李雅彬 任萬(wàn)強(qiáng) 梁君昭 竇建衛(wèi)

（1.陜西中醫(yī)學(xué)院，陜西 咸陽(yáng) 712046；2.湖北省襄陽(yáng)市中醫(yī)醫(yī)院，湖北 襄陽(yáng) 441000；3.陜西省西安市中醫(yī)醫(yī)院，陜西 西安 710001；4.西安交通大學(xué)，陜西 西安 710061）

緩慢性心律失常是臨床常見(jiàn)的心律失常類型，中醫(yī)認(rèn)為多由心腎陽(yáng)虛、血瘀脈阻引起，臨床上常見(jiàn)癥狀為胸悶、心悸、倦怠乏力、形寒肢冷等，屬于中醫(yī)學(xué)“心悸”、“胸痹”、“怔忡”等范疇。筆者在前期擴(kuò)大樣本數(shù)的臨床觀察中已經(jīng)證實(shí)扶正助脈方具有扶正通絡(luò)、祛瘀化濁的療效，對(duì)緩慢性心律失常患者有良好作用。本研究通過(guò)對(duì)陽(yáng)虛瘀阻證緩慢性心律失常大鼠實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷乃幮W(xué)研究，分析扶正助脈方對(duì)一氧化氮（NO）、Na+-K+-ATP酶的影響，初步探討扶正助脈方治療緩慢性心律失常的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 選用 SPF級(jí) SD大鼠，雄性，體質(zhì)量（250±20）g，購(gòu)自西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào)：SCXK（陜）2007-001號(hào)。實(shí)驗(yàn)前動(dòng)物經(jīng)測(cè)試確認(rèn)無(wú)異常行為。

1.2 藥物與試劑 （1）扶正助脈方煎劑：西安市中醫(yī)醫(yī)院院內(nèi)煎劑，500 mL/瓶，由桂枝、黨參、淫羊藿、蘇木、地龍、清半夏、薤白、連翹、雞血藤等 12味中藥組成；（2）心寶丸（60 mg/丸）：廣東省藥物研究所制藥廠，國(guó)藥準(zhǔn)字Z44021843，產(chǎn)品批號(hào)20100337；（3）鹽酸可樂(lè)定：常州制藥廠生產(chǎn)，用時(shí)用0.9%氯化鈉注射液配成所需濃度；（4）氫化可的松注射液（25 mg/5 mL），揚(yáng)州制藥有限公司生產(chǎn)；（5）NO、Na+-K+-ATP試劑盒：南京建成生物工程研究所提供。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器 （1）FA1104 N型0.1 mg電子天平：上海天平儀器廠；（2）心電圖儀：上海光電醫(yī)學(xué)儀器公司。

1.4 模型制備 大鼠予普食飼料喂養(yǎng)，自由飲水，適應(yīng)7 d后，每日臀部皮下注射氫化可的松注射液，25 mg/kg，連續(xù)14 d。并在實(shí)驗(yàn)第2周時(shí)，強(qiáng)迫大鼠每日上、下午各游泳1次，至無(wú)力即將下沉?xí)r撈出，以誘導(dǎo)勞倦過(guò)度，持續(xù)1周［1］。觀察大鼠一般形態(tài)，凡出現(xiàn)活動(dòng)減少，精神不振，反應(yīng)遲鈍，弓背蜷縮、飲水量減少，體質(zhì)量減輕等腎陽(yáng)氣虛癥狀者為造模成功［2］。

1.5 分組與給藥 選擇造模成功的大鼠60只，隨機(jī)分為高、中、低劑量組，模型對(duì)照組、心寶丸組，每組12只，再選取12只健康大鼠為空白對(duì)照組。造模成功后次日開(kāi)始藥物干預(yù)?？瞻讓?duì)照組和模型對(duì)照組常規(guī)喂養(yǎng)，按大鼠以20 mL/kg體質(zhì)量灌胃蒸餾水；心寶丸組灌胃心寶丸溶液，質(zhì)量濃度為20 mL/kg；高、中、低劑量組灌胃扶正助脈合劑，藥物質(zhì)量濃度分別相當(dāng)于臨床劑量12、6、3倍。每組均于每日上午10時(shí)灌胃給藥1次，連續(xù)治療14 d。

1.7 標(biāo)本采集與檢測(cè) （1）心率：末次給藥后1 h用乙醚淺麻醉大鼠，在其四肢皮下埋置電極，記錄大鼠清醒后標(biāo)準(zhǔn)Ⅱ?qū)?lián)心電圖。第15日以鹽酸可樂(lè)定2 mg/kg皮下注射，并同時(shí)灌胃相應(yīng)藥物，記錄灌胃后1 h心電信號(hào)，統(tǒng)計(jì)分析大鼠心率變化情況［3］。 （2）血液指標(biāo)：測(cè)完大鼠心率后，腹腔注射 10%水合氯醛（350 mg/kg）麻醉，取股動(dòng)脈血，室溫靜置6 h，4℃條件下，3000 r/min離心10 min，取其血清，NO檢測(cè)采用硝酸還原法，Na+-K+-ATP酶活性檢測(cè)采用無(wú)機(jī)磷含量的方法，均嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)步驟進(jìn)行。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以（±s）表示。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組對(duì)大鼠給藥前后心率比較 見(jiàn)表1。與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組大鼠心率明顯降低（P＜0.01），與模型對(duì)照組相比，中、高劑量組，大鼠心率明顯升高（P＜0.01）。

表1 各組大鼠給藥前后心率比較（次/min，±s）

表1 各組大鼠給藥前后心率比較（次/min，±s）

與模型對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與空白對(duì)照組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。下同。

組 別 n 給藥前 給藥后空白對(duì)照組 12 400.00±18.00 383.71±8.32模型對(duì)照組 12 391.78±24.00 290.42±29.06△△心寶丸組 12 380.77±23.00 326.63±14.03**低劑量組 12 381.70±21.08 300.34±10.03中劑量組 12 378.02±12.90 315.72±14.77**高劑量組 12 380.21±12.29 316.33±18.48**

2.2 各組對(duì)大鼠NO含量、Na+-K+-ATP酶活性的影響 見(jiàn)表2。與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組NO含量增加（P＜0.05），與模型對(duì)照組比較，低劑量組大鼠血清NO含量降低（P＞0.05），差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；中、高劑量組大鼠血清NO含量降低（P＜0.05）。與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組Na+-K+-ATP酶活性降低 （P＜0.01），與模型對(duì)照組比較，低、中劑量組大鼠血清Na+-K+-ATP酶活性升高（P＜0.05），高劑量組大鼠血清Na+-K+-ATP酶活性明顯升高（P＜0.01）。

3 討 論

緩慢性心律失常的形成機(jī)制有兩種：一種是自律性異常，包括竇性心動(dòng)過(guò)緩、竇性停搏和病態(tài)竇房結(jié)綜合征；另一種是傳導(dǎo)性異常，包括竇房傳導(dǎo)阻滯、房室傳導(dǎo)阻滯以及室內(nèi)傳導(dǎo)阻滯。臨床表現(xiàn)為不同程度的心悸氣短、胸悶隱痛、頭昏乏力、動(dòng)則加重，嚴(yán)重者出現(xiàn)Adams-Stokes綜合征。

表2 各組大鼠血清NO含量、Na+-K+-ATP酶活性比較（±s）

表2 各組大鼠血清NO含量、Na+-K+-ATP酶活性比較（±s）

組 別 n NO（μmol/mL） Na+-K+-ATP酶活性空白對(duì)照組 12 36.93±4.08 0.398±0.070模型對(duì)照組 12 39.82±2.89△ 0.241±0.051△△心寶丸組 12 35.56±6.89* 0.279±0.039*低劑量組 12 37.83±3.85 0.288±0.049*中劑量組 12 36.72±3.15* 0.289±0.044*高劑量組 12 36.45±3.82* 0.332±0.050**

NO又叫血管內(nèi)皮舒張因子，普遍存在于脊椎動(dòng)物各個(gè)細(xì)胞中，能刺激血管平滑肌細(xì)胞舒張，參與神經(jīng)遞質(zhì)和機(jī)體免疫的調(diào)節(jié)，通過(guò)介導(dǎo)迷走神經(jīng)作用，可激活水溶性鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶，提高環(huán)磷酸鳥(niǎo)苷（cGMP）濃度，cGMP濃度的提高引起抑制心臟活動(dòng)，表現(xiàn)為負(fù)性肌力、負(fù)性傳導(dǎo)、負(fù)性頻率。筆者在前期對(duì)扶正助脈方的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中發(fā)現(xiàn)［4］，扶正助脈方可以降低心肌勻漿中cGMP的濃度，但由何種物質(zhì)介導(dǎo)并不清楚。本次實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，與模型對(duì)照組相比，中、高劑量組大鼠血清NO含量降低（P＜0.05），提示很可能是NO介導(dǎo)的細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，使cGMP濃度降低從而達(dá)到提高心率的作用。Na+-K+-ATP酶活動(dòng)的生電性，所形成的跨膜離子濃度與心肌細(xì)胞自律性密切相關(guān)，心肌細(xì)胞自律性的高低最主要取決于動(dòng)作電位4期自動(dòng)去極化的速度?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，Na+-K+-ATP酶活性降低會(huì)導(dǎo)致心肌細(xì)胞自律性、傳導(dǎo)性以及離子通道的異常，提示可能與緩慢性心律失常發(fā)生有關(guān)［5］。本實(shí)驗(yàn)研究表明，與模型對(duì)照組比較，低、中劑量組大鼠血清Na+-K+-ATP酶活性升高（P＜0.05），高劑量組大鼠血清Na+-K+-ATP酶活性明顯升高（P＜0.01），說(shuō)明扶正助脈方可以使Na+-K+-ATP酶活性增高。

扶正助脈經(jīng)驗(yàn)方，臨床已使用多年，對(duì)緩慢性心律失常患者有良好作用，該方由桂枝、黨參、淫羊藿、蘇木、地龍、清半夏、薤白、連翹、雞血藤等12味中藥組成。全方重點(diǎn)突出溫養(yǎng)心經(jīng)、疏通心絡(luò)、祛瘀行滯、化濁排毒之功效。通過(guò)促進(jìn)機(jī)體臟腑的陰陽(yáng)氣血、虛實(shí)正邪逐漸趨向平衡，改善陽(yáng)虛大鼠紊亂的內(nèi)環(huán)境，從而促使陽(yáng)虛大鼠向正常發(fā)展［6］，同時(shí)本經(jīng)驗(yàn)方可改善由心腎陽(yáng)虛引起的緩慢性心律失常大鼠心功能和心肌細(xì)胞代謝，有利于促進(jìn)心臟竇房結(jié)的營(yíng)養(yǎng)狀況、改善竇房結(jié)功能，是改善心功能、治療緩慢性心律失常的有效制劑。由于本次實(shí)驗(yàn)周期和條件有限，對(duì)于復(fù)方中具體是哪味藥使Na+-K+-ATP酶活性增高及NO的來(lái)源未能研究，這也將是下一個(gè)研究重點(diǎn)。

［1］楊霓芝，包昆，王立新，等.通脈口服液對(duì)大鼠慢性腎炎“氣虛血瘀證”模型的組織形態(tài)學(xué)影響［J］.中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志，2001，8（3）：31-32.

［2］陳英華，歐陽(yáng)軼強(qiáng)，孫琪，等.腎陽(yáng)虛證動(dòng)物模型規(guī)范化研究中診斷指標(biāo)選擇的初步探討［J］.中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2003，9（10）：26-30.

［3］梁君昭，李逢春，張佩.扶正助脈方對(duì)陽(yáng)氣虛衰血瘀證心動(dòng)過(guò)緩大鼠作用的實(shí)驗(yàn)研究［J］.陜西中醫(yī)，2011，32（7）：915-916.

［4］程曉昱，胡業(yè)彬，吳和，等.心復(fù)康對(duì)緩慢性心律失常大鼠的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2006，12（10）：741-743.

［5］姚泰.生理學(xué)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2001：113-116.

［6］張恩戶，李有林，于克惠，等.從陰陽(yáng)自和談中藥調(diào)整作用［J］.現(xiàn)代中醫(yī)藥，2003，23（5）：1-3.