卞金輝，余蔥蔥，李從菊，林偉，陳娜，郭力

銀芩片是根據(jù)原國家藥品標(biāo)準(zhǔn)銀芩膠囊（標(biāo)準(zhǔn)號WS-10183(ZD-0183)-2002）改劑而成。該藥立法嚴(yán)謹(jǐn)，選藥精準(zhǔn)，藥味不多（由金銀花、黃芩、三七葉、魚腥草四味藥組成），符合中醫(yī)藥理論和傣醫(yī)用藥特點(diǎn)，具有較強(qiáng)的清熱解毒和發(fā)散風(fēng)熱作用，在治療風(fēng)熱感冒和傣醫(yī)用藥方面有較大的優(yōu)勢，是一個(gè)較理想的中藥感冒用藥。但該藥原標(biāo)準(zhǔn)中只有金銀花、三七葉的定性檢測和黃芩苷的定量檢測，致使擬訂的標(biāo)準(zhǔn)偏低，產(chǎn)品質(zhì)量的可控性差，而且采用的膠囊常出現(xiàn)內(nèi)容物形狀不均勻、易分層等缺點(diǎn)，從而造成裝量不準(zhǔn)確。因此我們按照SFDA頒布的《藥品注冊管理辦法》的有關(guān)規(guī)定進(jìn)行研究，擬將膠囊劑改成片劑，從而改變該方原有劑型的上述缺點(diǎn)。為了確保本品質(zhì)量，我們對其進(jìn)行了質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，對方中的金銀花、黃芩、三七葉、魚腥草進(jìn)行了改進(jìn)的TLC鑒別[1]。結(jié)果表明該方法簡便、準(zhǔn)確、可靠，能較好地控制本產(chǎn)品的質(zhì)量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

AE240型萬分之一電子天平(梅特勒一托利多儀器有限公司)；PHS一3C型精密pH計(jì)(上海圖新電子科技有限公司)；ZF-20D型暗箱式紫外分析儀（北京金歐亞科技發(fā)展有限公司）；硅膠G(青島海洋化工廠提供)等。

1.2 試藥

綠原酸對照品（批號：110753-200212）、金銀花對照藥材（批號：121060-200303）、黃芩苷對照品 (批號：110715-200212)、人參皂苷Rb1對照品（批號：110704-200318）、魚腥草對照藥材（批號：121046-200402）等均由中國藥品生物制品檢定所提供；銀芩片及陰性對照品均為自制；水為重蒸餾水，其余所用試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 金銀花的TLC鑒別

金銀花為方中君藥，含有黃酮類、肌醇、綠原酸、異綠原酸、皂苷及揮發(fā)油等[2～4]。其中現(xiàn)代藥理學(xué)證明其抗菌的有效成分以綠原酸和異綠原酸為主。按銀芩膠囊原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)，結(jié)果顯示，供試品色譜中斑點(diǎn)較對照斑點(diǎn)有一定拖尾現(xiàn)象。為改善效果，根據(jù)文獻(xiàn)資料，選用5%磷酸二氫鈉調(diào)制硅膠G薄層板，結(jié)果顯示，供試品色譜中斑點(diǎn)由3個(gè)相近斑點(diǎn)組成。

2.1.1 供試品溶液的制備 取中試樣品一批(041201)2片，去包衣，研細(xì)，取粉末0.2 g，加甲醇5 mL，超聲處理10 min，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.1.2 陰性對照溶液的制備 取不含金銀花藥材按制法制備缺金銀花陰性樣品，同前法制備陰性對照溶液。

2.1.3 綠原酸對照品溶液的制備 取綠原酸對照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。

2.1.4 金銀花對照藥材溶液的制備 取金銀花對照藥材粉末0.1 g，加甲醇5 mL，超聲處理30 min，濾過，取續(xù)濾液作為對照藥材溶液。

照薄層色譜法（《中華人民共和國藥典》2005年版一部附錄VIB）試驗(yàn)，吸取對照品溶液和對照藥材溶液各5 μL，陰性對照溶液和供試品溶液10 μL，分別點(diǎn)于同一以5%磷酸二氫鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以醋酸丁酯－甲酸－水(7:2.5:2.5)的上層溶液為展開劑，在室溫下展距約12 cm，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm) 下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性無干擾，薄層色譜見圖1。

2.2 三七葉的TLC鑒別

三七葉的化學(xué)成分主要含揮發(fā)性成分、皂苷類、氨基酸類等其他成分。其特征性成分為人參皂苷Rb1。按銀芩膠囊原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，試驗(yàn)用人參皂苷Rb1為對照，結(jié)果顯示，供試品和投料藥材色譜中斑點(diǎn)和對照斑點(diǎn)一致，但供試品和投料藥材色譜中斑點(diǎn)較大，有拖尾現(xiàn)象。根據(jù)文獻(xiàn)資料，對供試樣品的提取方法進(jìn)行了篩選，比較了甲醇提取、正丁醇提取、D101大孔樹脂純化，結(jié)果顯示：經(jīng)D101大孔樹脂純化后的樣品效果較好，斑點(diǎn)清晰。

2.2.1 供試品溶液的制備 取中試樣品一批(041201)8片，去包衣，研細(xì)，取粉末2 g，加20%乙醇10 mL，超聲30 min，濾過，濾液濃縮到2 mL，加于D101大孔樹脂柱（100～120目，5 g，內(nèi)徑10～15 mm）上，先后用水和20%乙醇各10 mL洗脫，再于70%乙醇洗脫，收集洗脫液10 mL，水浴蒸干，殘?jiān)蛹状? mL 使溶解，作為供試品溶液。

2.2.2 陰性對照溶液的制備 取不含三七葉藥材按制法制備缺三七葉陰性樣品，同前法制備陰性對照溶液。

2.2.3 人參皂苷Rb1對照品溶液的制備 取人參皂苷Rb1對照品適量，加甲醇制成每1 mL含1 mg 的溶液，作為對照品溶液。

2.2.4 三七葉投料藥材溶液的制備 三七葉投料藥材粉末0.1 g，加甲醇5 mL，超聲處理30 min，濾過，取續(xù)濾液作為投料藥材溶液。

照薄層色譜法（《中華人民共和國藥典》2005年版一部附錄VIB）試驗(yàn)，吸取上述四種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水-冰醋酸(13:7:2:1.5) 為展開劑，在10 ℃以下展開約14 cm，取出噴以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，立即置紫外光燈(365 nm) 下檢視。在供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性無干擾，薄層色譜見圖2。

2.3 魚腥草的TLC鑒別

魚腥草含有揮發(fā)性成分、黃酮類化合物、有機(jī)酸及脂肪酸、無機(jī)鹽類等[5]，原銀芩膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)無魚腥草鑒別，試驗(yàn)選擇了魚腥草對照藥材的乙酸乙酯部位作對照，結(jié)果表明供試品色譜中顯與對照品色譜相同斑點(diǎn)。

2.3.1 供試品溶液的制備 取中試樣品一批(041201)8片，去包衣，研細(xì)，取粉末2 g，加水10 mL使溶解，用NaOH試液調(diào)pH=10，加乙酸乙酯20 mL，分3次萃取，取乙酸乙酯層，合并，水浴蒸干，殘?jiān)? mL乙酸乙酯使溶解，作為供試品溶液。

2.3.2 陰性對照溶液的制備 取不含魚腥草藥材按制法制備缺魚腥草陰性樣品，同前法制備陰性對照溶液。

2.3.3 魚腥草對照藥材溶液的制備 取魚腥草對照藥材粉末2 g，加水20 mL回流1 h，過濾，濾液用NaOH試液調(diào)pH=10，加乙酸乙酯20 mL，分3次萃取，取乙酸乙酯層，合并，水浴蒸干，殘?jiān)? mL乙酸乙酯使溶解，作為對照藥材溶液。

照薄層色譜法（《中華人民共和國藥典》2005年版一部附錄VIB）試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(20:10:1:1)的上層溶液為展開劑，在室溫下展開約12 cm，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。在供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)方法的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性無干擾，薄層色譜見圖3。

3 討論

3.1 本品在研究金銀花、三七葉、魚腥草的薄層色譜鑒別時(shí)，曾還分別采用了正丁醇-冰乙酸-水(4:1:2)、正丁醇-乙酸乙酯-水（8:2:10）、氯仿-乙酸乙酯-乙醚(6:1:3)作展開劑，均有較好的適宜性，但前面所述各薄層鑒別中所采用的展開劑展開效果更好，斑點(diǎn)更集中，方法更簡便。

3.2 本品對方中黃芩按照藥典標(biāo)準(zhǔn)及相關(guān)文獻(xiàn)資料進(jìn)行了薄層色譜研究[6～7]，試驗(yàn)了甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（10:8:1:2）、乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（5:3:1:1）兩種展開系統(tǒng)，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，雖顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，但有拖尾現(xiàn)象，色譜識別不明顯，對本品中黃芩的鑒別適宜性較差，因此未將黃芩的薄層鑒別列入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

綜上所述，本品采用TLC法對方中金銀花、三七葉、魚腥草進(jìn)行定性鑒別，所得圖譜清晰，各斑點(diǎn)分離較好。本品所制定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)方法簡便、準(zhǔn)確、可靠、重現(xiàn)性好，能有效地控制本品的質(zhì)量。

[1] 國 家藥典委員會.中華人民共和國藥典一部[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005,附錄VB.

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