黃 坤，郭慶東，謝 芳，王增明，郭 嘉，梅興國(guó)*

(1.武漢工程大學(xué)綠色化工過(guò)程教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖北 武漢 430074；2.軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院毒物藥物研究所，北京 100850)

0 引 言

口崩片作為一種新型片劑，具有服用簡(jiǎn)單方便、在口腔中能迅速崩解或溶解、吸收起效快以及能避免肝臟首過(guò)效應(yīng)等優(yōu)點(diǎn)[3]；由于其在精神疾病治療方面有著獨(dú)特的實(shí)用性，將抗精神病藥奧氮平制備成口崩片，能提高患者藥物治療的依從性，減少護(hù)理工作的負(fù)擔(dān)[4].

關(guān)于奧氮平藥代動(dòng)力學(xué)的報(bào)道常見(jiàn)于文獻(xiàn)[5-8]，但關(guān)于其含量及有關(guān)物質(zhì)測(cè)定的報(bào)道不多[9-10]，同時(shí)中國(guó)藥典也未收錄該藥，因此缺乏相應(yīng)的藥品標(biāo)準(zhǔn).本文在參照最新美國(guó)藥典的基礎(chǔ)上建立了奧氮平原料藥及片劑含量測(cè)定的高效液相色譜法，同時(shí)應(yīng)用于相應(yīng)的質(zhì)量和穩(wěn)定性研究.實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明方法靈敏度高、重復(fù)性好、專(zhuān)屬性強(qiáng)，適合奧氮平及其片劑的含量測(cè)定和有關(guān)物質(zhì)檢查.

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試藥

Agilent 1200高效液相色譜儀(Degasser G1322A，Quat pump G1311A，ALS G1329A，TCC G1316A，VWD G1314D，美國(guó)Agilent公司)；Venusil ASB C18色譜柱(4.6 mm×150 mm，5 μm，北京艾杰爾科技有限公司)；分析天平(Sartorius BT125D型，德國(guó)賽多利斯公司)；超聲清洗儀(KS-120D型，新芝儀器廠(chǎng)).

奧氮平對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：100948-200801)，奧氮平原料藥(軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院毒物藥物研究所合成，批號(hào)20110831、20110930、20111010)，奧氮平口崩片(自制，批號(hào)20111120、20111210、20111217)，乙腈、甲醇為色譜純，磷酸、磷酸二氫鈉、十二烷基硫酸鈉為分析純，水為雙蒸水.

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1色譜條件 色譜柱：Venusil ASB C18色譜柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)；流動(dòng)相：緩沖液(含質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.69%磷酸二氫鈉和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.2%十二烷基硫酸鈉，磷酸調(diào)節(jié)pH值為2.5)-乙腈(45：55)；檢測(cè)波長(zhǎng)：259 nm；柱溫：25 ℃；流速：1.5 mL·min-1；進(jìn)樣量：20 μL.

1.2.2 溶液的配制 對(duì)照品溶液：精密稱(chēng)取奧氮平對(duì)照品，流動(dòng)相溶解、定容制成質(zhì)量濃度為100 μg·mL-1的溶液，作為對(duì)照品溶液.

奧氮平溶液：精密稱(chēng)取奧氮平原料藥適量，配制方法同對(duì)照品溶液，作為原料藥溶液.

供試品溶液：取奧氮平口崩片20片，稱(chēng)重，研細(xì)至粉末；精密稱(chēng)取適量(相當(dāng)于奧氮平30.00 mg)，流動(dòng)相溶解后用0.45 μm的有機(jī)濾膜過(guò)濾.流動(dòng)相將續(xù)濾液稀釋成100 μg·mL-1的溶液，作為供試品溶液.

1.2.3 專(zhuān)屬性試驗(yàn) 酸破壞：取片劑研細(xì)粉末，流動(dòng)相配制成0.5 mg·mL-1的溶液，加入0.5 mol·L-1HCl溶液適量，室溫放置1 d，0.5 mol·L-1NaOH溶液中和后濾過(guò)，續(xù)濾液作為酸破壞樣品溶液.

堿破壞：取片劑研細(xì)粉末，流動(dòng)相配制成0.5 mg·mL-1的溶液，加入0.1 mol·L-1NaOH溶液適量，室溫放置2 d，0.1 mol·L-1HCl溶液中和后濾過(guò)，續(xù)濾液作為堿破壞樣品溶液.

氧化破壞：取片劑研細(xì)粉末，流動(dòng)相配制成0.5 mg·mL-1的溶液，加入30%的雙氧水適量，室溫放置5 d后濾過(guò)，續(xù)濾液作為氧化破壞樣品溶液.

高溫破壞：取片劑研細(xì)粉末，于60 ℃條件下放置1 d， 流動(dòng)相稀釋定容制成濃度為100 μg·mL-1的溶液，濾過(guò)，續(xù)濾液作為高溫破壞樣品溶液.

光照破壞：取片劑研細(xì)粉末，于4 500 lx強(qiáng)光條件下照射5 d，流動(dòng)相稀釋定容制成濃度為100 μg·mL-1的溶液，濾過(guò)，續(xù)濾液作為光照破壞樣品溶液.

分別取奧氮平溶液、流動(dòng)相、各種破壞樣品溶液以及空白輔料溶液，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定各溶液，記錄色譜圖至主峰保留時(shí)間的3倍.

1.2.4 線(xiàn)性關(guān)系 精密稱(chēng)取奧氮平原料藥，流動(dòng)相溶解、稀釋制備成濃度為20.33、50.83、81.32、101.65、121.98、152.48、203.30 μg·mL-1的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液.按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定各溶液，記錄峰面積.以峰面積對(duì)濃度進(jìn)行線(xiàn)性回歸，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)方程及相關(guān)系數(shù).

1.2.5 重復(fù)性 取奧氮平原料藥和20111217批的片劑，按“2.2”項(xiàng)下的方法制備原料藥溶液和高、中、低9份供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，計(jì)算以標(biāo)示量為基準(zhǔn)的片劑含量及其RSD.

1.2.6 中間精密度 更換測(cè)定時(shí)間、高效液相色譜檢測(cè)儀器和操作人員進(jìn)行含量測(cè)定，具體試驗(yàn)方案同“2.5.1”.

1.2.7 回收率 分別精密稱(chēng)取奧氮平原料藥約8.00、10.00、12.00 mg，置于100 mL容量瓶中，加入處方量輔料，按“2.2”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制備回收率試驗(yàn)溶液.分別取該溶液及奧氮平原料藥溶液，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，記錄峰面積.按外標(biāo)法計(jì)算方法的回收率及其RSD.

1.2.8 溶液穩(wěn)定性 取奧氮平片劑研細(xì)粉末，按“2.2”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制備穩(wěn)定性試驗(yàn)溶液.將其置于室溫條件下，分別于0、1、2、4、6、8、12、24 h取該溶液，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，記錄峰面積.計(jì)算峰面積的RSD，考察24 h內(nèi)溶液的穩(wěn)定性.

1.2.9 檢測(cè)限與定量限 取“2.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液，用流動(dòng)相逐步稀釋?zhuān)础?.1”項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，按S/N=2計(jì)算檢測(cè)限，按S/N=10計(jì)算定量限.

1.2.10 含量測(cè)定與有關(guān)物質(zhì)檢查 含量測(cè)定：分別取“2.2”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液、原料藥溶液和供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，記錄峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算原料藥和片劑的含量.

有關(guān)物質(zhì)檢查：取奧氮平原料藥和片劑研碎粉末，按“2.2”項(xiàng)下原料藥溶液和供試品溶液的配制方法制備成濃度為500 μg·mL-1供試品溶液.精密量取供試品溶液用流動(dòng)相稀釋成質(zhì)量濃度為7.5 μg·mL-1的對(duì)照溶液.按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定各溶液，記錄供試品溶液的色譜圖至主峰保留時(shí)間的3倍，計(jì)算雜質(zhì)峰面積的總和(不包含溶劑峰和輔料峰)，用主成分自身對(duì)照法計(jì)算原料藥和片劑的有關(guān)物質(zhì)含量.

2 結(jié)果與討論

2.1 結(jié)果

2.1.1 專(zhuān)屬性試驗(yàn) 表明在此色譜條件下，輔料與流動(dòng)相對(duì)測(cè)定無(wú)干擾，主藥能與破壞產(chǎn)生的降解產(chǎn)物有效分離(R>1.5)，方法的專(zhuān)屬性良好，結(jié)果見(jiàn)圖1.

2.1.2 線(xiàn)性回歸得標(biāo)準(zhǔn)方程：Y=84.465X-92.104，R=0.999 8(n=7)；表明質(zhì)量濃度在20.33～203.3 μg·mL-1范圍內(nèi)，峰面積與質(zhì)量濃度呈良好的線(xiàn)性關(guān)系.重復(fù)性試驗(yàn)測(cè)得片劑的平均含量為標(biāo)示量的98.54%，RSD為0.61%，表明該方法重復(fù)性良好；中間精密度試驗(yàn)測(cè)得片劑的平均含量為標(biāo)示量的98.07%，RSD為0.89%，證明該分析方法的中間精密度良好.

圖1 奧氮平與降解產(chǎn)物的HPLC色譜圖Fig. 1 Chromatograms of olanzapine and degradation products 注：a. 空白輔料；b. 流動(dòng)相；c. 奧氮平溶液；d. 酸降解；e. 堿降解；f. 氧化降解；g. 高溫降解；h. 光照降解；1-奧氮平峰.

2.1.3 回收率試驗(yàn) 按外標(biāo)法計(jì)算得到方法的平均回收率為100.12%，RSD為0.33%，表明方法準(zhǔn)確度良好，結(jié)果見(jiàn)表1.

表1 奧氮平回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.1.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)測(cè)得峰面積的RSD為0.18%，說(shuō)明在24 h內(nèi)溶液的穩(wěn)定性良好.檢測(cè)限與定量限試驗(yàn)測(cè)得奧氮平的檢測(cè)限為1 ng，定量限為5 ng，表明方法靈敏度高.

2.1.5 含量測(cè)定結(jié)果表明三批原料藥的含量均在98.0%～102.0%之間，三批片劑的含量均在標(biāo)示量的90.0%～110.0%之間，原料藥與片劑的含量符合美國(guó)藥典要求.有關(guān)物質(zhì)檢查結(jié)果表明三批原料藥的總雜質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)均小于0.4%，三批片劑的總雜質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)均小于1.5%，原料藥與片劑的雜質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)符合美國(guó)藥典要求.結(jié)果見(jiàn)表2.

表2 奧氮平含量測(cè)定與有關(guān)物質(zhì)檢查試驗(yàn)結(jié)果

2.2 討 論

a.本實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了相應(yīng)的破壞性試驗(yàn)，結(jié)果表明奧氮平在酸、堿、氧化、高溫和光照的條件下均有不同程度的降解；所產(chǎn)生的雜質(zhì)均能與主藥較好的分離，分離度大于1.5.同時(shí)試驗(yàn)結(jié)果表明在主藥峰之后未出現(xiàn)其他雜質(zhì)峰，因此在有關(guān)物質(zhì)檢查時(shí)可以適當(dāng)縮短分析時(shí)間.

b.本實(shí)驗(yàn)考察了不同的柱溫(25～35 ℃)、不同流速(1～1.5 mL·min-1)、緩沖液與有機(jī)相不同配比(1∶1～1∶1.5)(體積比)的流動(dòng)相系統(tǒng)，結(jié)果表明柱溫為25 ℃、流動(dòng)相為緩沖液(含質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.69%磷酸二氫鈉和質(zhì)量分?jǐn)?shù)1.2%十二烷基硫酸鈉， pH值為2.5)-乙腈(45∶55)(體積比)、流速為1.5 mL·min-1時(shí)，柱效較高，保留時(shí)間為6.2 min，主藥峰與雜質(zhì)峰能夠有效的分離.

c.本實(shí)驗(yàn)還考察了另一種測(cè)定奧氮平的流動(dòng)相體系：緩沖液(含質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.68%磷酸二氫鉀和質(zhì)量分?jǐn)?shù)1%三乙胺， pH值為6.0)-甲醇-乙腈.實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明其分離效果與“3.2”項(xiàng)下所采用方法相差不大，“3.2”項(xiàng)下流動(dòng)相體系更為簡(jiǎn)單，因此采用其作為奧氮平HPLC含量測(cè)定方法的流動(dòng)相.

3 結(jié) 語(yǔ)

本研究在綜合相關(guān)參考文獻(xiàn)和藥典的基礎(chǔ)上，建立了一種簡(jiǎn)單的測(cè)定非經(jīng)典抗精神病藥奧氮平及其片劑的HPLC法，方法學(xué)驗(yàn)證結(jié)果表明方法靈敏度高、重復(fù)性好、專(zhuān)屬性強(qiáng)，適合藥物的含量測(cè)定和有關(guān)物質(zhì)檢查.該方法曾用于奧氮平的處方優(yōu)化和質(zhì)量研究，結(jié)果表明該方法簡(jiǎn)單快捷，適合藥物的相關(guān)分析.

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