曾 敏 郝麗娜張曉明 徐 月張 旗 雷正榮

（1.重慶市中醫(yī)院，重慶 400021；2.山東省安丘市中醫(yī)院，山東 安丘 262100）

本課題通過纖維結(jié)腸鏡觀察治療前后結(jié)直腸息肉臨床變化及免疫組化S-P法檢測結(jié)直腸息肉中P53蛋白的表達，探討濟生烏梅片治療息肉的效果及抑瘤作用。為進一步開發(fā)成治療結(jié)直腸息肉的新藥提供臨床和理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2008年2月至2010年4月在筆者所在醫(yī)院肛腸科門診或住院部患者中選擇60例，滿足西醫(yī)或中醫(yī)診斷標準任一類；病歷資料齊全；年齡18～65歲；簽署試驗知情同意書者。其中男性42例，女性18例；年齡23～58歲，平均年齡42.80歲。息肉直徑＜2 cm；息肉枚數(shù)不超過5枚者；經(jīng)病理檢查組織無癌變者。病理類型包含炎性息肉，增生性息肉及腺瘤樣息肉3種，部分息肉腺上皮輕、中度不典型增生。60例患者按隨機數(shù)字表法分為治療組、手術(shù)組、對照組，各組臨床資料差異無統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

1.2 主要試劑 鼠抗人P53單克隆抗體、枸櫞酸抗原修復液（pH6.0）、抗體稀釋液、S-p免疫組化試劑盒、濃縮型DAB試劑盒、PBS均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司

1.3 方 法

1.3.1 治療方法 治療組口服院內(nèi)制劑濟生烏梅片（每片0.3g），每日3次，每次3片；手術(shù)組采取內(nèi)鏡下息肉摘除；對照組口服安慰劑，用法同治療組。服藥以1個月為1療程。每組治療前均記錄息肉枚數(shù)及直徑，息肉周圍黏膜炎癥情況并攝片供隨訪對比，取病理組織活檢及P53蛋白檢查；3個療程后觀察療效。

1.3.2 免疫組化 采用S-P法檢測P53蛋白表達，每次試驗均設(shè)陽性及陰性對照，陽性對照片選擇已知結(jié)腸癌P53表達陽性的組織，陰性對照加入PBS代替一抗。具體操作按照S-P試劑盒說明書進行。

1.4 療效標準 觀察息肉治療前后大小，周圍黏膜有無炎癥改變；其中規(guī)定息肉在治療后縮小都作為治療有效指標。P53蛋白陽性著色位于細胞核，少數(shù)病例在胞漿呈彌漫性染色，以細胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為判斷標準。陽性：≥10%陽性細胞。陰性：＜10%陽性細胞或不著色。

1.5 統(tǒng)計學處理 應用SAS6.12統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組治療前后息肉周圍黏膜炎癥情況比較 見表1。經(jīng)纖維結(jié)腸鏡觀察，在治療前，各組間炎癥情況基本一致；在治療后，與對照組比較，治療組與手術(shù)組炎癥控制良好，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

表1 各組在治療前后息肉周圍黏膜炎癥比較（n）

2.2 各組治療后息肉變化情況比較 見表2。與對照組比較，治療組與手術(shù)組療效較好（P＜0.05）。

2.3 P53蛋白在治療前后息肉組織中的表達 見表3。手術(shù)組因手術(shù)切除僅3例復發(fā)未納入統(tǒng)計。治療前，治療組與對照組相比，兩組間P53蛋白在息肉組織中表達的陽性率無顯著差異；治療后，治療組的P53蛋白的陽性率顯著性較對照組低 （P＜0.05）。

表2 治療后各實驗組息肉改變情況（n）

表3 P53在治療前后息肉組織中的表達n（%）

3 討 論

濟生烏梅片為筆者所在醫(yī)院院內(nèi)制劑。由烏梅、僵蠶、莪術(shù)、紅花等組成。藥理研究證明，烏梅有抗微生物、抗突變、抗腫瘤等作用［1］。諸藥合用，可奏消積散結(jié)、化瘀行血之效。

P53基因由11個外顯子和10個內(nèi)含子構(gòu)成，定位于人類17號染色體短臂17P13.1上，全長20kb，編碼相對分子質(zhì)量為53×103的核內(nèi)磷酸化蛋白。有野生型和突變型之分，自然存在的野生型P53基因是一種重要的抑癌基因，主要生物學功能為引起細胞周期阻滯，誘導凋亡和促進分化［2］。由于其含量少、半衰期短而不能用免疫組化方法檢測出。若P53發(fā)生基因突變成為突變型P53，則誘導細胞凋亡功能被抑制，細胞增殖失控，結(jié)果致癌發(fā)生［3］。由于其半衰期延長，且在核內(nèi)積聚，通過免疫組化的方法可以直接檢測。因此，當組織中有P53蛋白的高表達，即表明有P53基因的突變［4］。大量資料表明，P53基因突變、缺失是許多腫瘤發(fā)生的原因［5］。因而P53基因檢測對腫瘤的早期診斷及篩檢有重要意義。

本實驗在治療后，治療組及手術(shù)組與對照組比較息肉周圍黏膜炎癥狀況明顯減輕，息肉脫落并縮小與對照組比較有顯著差異，P53蛋白在濟生烏梅片組表達降低，與對照組比較差異有顯著的統(tǒng)計學意義。因此，本實驗中治療組對結(jié)直腸息肉組織有軟堅、散結(jié)、化息肉之功用。濟生烏梅片組息肉組織中p53蛋白下降，提示濟生烏梅的抑癌作用是通過抑制癌基因的表達而實現(xiàn)的。

［1］南京中醫(yī)藥大學.中藥大辭典［M］.上海：上?？茖W技術(shù)出版社，2006：659，1378，2507，3695.

［2］Yoo N J，Kim H S，Kim S Y，et al.Imm unohist och emical an alysis of smac/DIABLO expressi on in human carcinomas and sarcomas［J］.APM IS，2003，111（3）：382-388.

［3］Kohl i M，Yu J，Seaman C，et al.SMAC/Diabl o-dependent apoptosis in duced bynon steroidal ant iinfl ammatory drugs （NSAIDs） in colon cancer cells［J］.PNAS，2004，101（48）：16897-16902.

［4］Endo K，Kohnoe S，Wat anabe A，et al.Clinical significance of Smac/DIABLOexpressionincolorectalcancer［J］.JOncolRep，2009，21（2）：351-355.

［5］王保平，朱耀明，朱晨宇，等.結(jié)直腸癌組織中smac的表達及意義［J］.山東醫(yī)藥，2008，48（3）：45-46.