周建川 趙麗紅 黃 薇 馮光德 計 成 馬秋剛*

(1.中國農業(yè)大學動物科技學院，動物營養(yǎng)學國家重點實驗室，北京 100193；2.鐵騎力士集團，綿陽 621006)

魚油中含有功能性的營養(yǎng)成分二十碳五烯酸(eicosapntemacnioc acid，EPA)、二十二碳六烯酸(docosahexaenic acid，DHA)等多不飽和脂肪酸(PUFA)，具有促進體內飽和脂肪酸代謝等獨特的生物學功能。由于魚油的不飽和程度高，在貯存過程中，尤其是在高溫高濕的環(huán)境條件容易被氧化，產生有害的初級、次級氧化物，發(fā)生酸敗導致飼料品質下降，直接影響著動物對其利用的效果，過分酸敗會影響飼料安全［1］。近年來，有關于氧化魚油對仔豬［2－3］、育肥豬［4］、種雞［5］、肉雞［1］和魚［6－8］生長性能方面研究報道較多。前人研究表明，動物飼糧中添加魚油可改善動物的生產性能，通過調控飼糧中n－3與n－6型PUFA保持適當的比例，可以不同程度地改善動物對疾病和異物的抵抗能力，增強機體健康。魚油被氧化后，會不同程度地對動物生長性能和機體抗氧化能力產生一定的負面影響，降低動物對疾病的抵抗力，降低動物產品品質。目前尚沒有發(fā)現有關氧化魚油對蛋雞生產性能和蛋品質影響的相關報道。且現行的飼料標準中還沒有魚油質量標準可供參考，許多飼料生產企業(yè)對于魚油的質量控制往往自定標準或參考其他行業(yè)的標準，標準參差不齊，導致許多酸敗魚油應用于飼料生產中。油脂氧化后對蛋雞生產性能及雞蛋品質的相關研究極為匱乏，而氧化魚油對蛋雞機體抗氧化酶活性的影響很少見報道。本文以氧化魚油為研究對象，探討不同氧化程度的魚油對蛋雞生產性能、蛋品質及機體抗氧化能力的影響，為蛋雞飼料生產中魚油的質量控制提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 氧化魚油的制備

在 魚 油 中 添 加 Fe2+30mg/kg、Cu2+15 mg/kg、H2O2600 mg/kg和0.3%的水、充分混合后，于37℃條件下通氧攪拌氧化168 h，獲取過氧化物值(POV)為1 200.10 meq O2/kg的氧化魚油，制好后的氧化魚油于20℃條件下儲存，飼喂前一周取樣配制。

1.2 試驗設計及試驗飼糧

試驗選擇720只體重相近的38周齡海蘭灰蛋雞，隨機分為4個組，每組6個重復，每個重復30只雞。將新鮮魚油和POV為1 200.10 meq O2/kg的氧化魚油按不同比例分別加入基礎飼糧中，組成新鮮魚油組(未添加氧化魚油，FFO組)、0.25%氧化魚油組(OFO1組)、0.50%氧化魚油組(OFO2組)和1.00%氧化魚油組(OFO3組)。

以玉米－豆粕為基礎配制飼糧，將POV為1 200.10 meq O2/kg的氧化魚油分別按12.5%、25.0%和50.0%的比例與新鮮魚油(POV為0.40 meq O2/kg)進行混合，再將新鮮魚油和混合魚油按2%的比例分別加入到玉米－豆粕型基礎飼糧中。試驗開始時先混合好除魚油外的其他組分。在每周開始時按要求加入已經配制好的新鮮或氧化魚油，混合均勻制成試驗飼糧，基礎飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗采用雙層鍍鋅雞籠飼養(yǎng)，每個重復為一籠。每天光照16 h，自由采食，自由飲水。溫度、免疫程序按常規(guī)進行，試驗期為4周。

1.4 測定指標及方法

1.4.1 氧化魚油指標測定

油脂氧化程度的評價通常用酸價(AV)、POV、皂化價(SV)、硫代巴比妥酸反應物(TBARS)和碘價(IV)指標。POV、AV、SV和IV測定方法分別參照 GB/T 5538—2005、GB/T 5530—998、GB/T 5534—1995 和 GB/T 5532—1995的方法，TBARS 測定方法按黃偉坤［9］的方法。

1.4.2 生產性能

每日以重復為單位記錄產蛋數、破蛋數、產蛋量、雞只死亡數和耗料量，試驗結束時計算入舍母雞產蛋率、平均蛋重、平均日采食量、死淘率。

表1 基礎飼糧組成及營養(yǎng)水平(風干基礎)Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet(air－dry basis) %

1.4.3 蛋品質

蛋殼顏色:蛋殼顏色用3個指標進行表示。L值:亮度值，由白色到黑色的程度；a*值:紅度值，由紅色到綠色的程度；b*值:黃度值，由黃色到藍色的程度。

蛋黃顏色:蛋黃色澤用羅氏比色扇(Roche yolk color fan，rycf)測定。

蛋白高度:用蛋白高度測定儀測量蛋黃邊緣與濃蛋白邊緣的中點的蛋白高度，避開系帶，測量成正三角型的3個點，取平均值。

哈氏單位:哈氏單位=100×log(H－1.7×W×0.37+7.57)，式中H為蛋白高度(mm)，W為蛋重(g)。

1.4.4 抗氧化指標

試驗結束時，每重復隨機取3只雞，頸靜脈取血抗凝，用試劑盒測定全血中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH－Px)、過氧化氫酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)的含量，試劑盒購自南京建成生物功能研究所。

1.5 數據分析

使用SPSS 10.0統(tǒng)計軟件ANOVA對各指標進行方差分析，LSD進行多重比較，以P＜0.05為顯著平準。

2 結果

2.1 氧化魚油對蛋雞生產性能的影響

試驗制作的氧化魚油各指標測定結果見表2，測定結果表明本試驗新鮮魚油氧化168 h后其POV 為1 200.10 meq O2/kg。

表2 氧化魚油各指標測定結果Table 2 Results of antioxidant indices in oxidized fish oil

氧化魚油對蛋雞生產性能的影響見表3。飼喂氧化魚油第1、2、3、4周后，隨氧化魚油添加量的增加，平均蛋重有下降的趨勢，其中OFO3組平均蛋重顯著低于FFO組(P＜0.05)。試驗全期，OFO1、OFO2和OFO3組平均蛋重比FFO組分別降低了0.9%、0.9%和1.7%(P＜0.05)。氧化魚油對蛋雞產蛋率、平均日采食量和料蛋比均沒有顯著影響(P＞0.05)。

2.2 氧化魚油對蛋品質的影響

由表4可見，氧化魚油對雞蛋蛋黃顏色有一定影響，隨著氧化魚油添加量的增加蛋黃顏色下降，其中OFO3組蛋黃顏色顯著低于FFO組(P＜0.05)。與FFO組相比，OFO1、OFO2和 OFO3組雞蛋哈氏單位顯著低于FFO組(P＜0.05)，但各氧化魚油組雞蛋哈氏單位差異不顯著(P＞0.05)。氧化魚油對蛋殼L值、a*值和b*值以及蛋白高度沒有顯著影響(P＞0.05)。

2.3 氧化魚油對蛋雞血清抗氧化指標的影響

由表5可知，與 FFO組相比，OFO1、OFO2、OFO3組蛋雞血清 GSH－Px活性分別降低了2.01%、4.56%和12.88%，其中OFO3組顯著低于其他各組(P＜0.05)。氧化魚油提高了蛋雞血清MDA含量，其中OFO3組MDA含量顯著高于其他各組(P＜0.05)。氧化魚油對蛋雞血清SOD和CAT活性沒有顯著影響(P＞0.05)。

3 討論

魚油的氧化程度對動物生產性能的影響已有一些學者進行了研究，多數研究表明氧化油脂損害動物的生產性能、降低營養(yǎng)物質的消化吸收利用率。袁施彬等［10］研究發(fā)現，在斷奶仔豬飼糧中添加3%的POV為1 065.74 meq O2/kg的氧化魚油可誘導氧化應激，引起生產性能和養(yǎng)分利用率的下降，氧化應激效應明顯，使仔豬平均日增重降低了8.16%，料重比提高了9.22%，粗蛋白質表觀消化率和表觀利用率下降了21.91%和30.55%，干物質和粗脂肪表觀消化率分別降低了13.05%和35.18%。任澤林等［11］研究氧化魚油對鯉魚生產性能和肌肉組織結構的影響，表明氧化魚油損害鯉魚生產性能，即降低了鯉魚增重率及增加飼料系數。本試驗研究結果也表明，蛋雞飼糧中添加1%的POV為1 200.10 meq O2/kg的氧化魚油顯著降低了平均蛋重，分析其主要原因是氧化應激降低了動物對養(yǎng)分的利用率，最終導致生產性能下降。

蛋黃顏色反映了母雞體內抗氧化的能力。本試驗發(fā)現飼糧氧化魚油對蛋雞蛋黃顏色有一定影響，隨著飼糧氧化魚油添加量的增加蛋黃顏色降低，蛋雞飼糧中添加1%的POV為1 200.10 meq O2/kg的氧化魚油顯著降低蛋黃顏色，分析其原因可能是由于氧化魚油降低了機體內抗氧化酶的活性，加速葉黃素被氧化，從而降低了色素的沉積［12］。哈氏單位是衡量雞蛋蛋白質品質的重要指標。哈氏單位值越大說明蛋白質越黏稠，品質越好。本試驗研究不同濃度的氧化魚油對雞蛋哈氏單位的影響，與新鮮魚油組相比不同濃度的氧化魚油組顯著降低了雞蛋哈氏單位。也有研究表明飼料中添加抗氧化劑對蛋殼顏色有顯著改善作用，原因是抗氧化劑保護飼料中的維生素A、D和E，并且減少脂肪氧化降低自由基對機體的生物膜的氧化損傷，從而提高蛋殼顏色。

表3 氧化魚油對蛋雞生產性能的影響Table 3 Effects of oxidized fish oil on performance of laying hens

表4 氧化魚油對飼喂4周后蛋雞蛋品質的影響Table 4 Effects of oxidized fish oil on egg quality of laying hens after feeding 4 weeks

表5 氧化魚油對飼喂4周后蛋雞血清抗氧化指標的影響Table 5 Effects of oxidized fish oil on serum antioxidant indexes of laying hens after feeding 4 weeks

體內抗氧化酶的活力可以反映機體氧化－抗氧化狀態(tài)，從側面體現動物的健康狀態(tài)。細胞在需氧代謝過程中，產生大量的活性氧族(ROS)，如O2－、H2O2、OH等。正常情況下機體內部的氧化與抗氧化能力保持動態(tài)平衡［13］。如果動物機體的抗氧化體系不能及時清除ROS，就會產生氧化應激，破壞生物大分子，引起細胞結構和功能的異常［14］。在許多對ROS敏感的物質中，PUFA的敏感性高于其他物質，通常認為脂質過氧化是細胞過氧化損傷的主要原因［15］。脂質過氧化最普遍的檢測指標是醛過氧化產物MDA的含量。研究表明，給試驗動物飼喂氧化魚油可使動物機體ROS大量產生，MDA含量增加，體內SOD、GSH－Px等活性降低，誘導氧化應激［16］。本試驗研究發(fā)現，蛋雞飼糧中添加1%的氧化魚油顯著提高了血清MDA含量，降低了GSH－Px活性。袁施彬等［17］研究5%氧化魚油(過氧化值為786.50 meq O2/kg)對斷奶仔豬肝臟抗氧化酶活性的影響，發(fā)現氧化魚油可以對斷奶仔豬造成不同程度的氧化應激，降低了試驗豬肝臟抗氧化酶活性和提高了MDA含量。氧化魚油使抗氧化酶的活性降低的原因可能是氧化魚油導致細胞膜損傷，細胞中氧自由基等生物活性物質的濃度降低，降低了抗氧化酶反應底物的濃度，進而降低GSH－Px的活性。劉雯雯等［4］在育肥豬飼糧中添加氧化魚油及硒和維生素E研究氧化魚油對育肥豬后期生產性能和冷藏生豬肉肉質的影響以及硒和維生素E的抗氧化作用，研究發(fā)現油脂在平均日增重、滴水損失、肉色a*值、SOD和GSH－Px活性上表現顯著的互作效應，這與本試驗結果類似。

4 結論

①飼料中添加1%的POV為1 200.10 meq O2/kg的氧化魚油顯著降低雞蛋的平均蛋重，降低蛋黃顏色和哈氏單位，使蛋品質變差。

②飼料中添加1%的POV為1 200.10 meq O2/kg的氧化魚油顯著降低蛋雞血清GSH－Px活性，著提高了血清中MDA含量，使機體抗氧化能力降低，抵抗疾病的能力下降。

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