批號為121030－200905)、辛夷對照藥材(批號為120940－201009)、川芎對照藥材(批號為120918－201009)、桉油精對照品(批號為110788－201003，純度不小于98%)均購自中國藥品生物制品檢定所;α－蒎烯對照品(批號為100807，純度不小于98%)、β－蒎烯對照品(批號為100809，純度不小于98%)均由上海友思生物技術(shù)公司提供;辛蒼鼻舒膠囊(惠州市中醫(yī)醫(yī)院，批號為 20100908，20100913，20101008);水為超純水，其他試劑分別為分析純、色譜純。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜鑒別

圖1 蒼耳子薄層色譜圖

圖2 川芎薄層色譜圖

圖3 辛夷薄層色譜圖

蒼耳子:取樣品內(nèi)容物6 g，加無水乙醇30 mL，超聲回流處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇3 mL使溶解，靜置，取上清液作為供試品溶液。另取蒼耳子對照藥材1 g，加無水乙醇10 mL，同法制成對照藥材溶液。再按處方配比，取除蒼耳子外的其他藥材，按供試品溶液的制備方法制得陰性對照品溶液。照薄層色譜法[2010年版《中國藥典(一部)》附錄ⅥB]試驗，吸取上述3種溶液各5μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯－醋酸乙酯－甲酸(8∶4∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%磷鉬酸乙醇溶液，加熱至斑點顯色清晰。結(jié)果供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應位置上顯相同顏色的斑點，陰性對照顯示無干擾。結(jié)果見圖1。

川芎:取樣品內(nèi)容物6g，加乙醚30 mL，超聲處理20 min，濾過，揮干乙醚，殘渣加乙酸乙酯1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取川芎對照藥材1 g，加乙醚10 mL，同法制成對照藥材溶液。按處方比例從中除去川芎，同法制成川芎的陰性樣品，照供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。吸取上述3種溶液各5μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正己烷－乙酸乙酯(8∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應位置上顯相同顏色的熒光斑點，陰性對照品溶液在相應位置上無干擾。結(jié)果見圖2。

辛夷:取樣品內(nèi)容物6 g，加甲醇30mL，超聲回流提取30 min，濾過，取濾液作為供試品溶液。另取辛夷對照藥材1 g，加甲醇10 mL，同法制成對照藥材溶液。按處方比例從中除去辛夷，同法制成川芎的陰性樣品，同供試品制備方法制成陰性對照品溶液。吸取上述3種溶液各5μL，分別點于同一塊硅膠G薄層板上，以石油醚(60～90℃)－醋酸乙酯(3∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇液，于100℃烘箱內(nèi)加熱至斑點顯色清晰。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應位置上顯相同顏色的熒光斑點，陰性對照顯示，無干擾。結(jié)果見圖3。

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件

色譜柱:DB－1毛細管柱(30 m ×0.25 mm，0.25μm);進樣器溫度:230℃;FID檢測器溫度:250℃;柱溫:采用程序升溫，起始溫度為50℃，保持2 min，以8℃ /min升溫至130℃，保持3 min;載氣:氮氣;流速:1.2 mL/min;進樣方式:分流進樣，分流比1 ∶10，進樣量:1μL。色譜圖見圖 4。

2.2.2 溶液制備

圖4 氣相色譜圖

精密量取環(huán)己酮1 mL(相當于含環(huán)乙酮959.850mg)，置10mL量瓶中，用色譜丙酮定容至10 mL，再取0.24 mL置100 mL容量瓶中，用色譜丙酮定容至刻度，得質(zhì)量濃度為0.230 g/L環(huán)己酮內(nèi)標溶液[2]。分別稱取 α － 蒎烯 20.40 mg、β － 蒎烯 20.70 mg、桉油精75.44 mg，精密稱定，置10 mL容量瓶中，用內(nèi)標溶液定容至刻度，得 α－蒎烯、β－蒎烯、桉油精質(zhì)量濃度分別為 2.040，2.070，7.544 g/L 的對照品溶液。取本品 20 g，按 2010 年版《中國藥典(一部)》附錄ⅩD方法提取揮發(fā)油[3]，加無水硫酸鈉脫水、振搖，于冰箱中靜置過夜，脫水后，將揮發(fā)油置25 mL容量瓶中，加內(nèi)標溶液2.5 mL，加正己烷定容至刻度，搖勻即得供試品溶液。取缺細辛、川芎、蒼耳子、辛夷的方中其他藥材，按供試品溶液的制備方法同法制成陰性對照品溶液。

2.2.3 方法學考察

陰性干擾試驗:取2.2.2項下各溶液，照擬訂色譜條件進樣，記錄色譜圖，見圖4。結(jié)果表明，陰性對照品溶液色譜中，在對照品溶液色譜中的吸收峰相應時間處無吸收峰，說明樣品中其他藥材對測定無干擾。

線性關(guān)系考察:分別精密量取α－蒎烯、β－蒎烯、桉油精對照品溶液 1.1，1.1，2.6 mL，置同一 10 mL 量瓶中，得混合對照品溶液。分別精密吸取混合對照品溶液 0.2，0.4，0.6，0.8，1.2，1.6，2.0 mL 分別置 5 mL 量瓶中，分別加內(nèi)標溶液 0.5 mL，加正己烷定容至刻度，搖勻，進樣1μL，測定。以各對照品溶液質(zhì)量濃度(X，g/L)為橫坐標、以對照品與內(nèi)標峰面積比值(Y)為縱坐標進行線性回歸，分別得回歸方程 Y=12.22 X －0.006(r=0.999 8)，Y=11.96X －0.006(r=0.9998)，Y=13.18X －0.004(r=0.9997)。結(jié)果表明，α－蒎烯、β－蒎烯、桉油精質(zhì)量濃度分別在0.008～0.091g/L(r=0.9998)，0.009 ～0.093 g/L(r=0.9998)，0.0604 ～0.604 g/L(r=0.999 7)范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

精密度試驗:精密吸取同一對照品溶液，在擬訂的色譜條件下連續(xù)進樣6次，以α－蒎烯、β－蒎烯、桉油精與內(nèi)標峰面積比值計算，其 RSD 分別為 1.17%(n=6)，1.13%(n=6)，1.22%(n=6)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗:精密吸取同一份供試品溶液，于 0，2，4，6，8，12 h時進樣，以α－蒎烯、β－蒎烯、桉油精與內(nèi)標峰面積比值計算，其RSD 分別為 1.1%(n=6)，1.3%(n=6)，1.2%(n=6)，表明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。

重復性試驗:取同一批樣品(批號為20100913)，依法制備6份供試品溶液，在擬訂的色譜條件下測定峰面積并計算α－蒎烯、β－蒎烯、桉油精平均含量，結(jié)果分別為 0.206 0，0.256 2，1.812 6 mg，RSD 分別為 1.2%，1.1% ，1.6%(n=6)，表明方法重復性較好。

加樣回收試驗[4]:精密稱取已知含量的同一批樣品(批號為 20100913，α －蒎烯含量為 0.062 6 mg/g，β －蒎烯含量為0.059 6 mg/g，桉油精含量為 0.211 5 mg/g)5 份，每份約 2.0 g，依法制備5份供試品溶液，再分別加入 α－蒎烯0.13 mg、β－蒎烯0.12 mg、桉油精0.3 mg，依法制備供試品溶液并測定，計算平均回收率。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收試驗結(jié)果(n=5)

2.2.4 樣品含量測定

分別精密稱取3批次樣品(批號為 20100910，20100913，20100916)各5 g，依法制備供試品溶液并測定。結(jié)果3批樣品中α － 蒎烯含量分別為 0.314 0，0.313 2，0.312 5 mg;β － 蒎烯含量分別為 0.2956，0.2982，0.2997mg，桉油精的含量分別為 1.0122，1.057 6，1.102 8 mg，考慮到生產(chǎn)過程中的損耗和保存期等不穩(wěn)定因素，故規(guī)定本品每粒含α－蒎烯、β－蒎烯、桉油精分別不得少于 0.313 2，0.297 8，1.057 5 mg。

3 討論

揮發(fā)油是本品的主要有效成分，具有抗過敏活性[5]，多項研究證明揮發(fā)油可用于多種鼻炎的治療。α－蒎烯、β－蒎烯、桉油精是揮發(fā)油的主要成分，測定方法比較成熟，故本次試驗以α－蒎烯、β－蒎烯、桉油精為指標。筆者選用DB－1毛細管柱對這3種成分進行了分離，所得色譜圖分離效果好，峰形好，無拖尾現(xiàn)象。在預實驗中曾選擇了多個化合物作為內(nèi)標物，包括甲苯、水楊酸甲酯、苯甲酸乙酯、異辛烷、環(huán)乙酮、苯乙酮、萘，結(jié)果采用環(huán)乙酮分離度最好，因此確定環(huán)乙酮為內(nèi)標物。本試驗采用薄層色譜定性與氣相色譜檢測相結(jié)合，操作方便、實用，有利于綜合控制辛蒼鼻舒膠囊質(zhì)量。

[1]楊 健，徐植靈，潘炯光，等.辛夷揮發(fā)油的成分分析[J].中國中藥雜志，1998，23(5):295 －298.

[2]曾會敏，王四旺，李曉曄，等.氣相色譜法測定青翹揮發(fā)油中β－蒎烯含量[J].藥物分析雜志，2007，27(4):572 －574.

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:附錄ⅩD.

[4]馬 玲，陳師農(nóng)，張 毅，等.清熱利濕顆粒質(zhì)量標準研究[J].中國藥業(yè)，2012，21(8):51－53.

[5]靖 會，佐建鋒.揮發(fā)油的藥理研究進展[J].西北藥學雜志，2005，20(2):97－98.