祁 茹溫建新程 明汪文鑫肖 宇褚永康林英庭*

(1.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，青島 266109;2.青島市畜牧獸醫(yī)研究所，青島 266100)

外源寡糖(又稱低聚糖)作為一種新型的微生態(tài)飼料添加劑，用量少、純天然、無殘留且穩(wěn)定性強(qiáng)，具有吸附腸道病原菌和發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用的雙重功能，最有可能成為抗生素的替代品。目前國內(nèi)外關(guān)于寡糖添加效果的報道不一。Davis等［4］和 Pettigrew［5］研究發(fā)現(xiàn)，甘露寡糖(mannoseoligosaccharides)在豬體內(nèi)如同其他抗菌生長促進(jìn)劑一樣有效，然而也有報道認(rèn)為并無該效果［6－8］。Liu等［9］報道殼聚糖(飼糧添加160 mg/kg)有降低斷奶仔豬腹瀉率、抑制大腸桿菌生長的功效，但不能有效替代抗生素作為斷奶仔豬生長促進(jìn)劑使用。Dimitroglou等［10］報道，MOS調(diào)節(jié)虹鱒魚腸道微生物群落，進(jìn)而作用于腸道形態(tài)和上皮細(xì)胞刷狀緣。王新峰等［2］研究寡糖對斷奶羔羊瘤胃菌群的影響，結(jié)果表明寡糖能夠改變斷奶羔羊瘤胃菌群結(jié)構(gòu)，其中果寡糖(fructo-oligosaccharides)(飼糧添加0.3%)對羔羊瘤胃液細(xì)菌總數(shù)以及黃化瘤胃球菌(R.Flavefaciens)和琥珀酸絲狀桿菌(F.Succinogenes)數(shù)量均有提高作用。外源寡糖在奶山羊的報道較少，關(guān)于比較不同外源寡糖作用效果的研究亦極少。因此，本試驗(yàn)通過在飼糧中添加不同外源寡糖，研究其對瘤胃微生物區(qū)系的影響，篩選和確定奶山羊用寡糖，為外源寡糖應(yīng)用于奶山羊養(yǎng)殖提供理論指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

甘露寡糖(純度50%)、半乳甘露寡糖(galactomannan-oligosaccharides，純 度 80%)、寡 木 糖(xylo-oligosaccharides，純度70%)、低聚異麥芽寡糖(isomalto-oligosaccharides，純度 90%)、果寡糖(純度90%)均為商業(yè)產(chǎn)品。

1.2 試驗(yàn)動物及分組

選用體況良好、平均體重(32.80 ±2.45)kg、安裝有永久性瘤胃瘺管的6月齡去勢嶗山奶山羊6只，進(jìn)行編號。采用分期分組試驗(yàn)設(shè)計，試驗(yàn)共4期，每期奶山羊分別飼喂基礎(chǔ)飼糧以及基礎(chǔ)飼糧中添加1%(以有效含量計)不同外源寡糖的試驗(yàn)飼糧，按添加寡糖的種類將各期中的試羊分配到6組，試驗(yàn)動物分組見表1。每期23 d，其中預(yù)試期14 d，正試期 9 d。

1.3 基礎(chǔ)飼糧

基礎(chǔ)飼糧配制參照中國肉用山羊飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)(NY/T 816—2004)［11］，基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表2。

表1 試驗(yàn)動物分組Table 1 Grouping of experimental animals

表2 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))Table 2 Composition and nutrient levels of the basal diet(air-dry basis) %

1.4 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)期間奶山羊單欄飼養(yǎng)，每天07：00和17：00分2次等量飼喂，先精后粗，精飼料425 g/d，粗飼料1 000 g/d，自由飲水，各組間飼養(yǎng)管理完全一致。

1.5 瘤胃內(nèi)容物的采集和預(yù)處理

瘤胃內(nèi)容物的采集時間如下：正試期第1天07：00(0 h)、13：00(6 h);第 5 天 09：00(2 h)、15：00(8 h);第 9 天 11：00(4 h)、17：00(10 h)。

由瘤胃瘺管采集不同位點(diǎn)的瘤胃內(nèi)容物，立刻用4層紗布過濾，取5 mL裝入充有CO2氣體的離心管，在超凈工作臺中梯度稀釋并接種培養(yǎng)，用于瘤胃液單位體積內(nèi)細(xì)菌、真菌、纖維素分解菌的計數(shù)。再取1 mL加入4 mL甲基綠染色液(MFS)中固定，以備鏡檢原蟲數(shù)。

1.6 細(xì)菌、真菌、纖維素分解菌和原蟲的計數(shù)

1.6.1 細(xì)菌、真菌、纖維素分解菌計數(shù)

細(xì)菌、真菌、纖維素分解菌采用固體培養(yǎng)基培養(yǎng)后計數(shù)，參照Hungate［12］的滾管法進(jìn)行。

1.6.2 原蟲計數(shù)

原蟲計數(shù)參照《現(xiàn)代反芻動物營養(yǎng)研究方法和技術(shù)》［13］進(jìn)行。

1.7 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計分析應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計分析軟件中的One-way ANOVA進(jìn)行方差分析，LSD進(jìn)行多重比較，采用回歸的曲線估計進(jìn)行回歸分析。結(jié)果均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果

2.1 不同外源寡糖對瘤胃液細(xì)菌總數(shù)的影響

由表3可知，與對照組相比，瘤胃液單位體積內(nèi)細(xì)菌總數(shù)在晨飼前(0 h)僅MOS組顯著提高(P＜0.05)，其余試驗(yàn)組有提高的趨勢，但未達(dá)到顯著水平(P＞0.05);各試驗(yàn)組細(xì)菌總數(shù)在晨飼后2 h降到最低，所有組均在晨飼后4 h達(dá)到峰值，然后緩慢下降，趨于平衡。在整個試驗(yàn)期內(nèi)，MOS組、FOS組的瘤胃液單位體積內(nèi)細(xì)菌總數(shù)處于較高水平。

2.2 不同外源寡糖對瘤胃液纖維素分解菌數(shù)量的影響

由表4可知，晨飼前MOS組瘤胃液單位體積內(nèi)纖維素分解菌數(shù)量較對照組顯著提高(P＜0.05);GMOS組、FOS組在晨飼前，晨飼后 2、4 h均顯著高于對照組和其他試驗(yàn)組(P＜0.05)，它們之間差異不顯著(P＞0.05)。各組均出現(xiàn)先升高后降低的趨勢，晨飼后4 h達(dá)到峰值，然后逐漸降低。整個試驗(yàn)期內(nèi)，GMOS組、FOS組的瘤胃液單位體積內(nèi)纖維素分解菌數(shù)量一直處于較高水平。

表3 不同外源寡糖對瘤胃液細(xì)菌總數(shù)動態(tài)變化的影響Table 3 Effects of different exogenous oligosaccharides on the dynamic change of number of total bacteria in rumen liquid 109CFU/mL

表4 不同外源寡糖對瘤胃液纖維素分解菌數(shù)量動態(tài)變化的影響Table 4 Effects of different exogenous oligosaccharides on the dynamic change of number of rumen liquid cellulose-decomposing bacteria 108CFU/mL

由表5可知，瘤胃液單位體積內(nèi)纖維素分解菌數(shù)量和時間的回歸關(guān)系符合二次曲線模型，各試驗(yàn)組的瘤胃液單位體積內(nèi)纖維素分解菌數(shù)量極小值均高于對照組，提示飼糧中添加外源寡糖可以提高奶山羊瘤胃液單位體積內(nèi)纖維素分解菌數(shù)量。GMOS組和FOS組取極小值時的時間(即對稱軸數(shù)值)均高于對照組，提示添加半乳甘露寡糖和果寡糖延遲了瘤胃液單位體積內(nèi)纖維素分解菌到達(dá)峰值的時間，即增加了較高濃度纖維素分解菌作用于瘤胃內(nèi)容物的時間，且極小值也高于對照組。

表5 瘤胃液纖維素分解菌數(shù)量與時間的回歸分析Table 5 The regression analysis of number of rumen liquid cellulose-decomposing bacteria and time

2.3 不同外源寡糖對瘤胃液原蟲數(shù)量的影響

由表6可知，與對照組瘤胃液單位體積內(nèi)原蟲數(shù)量相比，MOS組在晨飼后2和4 h、XOS組在晨飼后4 h均顯著增加(P＜0.05);整個試驗(yàn)期內(nèi)，MOS組瘤胃液原蟲數(shù)量處于較高水平;各組原蟲數(shù)量呈先下降后上升趨勢，晨飼后2 h下降到最低點(diǎn)，之后開始上升，MOS組和XOS組晨飼后4 h達(dá)到峰值，其余組到晨飼后6 h達(dá)到峰值，之后逐漸下降或趨于平衡。晚飼前(晨飼后10 h)瘤胃液原蟲數(shù)量恢復(fù)到和晨飼前同一水平。

表6 不同外源寡糖對瘤胃液原蟲數(shù)量動態(tài)變化的影響Table 6 Effects of different exogenous oligosaccharides on the dynamic change of number of rumen liquid protozoa 105CFU/mL

由表7可知，瘤胃液單位體積內(nèi)原蟲數(shù)量和時間的回歸關(guān)系符合二次曲線模型，各試驗(yàn)組的瘤胃液原蟲數(shù)量極大值均高于對照組，即飼糧中添加外源寡糖可以提高奶山羊瘤胃液原蟲數(shù)量。

2.4 不同外源寡糖對瘤胃液真菌數(shù)量的影響

由表8可知，與對照組瘤胃液單位體積內(nèi)真菌數(shù)量相比，晨飼前GMOS組(P＜0.01)和FOS組(P ＜0.01)，晨飼后 2 h MOS組(P ＜0.05)、IMO 組(P ＜0.05)、FOS組(P ＜0.05)，晨喂后4 h MOS組(P ＜0.05)，晨飼后6 h FOS組(P ＜0.05)均有顯著提高。各試驗(yàn)組瘤胃液真菌數(shù)量在晨飼后呈上升趨勢，到4 h達(dá)到峰值，然后逐漸下降，在晨飼后8 h略有升高，而后晚飼前有所降低。在整個試驗(yàn)期內(nèi)，MOS組、FOS組的瘤胃液真菌數(shù)量在各試驗(yàn)組間均一直處于較高水平。

表7 瘤胃液原蟲數(shù)量與時間的回歸分析Table 7 The regression analysis of number of rumen liquid protozoa and time

表8 不同外源寡糖對瘤胃液真菌數(shù)量動態(tài)變化的影響Table 8 Effects of different exogenous oligosaccharides on the dynamic change of number of rumen liquid fungi 105CFU/mL

從表9可知，瘤胃液單位體積內(nèi)真菌數(shù)量和時間的回歸關(guān)系符合二次曲線模型，各試驗(yàn)組回歸方程的對稱軸數(shù)值均大于對照組，且極小值均高于對照組，提示添加外源寡糖可以延遲瘤胃液真菌數(shù)量到達(dá)峰值的時間，從而使較高濃度真菌作用于瘤胃內(nèi)容物的時間增加，且到達(dá)峰值的極小值大于對照組的極小值。除MOS組外各試驗(yàn)組二次項(xiàng)系數(shù)均大于對照組，即二次曲線的開口較對照組小。

表9 瘤胃液真菌數(shù)量與時間的回歸分析Table 9 The regression analysis of number of rumen liquid fungi and time

3 討論

3.1 不同外源寡糖對瘤胃液細(xì)菌總數(shù)的影響

本試驗(yàn)條件下，瘤胃液單位體積內(nèi)細(xì)菌總數(shù)分布于8.82×109～10.25×109CFU/mL 之間，屬正常范圍(109～1010CFU/mL)［12］，飼糧添加外源寡糖有提高奶山羊瘤胃液單位體積內(nèi)細(xì)菌總數(shù)的趨勢，但未達(dá)到顯著性水平。這與張學(xué)峰［14］報道的外源性寡糖對瘤胃液細(xì)菌總數(shù)沒有產(chǎn)生顯著性影響的結(jié)果相一致。外源寡糖可以為瘤胃液細(xì)菌提供更多可利用的碳水化合物從而促進(jìn)其增殖，此外，外源寡糖也可以有效改善瘤胃發(fā)酵功能［16］，但不同外源寡糖對瘤胃微生物的增殖效果不同，目前尚無外源寡糖促進(jìn)瘤胃液細(xì)菌增殖機(jī)理的定論，有待進(jìn)一步研究探討。

影響瘤胃液單位體積內(nèi)細(xì)菌總數(shù)的因素很多，除飼糧結(jié)構(gòu)外，還有飼喂頻率、飼喂水平、取樣時間以及動物的個體差異等。但總的來說，細(xì)菌總數(shù)隨攝入可利用能量的上升而增加。Leedle等［15］報道，在各種飼糧的維持水平條件下瘤胃液細(xì)菌總數(shù)是比較穩(wěn)定的，可培養(yǎng)細(xì)菌的數(shù)量在飼喂后減少到40% ～60%(2或4 h降到最低)。本試驗(yàn)結(jié)果顯示瘤胃液單位體積內(nèi)細(xì)菌總數(shù)在飼喂后2 h降到最低，飼喂后4 h達(dá)到峰值，然后緩慢下降，趨于平衡。原因可能是奶山羊進(jìn)食后，大量飼料、唾液和飲水進(jìn)入瘤胃稀釋了原有的瘤胃液，細(xì)菌密度下降，即單位體積內(nèi)瘤胃液中所含的細(xì)菌總數(shù)降低;由于進(jìn)食造成奶山羊瘤胃內(nèi)環(huán)境發(fā)生改變，減緩或抑制了細(xì)菌在短時間內(nèi)的增殖;進(jìn)食2～4 h內(nèi)，瘤胃微生物利用進(jìn)食飼料中的營養(yǎng)物質(zhì)迅速增殖而達(dá)到峰值;之后隨著可利用營養(yǎng)物質(zhì)的消耗以及瘤胃內(nèi)環(huán)境包括pH、氧化－還原電位、二氧化碳分壓、溫度等的逐漸穩(wěn)定，瘤胃液細(xì)菌濃度又逐漸下降，之后趨于動態(tài)平衡。薛峰［17］報道瘤胃液細(xì)菌總數(shù)從飼喂前到飼喂后2 h呈下降趨勢，在2 h到達(dá)最低點(diǎn)之后，逐漸上升到飼喂后4 h達(dá)最高值。這與本試驗(yàn)結(jié)果基本一致。

3.2 不同外源寡糖對瘤胃液纖維素分解菌數(shù)量的影響

粗飼料是反芻動物主要的飼料來源，細(xì)菌和真菌在分解利用纖維素過程中起主要作用，其中纖維素分解菌扮演重要角色［18］。本試驗(yàn)結(jié)果表明，不同外源寡糖提高奶山羊瘤胃液單位體積內(nèi)纖維素分解菌數(shù)量的效果不同，其中半乳甘露寡糖和果寡糖達(dá)到顯著水平。這與外源寡糖的生理生化功能息息相關(guān)，外源寡糖可以提高營養(yǎng)物質(zhì)瘤胃降解率，還可以通過降低瘤胃液pH、氨態(tài)氮(NH3-N)濃度等改善瘤胃內(nèi)環(huán)境，利于瘤胃纖維素分解菌的生長和增殖。不同外源寡糖對奶山羊瘤胃液單位體積內(nèi)纖維素分解菌數(shù)量影響不同，這與寡糖的結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)和純度等有關(guān)。王新峰等［2］報道果寡糖能夠使黃化瘤胃球菌和產(chǎn)琥珀酸絲狀桿菌的數(shù)量提高，而添加低聚異麥芽糖和混合添加2種寡糖對羔羊瘤胃液細(xì)菌總數(shù)和2種纖維降解菌的數(shù)量均有一定的抑制作用，特別是產(chǎn)琥珀酸絲狀桿菌，達(dá)到了顯著水平。

3.3 不同外源寡糖對瘤胃液原蟲數(shù)量的影響

大量體內(nèi)體外試驗(yàn)都表明，原蟲直接參與降解細(xì)胞壁多糖的過程［20］。原蟲數(shù)量變化趨勢可以間接反映纖維素的消化情況。本試驗(yàn)條件下，瘤胃液單位體積內(nèi)原蟲數(shù)量分布于4.65×105～5.08×105CFU/mL 之間，屬正常范圍(105～106CFU/mL)［12］。

原蟲不能利用簡單的含氮化合物合成自身所需要的氨基，其生長必須靠吞噬細(xì)菌獲得氨基酸，合成自身蛋白質(zhì)［21］。本試驗(yàn)條件下，外源寡糖對細(xì)菌總數(shù)無顯著性影響，而甘露寡糖顯著提高了奶山羊瘤胃液單位體積內(nèi)原蟲數(shù)量。推測一方面可能是甘露寡糖促進(jìn)了飼料中蛋白質(zhì)的分解，使得原蟲的蛋白質(zhì)來源增多，從而數(shù)量增多;另一方面可能由于甘露寡糖改善瘤胃內(nèi)環(huán)境利于原蟲增殖的效果優(yōu)于其他外源寡糖。前人研究結(jié)果顯示，甘露寡糖在單胃動物和反芻動物中應(yīng)用效果良好。White等［22］報道，甘露寡糖可以有效抑制大腸桿菌在十二指腸、空腸、盲腸和結(jié)腸的定植，改善斷奶仔豬腸道健康狀況。鮑延安等［23］報道，甘露寡糖可以顯著降低中國荷斯坦奶牛體細(xì)胞數(shù)。整個試驗(yàn)期內(nèi)，瘤胃液單位體積內(nèi)原蟲數(shù)量呈先下降后上升趨勢，這與張學(xué)峰［14］報道的原蟲數(shù)量在晨飼后4 h達(dá)到最低點(diǎn)，隨后逐漸升高，在晨飼后12 h達(dá)到峰值水平略有差異。原因可能是試驗(yàn)所用的寡糖種類、飼喂方式及試驗(yàn)動物等存在差異。

3.4 不同外源寡糖對瘤胃液真菌數(shù)量的影響

瘤胃液厭氧真菌中的絕大部分種屬都能分解纖維素，都具有廣泛的高活性的降解植物細(xì)胞壁的纖維素酶、木聚糖酶、果膠酶和酯酶。瘤胃液厭氧真菌的數(shù)量和生物量的估計對于了解厭氧真菌在瘤胃內(nèi)的定量以及在瘤胃內(nèi)的自然變異規(guī)律非常重要。因此本試驗(yàn)選擇運(yùn)用滾管法計數(shù)瘤胃液單位體積內(nèi)真菌數(shù)量，作為分析厭氧真菌在瘤胃內(nèi)變化規(guī)律的指標(biāo)。

本試驗(yàn)條件下，各組真菌數(shù)量分布于4.48×105～6.02×105CFU/mL之間，均在報道的正常真菌數(shù)量范圍(103～ 105CFU/mL)內(nèi)［24－25］，且甘露寡糖和果寡糖顯著提高奶山羊瘤胃液單位體積內(nèi)真菌數(shù)量。分析原因可能是：真菌生長所需的氮源為和氨基酸形式的氮，外源寡糖可以降低瘤胃NH3-N濃度和pH。瘤胃液單位體積內(nèi)真菌數(shù)量與瘤胃內(nèi)環(huán)境息息相關(guān)，當(dāng)瘤胃處于真菌生長的最佳狀態(tài)時，其增殖速度加快，數(shù)量則相應(yīng)增加。戈婷婷等［3］報道飼糧中添加甘露寡糖可以顯著提高培養(yǎng)液中(微生物蛋白)MCP含量、增加瘤胃產(chǎn)氣量、降低NH3-N濃度。凌寶明等［16］報道灌注果寡糖可以降低生長綿羊的瘤胃液pH、NH3-N濃度，提高揮發(fā)性脂肪酸(VFA)含量和瘤胃液MCP濃度。

本試驗(yàn)條件下，瘤胃液厭氧真菌數(shù)量自晨飼起開始上升，到飼喂后4 h達(dá)到峰值，這與原蟲的存在及外源寡糖的添加存在必然聯(lián)系。表6顯示，添加外源寡糖可以提高瘤胃液單位體積內(nèi)原蟲數(shù)量。瘤胃液中原蟲的存在能夠增加飼料在瘤胃中的滯留時間，并且能夠穩(wěn)定瘤胃環(huán)境，這有益于厭氧真菌的形成［26］，但其機(jī)理有待進(jìn)一步探討。

4 結(jié)論

①飼糧添加外源寡糖有提高奶山羊瘤胃液單位體積內(nèi)細(xì)菌總數(shù)的趨勢，但無顯著性影響。

②半乳甘露寡糖和果寡糖可以顯著提高奶山羊瘤胃液纖維素分解菌數(shù)量。

③甘露寡糖可以顯著提高奶山羊瘤胃液原蟲數(shù)量。

④甘露寡糖和果寡糖可以顯著提高奶山羊瘤胃液真菌數(shù)量。

［1］柏奇D L，狄更生F N，特克H A，等.乳牛學(xué)［M］.金國粹，邱懷，冀一倫，等譯.北京：農(nóng)業(yè)出版社，1988：96 －97.

［2］王新峰，冷青文，李志遠(yuǎn)，等.低聚糖對斷奶羔羊瘤胃菌群的影響［J］.動物營養(yǎng)學(xué)報，2010，22(5)：1396－1401.

［3］戈婷婷，瞿明仁.日糧中不同水平甘露寡糖對錦江黃牛瘤胃微生物體外發(fā)酵的影響［J］.飼料廣角，2010(20)：26 －40.

［4］DAVIS M E，MAXWELL C V，KEGLEY E B，et al.Efficacy of mannan oligosaccharide(Bio-Mos)addition at two levels of supplemental copper on performance and immunocompetence ofearly-weaned pigs［J］.Journal of Animal Science，1999，77(Suppl.1)：63.

［5］PETTIGREW J E.Bio-Mos effects on pig performance：a review［C］//LYONS T P，JACQUES K A.Biotechnology in the feed industry：proceedings of Alltech’s 16th annual symposium.Loughborough：Loughborough University Press，2000.

［6］CROMWELL G L，STAHLY T S，DAWSON K A，et al.Probiotics and antibacterial agents for weanling pigs［J］.Journal of Animal Science，1991，69(Suppl.1)：114.

［7］DAVIS M E，MAXWELL C V，KEGLEY E B，et al.Efficacy of mannan oligosaccharide(Bio-Mos)supplementation with and without zinc oxide on performance and immunocompetence of weanling pigs［J］.Journal of Animal Science，2000，78(Suppl.2)：61.

［8］WHITE L A，NEWMAN M C，CROMWELL G L，et al.Brewers dried yeast as a source of mannan oligosaccharides for weanling pigs［J］.Journal of Animal Science，2002，80：2619 －2628.

［9］LIU P，PIAO X S，THACKE P A，et al.Chito-oligosaccharide reduces diarrhea incidence and attenuates the immune response of weaned pigs challenged with E.coliK88［J］.Journal of Animal Science，2010，88：3871 －3879.

［10］DIMITROGLOU A，MERRIFIELD D L，MOATE R，et al.Dietary mannan oligosaccharide supplementation modulates intestinal microbial ecology and improves gut morphology of rainbow trout，Oncorhynchus mykiss(Walbaum)［J］.Journal of Animal Science，2009，87：3226 －3234.

［11］中國人民共和國農(nóng)業(yè)部.NY/T 816—2004肉羊飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)［S］.北京：中國標(biāo)準(zhǔn)化出版社，2004.

［12］HUNGATE R E.A roll tube method for the cultivation of strict anaerobes［C］//NORRIS J R，RIBBONS D W.Methods in microbiology volume 3B.London：Academic Press Inc.，1969：117 －132.

［13］盧德勛，謝崇文.現(xiàn)代反芻動物營養(yǎng)研究方法和技術(shù)［M］.北京：農(nóng)業(yè)出版社，1991.

［14］張學(xué)峰.外源寡糖在綿羊消化道內(nèi)的降解、轉(zhuǎn)化、利用和流通規(guī)律及其對瘤胃微生物區(qū)系、免疫和營養(yǎng)物質(zhì)消化影響的研究［D］.博士學(xué)位論文.呼和浩特：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)，2007.

［15］LEEDLE J A，BRYANT M P，HESPELL R B，et al.Diurnal variations in bacterial numbers and fluid parameters in ruminal contents of animals fed low-or high-forage diets［J］.Applied and Environmental Mi-crobiology，1982，44(2)：402 －412.

［16］凌寶明，瞿明仁，盧德勛，等.灌注果寡糖對生長綿羊瘤胃發(fā)酵的影響［J］.糧食與飼料工業(yè)，2007(6)：41－44.

［17］薛峰.日糧中粗飼料品質(zhì)對綿羊瘤胃微生物區(qū)系和纖維降解影響的研究［D］.碩士學(xué)位論文.呼和浩特：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)，2007.

［18］劉大程.不同品質(zhì)粗飼料日糧及添加酵母培養(yǎng)物對綿羊瘤胃發(fā)酵及纖維分解菌的影響［D］.博士學(xué)位論文.呼和浩特：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)，2007.

［19］DEHORITY B A，TIRABASSO P A，GRIFO A P.Most-probable-number procedures for enumerating ruminal bacteria，including the simultaneous estimation of total and cellulolyticnumbers in one medium［J］.Applied and Environmental Microbiology，1989，55：2789－2792.

［20］高愛武.分別驅(qū)除厭氧真菌和原蟲對綿羊瘤胃微生物種群及纖維物質(zhì)降解的影響［D］.博士學(xué)位論文.呼和浩特：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)，2008.

［21］張慶茹.瘤胃原蟲對瘤胃營養(yǎng)物質(zhì)代謝的影響研究進(jìn)展［J］.中國牛業(yè)科學(xué)，2006，32(1)：49 －51.

［22］WHITE L A，NEWMAN M C，CROMWELL G L，et al.Brewers dried yeast as a source of mannan oligosaccharides for weanling pigs［J］.Journal of Animal Science，2002，80：2619 －2628.

［23］鮑延安，刑淑芳，徐慶龍.微生態(tài)效應(yīng)添加劑甘露寡糖對中國荷斯坦奶牛產(chǎn)奶量及乳常規(guī)成分的影響［J］.中國奶牛，2009(3)：12 －14.

［24］JOBLIN K N.Isolation enumeration and maintenance of rumen anaerobic fungi in rolltubes［J］.Applied and Environmental Microbiology，1981，42：1119 －22.

［25］ORPIN C G.Invasion of plant tissues in the rumen by the flagellate Neocallimastix frontalis［J］.Journal of General Microbiology，1977，98：423 －430.

［26］王雅倩，俞路，閆寒寒.瘤胃真菌對纖維降解的研究進(jìn)展［J］.飼料工業(yè)，2008，9(5)：41 －43.